三七总皂苷中人参皂苷 Rd检测方案(液相色谱仪)

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实验部分 采用安捷伦 Poroshell 120 EC-18色谱柱对三七总皂苷进行快速液相色谱分析 应用简报中药 作者 摘要 ( Yun Zou ) 安捷伦科技(上海)有限公司 英伦路412号 外高桥保税区 中国上海，200131 将采用安捷伦 ZORBAX Eclipse Plus C18 (4.6×250 mm， 5 um)色谱柱分析三七总皂苷的传统方法转移到安捷伦 Poroshell 120 EC-C18 (4.6×75 mm， 2.7 um)色谱柱上。梯度洗脱时间由60分钟降至18分钟。转移后的方法快速、高效，使极难分离的人参皂苷Rg1和Re组分对的分离度也达到了2.11。另外，系统背压低于 270 bar， 因此该分析可以在常规 HPLC 仪器上进行。 前言 三七 (Panax notoginseng， 也称 San Qi) 是一种五加科植物。它能够影响血液循环，是一种治疗出血性疾病的传统中草药[1]，也可以用作补品。三七中的皂苷大约占其总重量的8-12%。其主要生物活性成分三七总皂苷常用来治疗冠心病、心绞痛、中风和动脉硬化[2，3]。三七总皂苷包含一些活性组分，如三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1、Rb1、Re和Rd。皂苷的分析对于评价三七及其中药制剂的质量非常重要。 当采用常规液相色谱柱，按照《中国药典》方法分析三七总皂苷时[4]， HPLC 运行时间通常超过60分钟。安捷伦 Poroshell 120 EC-C18 (2.7 pm)色谱柱填充了表面多孔填料，具有与亚 2 pm 全多孔填料色谱柱相似的性能，可以实现快速分离，并且柱压低。本应用报告介绍了一种采用 Poroshell 120 EC-C18色谱柱， 在Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统上分析三七皂苷R1、人参皂苷 Rg1、Re、Rb1 和 Rd 的快速质量控制方法。与常规方法相比，该方法快速、高效、分离度高，溶剂消耗也大大减少。 分析采用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统，包括一套二元泵(G4220A)、一个柱温箱 (TCC， G1316C)、、一台自动进样器(G4226A)和一台二极管阵列检测器 (DAD， G4212A) 。 色谱柱 Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18， 4.6 × 250 mm， 5 pm (部件号959990-902)Agilent Poroshell 120 EC-C18， 4.6 ×75 mm， 2.7 um (部件号697975-902) 化合物 目标化合物及其结构见图1。用70%的甲醇水溶液配制浓度为2.5 mg/mL的样品溶液。三七总皂苷购于当地一家中药店。称取25 mg样品粉末置于 10 mL 容量瓶中， 加70%的甲醇水溶液将其溶解并定容至刻度。用 0.45 pm 再生纤维素膜过滤器(部件号5064-8221)对上述溶液进行过滤，然后取滤液直接进样到 HPLC系统。 结果与讨论 采用安捷伦ZORBAX Eclipse Plus C18(4.6×250mm， 5pm)色谱柱，按照2010年版《中国药典》中的方法测定三七总皂苷。分离三七皂苷R1、人参皂苷 Rg1、Re、Rb1 和 Rd用时约60分钟。目标化合物实现基线分离且峰形良好。安捷伦Poroshell 2.7 um 颗粒色谱柱具有与亚 2 um全多孔米粒色谱柱相似的柱效，但柱压更低。采用安捷伦 Poroshell 120 EC-C18 (4.6×75 mm， 2.7 um)色谱柱，可以快速实现方法的转移和优化。如图2所示，分析时间间60分钟降至18分钟，同时难分离组分对 Rg1 和 Re的分离度得到改善，并且 Rg1的理论塔板数更高，超过了2010年版《中国药典》的要求 (N>6000)。采用安捷伦 Poroshell 120 EC-C18 (4.6×75mm， 2.7um) 色谱柱时，柱压低于270 bar， 非常适合在 400 bar的 HPLC 上运行。另外，溶剂的消耗也大大减少，降低了分析费用。 图2.采用安捷伦 ZORBAX Eclipse Plus C18 (4.6×250mm， 5pm) 色谱柱和安捷伦 Poroshell 120 EC-C18 (4.6×75mm， 2.7 pm)色谱柱分析三七总皂苷的叠加色谱图 结论 采用安捷伦 ZORBAX Eclipse Plus C18 (4.6×250 mm， 5 pm)色谱柱，按照传统方法分析了三七总皂苷。采用更短的安捷伦Poroshell 120 EC-C18 色谱柱可以大大缩短分析时间，并获得更好的分离和峰形，从而节省大量时间和分析费用。安捷伦Poroshell 120 色谱柱的柱效超过了2010年版《中国药典》中分析三七总皂苷的相关要求。本方法适用于评价三七及其中药制剂的质量。 ( 参考文献 ) ( 1. Wei，J.X.， Du， Y.C. (1996 ) Modern science research and application of Panax notoginseng. Yunnan Science and T echnology Press， Kunming， China. ) ( 2. Li SH， Chu Y ( 1999) Anti-inflammatory effects of to t alsaponins of Panax notoginseng. Acta Ph a rmacol.， 20 ： 551- 554. ) ( 3. Yuan， J.Q. ， Guo， W.Z. ， Yang B.J . (1997) 1 11 1 6 6 c cases of coronary angina pectoris treated with powde r composed ofradix ginseng， radix notoginseng and succinum. J T radition China Med.， 17：14-17. ) 更多信息 ( 4. National Pharmacopoeia Committee ( 2010) ) Chinese Pharmacopoeia. Chemical Industry Press， B eijing， PR China， 369. ) 这些数据代表了典型的结果。如需了解更多有关我们产品和服务的信息，请访问我们的网站： www.agilent.com/chem/cn。 www.agilent.com/chem/cn 安捷伦公司对本资料中可能存在的错误或由于提供、展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任。 本资料中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。 ◎安捷伦科技有限公司， 2012 2012年1月17日，中国印刷 5990-9632CHCN Agilent Technologies Agilent Technologies 将采用安捷伦ZORBAX Eclipse Plus C18（4.6 × 250 mm，5 μm）色谱柱分析三七总皂苷的传统方法转移到安捷伦Poroshell 120 EC-C18（4.6 × 75 mm，2.7 μm）色谱柱上。梯度洗脱时间由60 分钟降至18 分钟。转移后的方法快速、高效，使极难分离的人参皂苷Rg1 和Re 组分对的分离度也达到了2.11。另外，系统背压低于270 bar，因此该分析可以在常规HPLC 仪器上进行。