蔬菜中多效唑、甲霜灵羧酸检测方案(液质联用仪)

智能文字提取功能测试中

SSL-CA14-998Excellence in Science Excellence in ScienceSFC-013 http：//www.shimadzu.com.cn上海市徐汇区区州路180号B2栋咨询电话：021-34193996Hotline：021-34193996Building B2， No.180 Yizhou Road， Shanghai SFC-MS手性拆分蔬菜中的两种三唑类手性农残 SFC-013 摘要：本文建立了一种使用 SFC-MS 手性拆分蔬菜中的两种三唑类手性农残多效唑和甲霜灵羧酸的定性方法。本方法采用岛津 Nexera UC SFC-MS 系统，对比了不同色谱柱的分离效果，使用Chiralpak AD-H手性分析柱，手性异构体间实现了良好分离，保留时间重复性为 0.11%~0.12%，峰面积重复性1.97%~2.31%；将该方法应用于蔬菜样品中，分别在多效唑和甲霜灵羧酸的0.1 MRL、MRL、5 MRL处加标，使用QuECHERS 前处理方法处理，手性异构混合物依然分离良好。该方法简单、快速，可用于对蔬菜中的多效唑和甲霜灵羧酸手性异构体进行定性分析。 关键建： SFC-MS农残蔬菜手性拆分 市售农药中，有25%是手性异构体，具有一个或多个对映体，出于其立体选择性差异，这些对映体对人体的毒性和在生物体的吸收、转化、代谢和排泄，以及环境代谢过程均表现出明显的不同。多效唑和甲霜灵羧酸是两种典型的三唑类手性杀菌剂，其杀菌作用主要来自于R型异构体，S型毒性很小。因此有必要对蔬菜中的多效唑和甲霜灵羧酸进行手性异构拆分。 超临罗界 流亿体色谱 (Supercritical FluidChromatography，SFC)是以超临界流体为主要流动相， 添加改性剂或微量添加剂的二元或三元流动相的新型色谱分离技术。超临界流体具有低黏度、高扩散性和高溶解性等特点，使得 SFC分析具有快速、高效、高分离等优势。 本实验使用岛津 Nexera UC SFC-MS系统，对蔬菜中多效唑和甲霜灵羧酸的两个手性异构体混合物进行拆分。 1.1仪器 本实验采用超临界流体色谱 (SFC)与三重四极杆质谱仪LCMS-8045 联用系统。具体配置为 LC-30ADSF (CO，输液泵)， LC-30AD(输液泵)， DGU-20A5+DGU-20A3(在线脱气机)， SIL-30AC (自动进样器)， CTO-20AC(柱温箱))， SFC-30A (背压调节单元)， CBM-20A (系统控制器)， LCMS-8045(三重四极杆质谱仪)LabSolutionsVer.5.91(色谱工作站)。 1.2分析条件 超临界流体色谱条件 色谱谱： Chiralpak AD-H手性分析柱 (4.6mm×250mm， 5um) 流动相：A相-超临界CO2；B相-甲醇 洗针模式：进样前后洗针，External only(进样针外壁清洗)， Rinse Port 流速： 3.0mL/min 柱温：40℃ 进样体积：1uL 洗针液：甲醇 背压：10MPa 补偿液：0.1mL/min 甲醇 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为10%，时间程序见表1。 表1梯度洗脱时间程序 Time(min) Module Command Value 1.00 Pumps Pump B Conc. 10 5.00 Pumps Pump B Conc. 30 6.00 Pumps Pump B Conc. 30 6.5 Pumps Pump B Conc. 10 9.00 Controller Stop 质谱条件 离子化模式：ESI，正离子模式 加热模块温度：400℃ 雾化气流速：3.0L/min 干燥气流速：10.0L/min 加热气流速：10.0L/min 扫描模式：多反应监测(MRM) 接口温度：300℃ 接口电压：4.0 KV DL温度：250℃ 驻留时间：100ms 碰撞气：氩气230kPa MRM参数：见表2 表2MRM参数 No. 