乳制品中三聚氰胺检测方案(液质联用仪)

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背景 三聚氰胺是一种三嗪类含氮杂环有机化工原料，不可用于食品加工或食品添加剂。 如果长期摄入，，可导致肾衰竭、肾结石，并可诱发膀胱癌。但是，由于其氮含量高，有不法商贩为了从中谋取不法利润，私自在乳制品中添加三聚氰胺从而提高乳制品的蛋白质表象含量。2007年美国宠物饲料致死猫狗事件和2008年三鹿奶粉事件，都是因违法添加三聚氰胺导致的。目前，三聚氰胺已严禁直接用于食品。国标 GB/T 22388-2008原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法中规定了原料乳及乳制品中三聚氰胺的检测方法。 样品前处理方法提取 液态奶、奶粉、酸奶、冰淇淋和奶糖等 称取1g(精确至0.01g)试样于50 mL具塞塑料离心管中，加入8mL三氯乙酸溶液和2mL乙腈，超声提取10 min， 再振荡提取10 min后，以不低于4000 r/min离心10 min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，做待净化液。 奶酪、奶油和巧克力等 称取1g(精确至0.01g)试样于研钵中，加入适量海砂(试样质量的4倍~6倍)研磨成干粉状，转移至50mL具塞塑料离心管中，加入8 mL三氯乙酸溶液分数次清洗研钵，清洗液转入离心管中，再加入2mL乙腈，超声提取 10 min， 再振荡提取 10 min 后，以不低于4000 r/min 离心10 min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，做待净化液。 注：若样品中脂肪含量较高， 可以用三氯乙酸溶液饱和的正己烷液-液分配除脂后再用SPE 柱净化。 净化 将上述待净化液转移至固相萃取柱中。依次用3 mL 水和3mL甲醇洗涤，抽至近干后，用6mL氨化甲醇溶液洗脱。整个固相萃取过程流速不超过 1 mL/min。洗脱液于50℃下用氮气吹干，残留物(相当于1g试样)用1mL流动相定容，涡旋混合1 min， 过微孔滤膜后，供LC-MS/MS测定。 LC-MS/MS 方法 液相色谱参数 色谱柱： Brownlee SPP HILIC， 100 mm* 2.1 mm， 2.7um((货号：N9308438) 柱温：45℃ 流动相：A：乙腈，B： 5mM乙酸铵溶液流速：0.4 mL/min 运行时间：6min 梯度洗脱：洗脱程序见表1： 表1.液相梯度洗脱条件 Time/min A/% B/% 0.00 95 5 0.50 95 5 2.50 60 40 3.00 60 40 3.10 95 5 6.00 95 5 质谱参数 以下参数以 PerkinElmer QSight TM200 系列为例，三聚氰胺质谱参数见表2。 表2.三聚氰胺质谱参数 世咖 化合物 英文名称 CAS No. 保留时间 /min MRM离子 对 EVN CE/eV 1 三聚氰胺 Melamine 108-78-1|2.05 127.0/68.1 35 -40 127.0/85.0 35 -26 离子源参数： 离子源模式：电喷雾离子源，正离子模式 (ESI+) 反吹气：775 雾化气：200 离子源温度：：2450c 离子源喷雾电压：5500V 实验结果 按照上述确定的实验条件，得到三聚氰胺色谱图，见图1。EIC +MRM 127.00/85.00 (2 pairs) CC：-26V Exp 1 图1.三聚氰胺提取离子色谱图 标准曲线线性信息和在低浓度下 (0.01 ng/mL)重现性数据见表3。标准工作曲线的浓度为：0.01，0.02，0.05，0.1，0.2，0.5，1，2， 5， 10 ng/mL。图2为三聚氰胺的标准曲线图。 结论 表3.标准曲线线性及重现性数据 PerkinElmer QSight 200M系统完全满足原料乳与乳制品中三聚氰胺的日常检测工作。该系统离子源具有自清洁功能以及质谱接口 HSID 热源去溶剂技术，提高仪器抗污染能力，从而获得更低的噪音，更低的检测测，从容应对复杂基质的食品安全检测。 化合物 线性范围 (ng/mL) 线性方程 相关系数R² LOQ(ug/kg) 在 0.01 ng/mL浓度下重现性RSD% (n=6) 三聚氰胺 0.01-10 y=754.34x+8319.4 0.9997 0.01 3.47% ( 参考文 献 ) 1. GB/T 22388-2008原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法 Standard Curve： "Concentration vs Area 色谱柱及标准品订购信息 Source "ESI1" Component "Trans 127 85 (127/85) y=754.34x+8，319.4R²=0.99971 {ByArea， Linear，1/X) PerkinElmer SPP系列色谱柱订购信息：色谱柱采购直线：021-60645658，021-60645659 电子邮件：consumable.china@perkinelmer.com 图2.三聚氰胺的标准曲线，线性范围为 0.01-10 ng/mL 从表3可以看到，目标化合物的标准曲线在0.01-10 ng/mL范围内具有良好的线性(R>0.999)；在低浓度为0.01ng/mL下的重现性为3.47%，符合法规对三聚氰胺的检测要求。 珀金埃尔默企业管理(上海)有限公司 地址：上海张江高科技园区张衡路1670号 邮编：201203 电话：021-60645888 传真：021-60645999 www.perkinelmer.com.cn ( 要获取全球办事处的完整列表，请访问http：//www.perkinelmer.com.cn/AboutUs/ContactUs/ContactUs ) ( 版权所有 C2016， PerkinElmer， Inc. 保留所有权利。PerkinElmer是PerkinElmer， Inc . 的注册商标。其它所有商标均为其各自持有者或所有者的财产。 ) PerkinElmer QSight 200TM 系统完全满足原料乳与乳制品中三聚氰胺的日常检测工作。该系统离子源具有自清洁功能以及质谱接口HSID 热源去溶剂技术，提高仪器抗污染能力，从而获得更低的噪音，更低的检测限，从容应对复杂基质的食品安全检测。