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第31卷第2期2012年2月分析试验室Chinese Journal of Analysis LaboratoryVol.31.No.22012-2 第31卷第2期2012年2月Vol.31.No.22012-2分析试验室Chinese Journal of Analysis Laboratory 快速溶剂萃取-超高效液相色谱法分析鱼肉中喹乙醇 赵 粼*,阙 斐,刘绿叶 (1.浙江经贸职业技术学院应用工程系,杭州310028;2.戴安中国有限公司上海实验室,上海200210) 摘 要:以甲醇为溶剂,采用 ASE 快速、高压萃取鱼肉中喹乙醇,并实施了自动在线净化过滤,色谱分析采用了乙醇(色谱级)为流动相,超快速液相色谱法进行分析。喹乙醇的标准工作溶液的线性回归方程为y=0.0358x+0.0019,相关系数r=0.9999,线性范围为0.1~2.0pg/mL,方法检出限(以信噪比(S/N=3)计算)为5.0pg/kg,样品加标回收率平均值(n=3)为88%,同时对6个平行样进行精密度试验,保留时间与峰面积的 RSD 值分别为0.21%和2.0%,重现性较好。方法可以用来快速分析鱼肉等样品中的喹乙醇。 关键词:快速溶剂萃取;超高效液相色谱;喹乙醇;鱼肉 中图分类号:0657.7 文献标识码:A 文章编号:1000-0720(2012)02-010-03 喹乙醇(Olaquindox)又名喹酰胺醇,属喹恶啉1,4-二氧化物类药物,是一种畜禽及水产动物促生长的药物添加剂,具有抗菌和促生长作用,常被用来添加在饲料中,用于促进禽畜类的生长。但过量使用或不正当使用,会导致喹乙醇在肉制品中残留,在被人食用后,会对人体产生影响,毒理实验研究表明,喹乙醇具光敏毒性、致畸性和致癌性。目前,常用的分析检测方法是采用超声或振荡提取后净化、过柱2],利用反相液相色谱法分析。前处理提取溶剂通常为乙乙,提取后,用正己烷去除油脂,然后,旋蒸、离心、过滤,定容,待上液相色谱仪进行分离、定量。色谱分析条件常采用甲醇或乙腈作为流动相,C18分离柱,7-8 min 分析完毕3。 本文前处理采用了快速溶剂(ASE)进行加温、加压萃取,大大缩短了提取时间,提高了提取效率,并增加了自动在线净化、过滤等步骤,缩减了提取时间和溶剂消耗,减少了超声提取后后期带来的繁琐手工操作。同时,上机分析采用乙醇为流动相超高效液相色谱法进行分析,目标化合物在1.5 min出峰,3 min 内分析完毕,一方面大大节省了整个 分析时间,另一方面也减少了乙腈等有毒溶剂的用量4]。 1实验部分1试剂与材料 甲醇、乙醇、正乙烷(色谱纯);硅藻土(Dionex公司):将硅藻土(75~150p.m)放入马福炉,于550℃灼烧3 h,移至干燥器中冷却,装人密封容器保存。中性氧化铝:将中性氧化铝(75~150 pm)放人马福炉,于550℃灼烧3h。移至干燥器中冷却,装人密封容器保存。喹乙醇标准储备液。其他所用试剂未特别注明均为分析纯。实验用水均为超纯水。 1.2 仪器与设备 ASE350 快速溶剂萃取仪(Dionex公司):萃取净化条件见表1。 超高效液相色谱仪(Dionex UPLC Ultimate3000),液相色谱条件:色谱柱:Acclaim PA2(C18,2.2um, 2.1×50mm);流动相:乙醇/10 mmoL 乙酸铵(10/90),0.4 mL/min,等度;色谱柱温度:60℃;检波长:380nm;进样量:1pL。 ( 收稿日期:2011-06-13;修订日期:2011-07-20 ) ( 基金项目:2011浙江省教育厅科研项目(Y201119659)资助 ) ( 作者简介:赵 粼(1980-),女,讲师;E-mial: bol u ob@ sina. com ) 表1 ASE 萃取净化条件 Tab. 1 The extraction and cleaning conditions of ASE 条件 第一步脱脂 第二步萃取 溶剂 正已烷 甲醇或乙醇 温度/℃ 压玉/MPa 静态萃取时间/min 冲洗体积/% 100 吹扫时间/s 静态循环次数 1 萃取池体积/mL 22 1.3 实验方法 标准储备液配制:准确称取适量的喹乙醇标准品,用5%甲醇溶液配成浓度约1 mg/mL的标准储备液。如喹乙醇不溶,可超声使其溶解。喹乙醇标准工作液:将储备液用5%甲醇溶液稀释为含喹乙醇0.1~2.0 pg/mL的标准工作液,放放在冰箱中,避光保存。 