中文名称 英文名称 CAS号 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bias(V) CE(V) Q3 Pre Bias(V) 1 多效唑 (立体异构混合物) Paclobutrazol 76738-62-0 294.10 70.05* 125.05 -15.0 -14.0 -220 -42.0 -27.0 -26.0 2 rac-Metalaxyl 87764-37-2 266.10 220.05* -14.0 -13.0 -27.0 外消旋-甲霜灵羧酸 Carboxylic acid 192.10 -30.0 -16.0 -30.0 *代表定量离子对 1.3 标准溶液的配制 分别称取约10 mg的多效唑、甲霜灵羧酸标准品，用甲醇定容至10 mL量瓶，得到1000 ug/mL 单一标准品母液； 分别移取两两单一标准品母液100 uL至10mL量瓶中，用甲醇定容，得到 10 ug/mL 混合标准品母液；将混合标准品母液逐级稀释至10ng/mL， 用甲醇定容，作为标准工作液。 1.4样品前处理 实验中使用的卷心菜、黄瓜、豆角样品购自附近超市。 称取约15g蔬菜样品于50mL离心管中，分别加入15 mL 含1%乙酸乙腈、6g无水硫酸镁和1.5 g乙酸钠，充分混匀，振荡，于4000 r/min 的转速下离心5 min； 取上层清液转移至 15mL离心管中，加入150 mg 无水硫酸镁和 50 mg PSA， 充分混匀，振荡，于5000 r/min 的转速下离心5 min。取上清液，过 0.22 um滤膜， 上机分析。 加标实验中，分别向三个基质的样品中加入0.1 MRL、MRL 和 5 MRL (根据GB 2763-2016，多效唑和甲霜灵的MRL均为 0.05 mg/kg)等量的混合标准工作液，按上述前处理步骤处理样品。 结果与讨论 2.1分离条件优化 2.1.1色谱柱的优化 本实验先使用 Shim-pack XR-ODS柱， 采用常规反相液相的思路分析，结果显示多效唑与甲霜灵在常规反相色谱中各仅出1个峰，其手性异构体无法分离；之后采用 Chiralcel OD-H手性分析柱(4.6mm×250 mm， 5 um)进行分离，多效唑与甲霜灵的手性异构在该柱上能被分开，但分离度较差；最后采用 Chiralpak AD-H手性分析柱(4.6mm×250mm， 5um) 分离，异构体成功实现基线分离，且分离度>1.5，因此本实验采用 Chiralpak AD-H 手性分析柱(4.6mm×250 mm， 5pm) 进行分析。 图13种色谱柱的分离效果对比图 2.1.2其他色参参数的优化 在上述分离条件的基础上，本实验又对比了背压(10 MPa、15MPa、20 MPa)、柱温(35℃、40℃、50℃)和补偿流速 (0.1mL/min、0.15 mL/min、0.2mL/min)对分离的影响，结果显示，在上述条件下两个化合物的手性异构体均能实现基线分离，影响此两种手性混合物分离的主要因素是色谱柱的选择。 2.2稳定性考察 将10 ng/mL 多效唑和甲霜灵羧酸标准品连续进样6针，考察仪器条件的稳定性，结果如表1所示。结果表明该仪器条件稳定。 表1 10ng/mL混合标准样品稳定性考察结果(n=6) 多效唑A 多效唑B 甲霜灵羧酸A 甲霜灵羧酸B 保留时间RSD% 0.11 0.11 0.12 0.11 峰面积RSD% 1.97 2.31 2.29 2.31 2.3蔬菜样品中手性异构体的分离 分别将卷心菜、黄瓜和豆角样品粉碎均质，按照1.4的方法加标后进行前处理，上样分析，结果如图2。结果表明，本实验方法可以定性分析并分离出蔬菜中低、中、高浓度的多效唑和甲霜灵羧酸的手性异构体。 图2黄瓜样品及样品加标色谱图(MRL为0.05mg/kg) 图3卷心菜样品及样品加标色谱图(I(MRL为0.05 mg/kg) 图44i豆角样品及样品加标色谱图(MRL为0.05mg/kg) 结论 使用岛津 Nexera UC SFC-MS 手性拆分蔬菜中的两种三唑类手性农残，用 Chiralpak AD-H 手性分析柱进行分离，手性异构混合物得到了良好的分离。使用 QuECHERS 方法处理蔬菜样品中的两种三唑类手性农残，手性异构混合物依然分离良好。该方法简单、有效，可以满足蔬菜中两种三唑类手性农残的定性分析要求。 岛津企业管理(中国)有限公司分析中心Shimadzu(China)CO.，LTD. Analytical Applications Center 本方法采用岛津Nexera UC SFC-MS系统，对比了不同色谱柱的分离效果，使用Chiralpak AD-H手性分析柱，手性异构体间实现了良好分离；将该方法应用于蔬菜样品中，使用QuECHERS前处理方法处理，手性异构混合物依然分离良好。该方法简单、快速，可用于对蔬菜中的多效唑和甲霜灵羧酸手性异构体进行定性分析。