样品前处理:将鱼去除鱼鳞和骨头,取出鱼肉用匀浆机打碎,取5.0g左右,加人助滤剂5.0g,混和后,再加入5.0g中性氧化铝,放入到快速溶剂萃取仪22mL 萃取池中,萃取池底部加人一片纤维素滤膜。按“1.2”中萃取条件经自动萃取净化后,将萃取液旋转至近干,用流动相定容,过0.22 um针孔滤膜待上机使用。 2 结果与讨论 2.1 ASE 萃取净化条件选择 肉制品或饲料中喹乙醇的提取,通常采用乙腈超声或振荡提取,提取后,一般采采 HLB固相萃取小柱净化喹乙醇试样提取液5,或采用自制的填充的中性氧化铝小柱,过柱净化61。前者使用 HLB SPE 小柱,分致分析成本大大增加,且增加了分析时间;后者,由于采用自制填充的小柱等过柱装置,重现性与回收率不能得到很好的保证,且给实验室环境带来一定的污染。因此本文采用了 ASE 密闭加温加压提取7.8],为了避免大量使用乙腈,本文采用了乙醇与甲醇进行替代试验,进行了尝试性分析。按照“1.2”方法对样品进行了提取与在线净化,整个时间缩短至15min,提取用试剂(乙醇或甲醇)减少至55mL,净化用正已烷减少至25 mL。通过提取后回收率比较发现,使用甲醇提取效率要高于乙醇,达到88%。 2.2 色谱条件选择 参照国标及相关文献方法3],本文采用了乙醇和水为流动相(“,采用 UHPLC 与亚微米粒径细径柱进行了分析,柱温选择了60℃。选用乙醇代替甲醇或乙腈作为流动相,为了达到绿色色谱的概念,减少有毒试剂的使用。但乙醇的粘度较大,为了降低柱压,及达到快速分离的效果,最后把柱温增加到了60℃,从分离效果来看,与甲醇类似,但峰宽相对变宽。另外,由于该方法有机相比例为10%,因此,为了保护色谱柱,选用了更亲水的C18柱-PA2柱,相对普通 C18柱,PA2柱上喹乙醇出峰时间更快,峰形更对称。 2.3 标准溶液分析 按照“1.2”提取方法与“1.3”分析条牛,标准溶液色谱图见图1。对标准工作溶液进行线性回归分析,以峰面积y对浓度x(ug/mL)进行回归计算,得到线性回归方程为y=0.0358x+0.0019,相关系数r=0.9999,线性范围为0.1~2.0pg/mL。以信噪比(S/N=3)计算方法检出限为5.0pg/kg。 图1 标准工作溶液色谱图 Fig.1 The LC chromatogram of Olaquindox instandard solution 2.4 精密度考察 将空白样品添加喹乙醇至最终浓度为0.5pg/mL,个6个平行样,进行变异性统计分析,结果表明:喹乙醇保留时间的变异系数为0.21%,峰面积的变异系数为2.0%,重现性较好。 2.5 样品测定及加标回收实验 按照“1.3”节实验方法,对样品进行前处理并 分析测定,采用峰面积外标法定量。同时,为检验方法的准确性,作了3个加标回收试验。结果表明:样品中未检出目标化合物喹乙醇,通过3个加标回收试验,平均回收率为87.9%,加标回收谱图见图2,分析结果见表2。 图2 样品加标回收测定谱图 Fig. 2 The LC chromatogram of thespiked sample 表2样品分析结果 Tab. 2 The analysis results of sample 保留时间 分析物 样品含量 加标浓度 加标回 t/min p/(pg/mL) p/(pg/mL) 收率/% 1.50 喹乙醇 未检出 1.0 87.9 ( 参考文献 ) ( [1] 吴玉杰,陈冬梅,陶燕飞.分析科学学报,2009, 25(4):427 ) ( [2] 张小军,郑 斌,陈雪昌,等.食 品 食学,2010, 31(24):289 ) ( 金晓峰.饲料工业,2009,30(23):41 ) ( 付春梅,李章万,刘三康, 等. 色 谱,1999, 17(5):466 ) ( 罗 杨,张剑勇.中国饲料,2006,(12):35 林 ) ( 黎,谢丽琪,欧阳姗.分析试验室,2010, 29(2):38 ) ( [7] 喻凌寒,宋之光,陈江韩.分 析 试验室,2006, 25(8):68 ) ( [8] 李波平,林勤保,宋欢.应用化学,2008, 25(1):63 ) ( [9] 杨文文.中 国 饲料,2006,(20):33 ) Determination of olaquindox in fish by ASE-UHPLC ZHAO Lin*', QUE Fei and LIU Lu-ye’(1. The Department of Applied Engineering, ZheJiang Economic andTrade Polytechnic, Hangzhou 310028; 2. Dionex (Shanghai) Instrument Ltd., Shanghai 201210), FenxiShiyanshi,2012,31(2):10~12 Abstract: An analytical method for the determination of olaquindox in fish samples by ASE and UHPLC wasdeveloped. The results showed that the linear regression equation was y=0.0358x +0.0019, the correlationcoefficient was above 0.9999, and the calibration curve was linear in the range of 0. 10~2.0pg/mL, and thedetection limit of the method (calculated with S/N=3) was 5. 0pg/mg. Then a sample was analyzed with thismethod, and the content was undetected. The average recovery (n=3) of the spiked sample was 88%, and therelative standard deviations of retention time and peak area of six samples were 0.21% and 2.0%, respectively. Keywords: Olaquindox; ASE; UHPLC; Fish 快速溶剂萃取-超高效液相色谱法分析鱼肉中喹乙醇 作者:赵粼, 阙斐,刘绿叶,, ZHAO Lin,QUE Fei,LIU Lu-ye作者单位:赵粼,阙斐, ZHAO Lin,QUE Fei(浙江经贸职业技术学院应用工程系,杭州,310028),刘绿叶,LIU Lu-ye(戴安中国有限公司上海实验室,上海,200210)刊名:分析试验室室 ISTICPFKU英文刊名:Chinese Journal of Analysis Laboratory年,卷(期):2012,31(2) ( 参考文献(9条】 ) ( 1 .吴玉 杰 ; 陈 冬梅; 陶 燕飞 查 看 详 情 2 0 0 9(04) ) ( 2. 张 小 军 ; 郑斌; 陈雪昌查 看 详情 2 01 0(24) ) ( 3. 金晓 峰 查 看详情 200 9(23) ) ( 4. 付 春 梅 ;李 章 万 ;刘三 康 查 看 详 情 19 9 9(05) ) ( 5. 罗杨;张剑 勇 查 看 详 情20 0 6(12) ) ( 6 .林 黎 ; 谢 丽 琪 ; 欧阳 姗 查 看 详 情 201 0(02) ) ( 7. 喻凌寒 ; 宋之光; 陈 江 韩 查 看详情 20 0 6(08) ) ( 8. 李波平;林勤 保; 宋欢 查 看 详 情 2 00 8(01) ) ( 9. 杨 文 军 查 看详情 20 0 6(20) ) ( 本文 链 接: htt p ://d . w a n fa n g d a ta. c o m .c n / Pe r i o d i c al f x s ys20 12 0 2 0 03. a sp x ) 数据 本文前处理采用了快速溶剂(ASE)进行加温、加压萃取,大大缩短了提取时间,提高了提取效率,并增加了自动在线净化、过滤等步骤,缩减了提取时间和溶剂消耗,减少了超声提取后后期带来的繁琐手工操作。同时,上机分析采用乙醇为流动相超高效液相色谱法进行分析,目标化合物在1.5 min出峰,3 min内分析完毕,一方面大大节省了整个分析时间,另一方面也减少了乙腈等有毒溶剂的用量分析时间,另一方面也减少了乙腈等有毒溶剂的用量。
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赛默飞色谱与质谱为您提供《鱼肉中喹乙醇检测方案(快速溶剂萃取)》,该方案主要用于水产品中兽药残留检测,参考标准《暂无》,《鱼肉中喹乙醇检测方案(快速溶剂萃取)》用到的仪器有赛默飞Dionex™ ASE™ 350快速溶剂萃取仪、赛默飞UltiMate3000 二元快速分离系统液相色谱。
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