染发剂中4-氯间苯二酚禁限用化学成分检测方案

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DiKMAA reliable partner for your lab Spursil@C18 色谱柱对染发剂中32种禁限用化学成分的检测 目前，染发剂在全世界受到越来越多的消费者的欢迎，但是染发剂中可能含有一些化学成分，其对人体健康将产生威胁。近年来，很多研究报道，这些化学成分可能会穿透过人的皮肤和头发，甚至留在人体内数年，进而可能引发皮肤破损、癌症和基因毒性等很多不良反应。因此，对染发剂中这一类化学成分禁止和限制使用就显得尤为必要。 迪马科技应用实验室建立的染发剂中32种禁限用物质的检测方法可以作为国家食品药品监督管理局颁布的官方方法的补充版。同以往很多方法相比，该方法大大简化了检测过程，有效改进了同分异构体或者结构类似物的分离度。应用该方法，在简单的反相梯度洗脱过程中，32种禁限用化学成分得到了很好的分离分析，整个分析过程简单且重复性好。在染发剂及其他相关领域，该方法都具有较强的实用性，可以推广应用于各种检测工作中，使检测工作更加简单、标准、可靠。 图1.染发剂中32种禁限用化学成分的结构式 1、适用范围 本方案适用于化妆品染发剂中32种禁限用染料的检测。 2、标准溶液的配制 单标储备液：准确称取各待测化学成分标准品50mg(精确至0.1mg)，置于 10mL容量瓶中，用甲醇-2g/L亚硫酸氢钠水溶液(1：1v/v)合混合溶液溶解并定容，分别制成5mg/mL的 北京：400-608-7719上海：021-61263966天津：400-633-6606广州：020-85593520成戈：028-86612625沈阳：024-22943513济南：j：0531-83681355石家家：0311-66686220重庆：023-62568657青岛：131.5685.9195西安：158.0293.5126哈尔滨：180.4537.3042 单标储备液。部分标准品在上述混合溶液中溶解性较差，采取的措施如下：甲苯-2，5-二胺硫酸盐和2-氯-p-苯二胺硫酸盐用 2 g/L 亚硫酸氢钠水溶液溶解并定容，浓度均为5 mg/mL；甲苯-3，4-二胺和4-硝基-0-苯二胺用甲醇溶解并定容，浓度均为 5 mg/mL；2-硝基-p-苯二胺用无水乙醇溶解并定容，浓度为2.5 mg/mL。所有单标储备液需保存在-20℃的冰箱中，保存期限为1个月。 混合标准溶液：将32种待测化学成分分为两组，分别准确移取单标储备液适量置容量瓶中，用2 g/L亚硫酸氢钠水溶液定容至刻度，配制成目标浓度的混合标准溶液，同样保存在-20℃的冰箱中，保存期限为1个月。可根据需要对此混合标准溶液继续稀释，配制成系列浓度的混合标准工作溶液，现用现配。 3、色谱条件 色谱柱： SpursilC18，250x4.6 mm，3um (Cat.No.：82020) 仪器： Agilent 1260液相色谱仪配紫外检测器 流速：1.0 mL/min 进样羊：5uL 柱温：35℃ 检测器： UV 280 nm 流动相I：40 mM 磷酸二氢钾(pH2.8)+10 mM 辛烷磺酸钠缓冲液(A)-乙腈+甲醇(40+60)(B) 梯度设置 时间(min) 0 10 20 30 40 44 47 54 54.5 60 流动相A 90% 90% 80% 70% 60% 60% 40% 40% 90% 90% 流动相B 10% 10% 20% 30% 40% 40% 60% 60% 10% 10% 流动相II：40mM 磷酸二氢钾(pH2.8)+10 mM 辛烷磺酸钠缓冲液(A)-乙腈(B)梯度设置 时间(min) 0 13 23 33 34 40 流动相A 90% 90% 80% 70% 90% 90% 流动相B 10% 10% 20% 30% 10% 10% 4、检测结果 图2.21种待测化学成分的混合标准溶液色谱图(流动相D) 表1.21种待测化学成分的检测结果 序号 化合物 浓度 (mg/mL) 保留时间(min) 分离度 不对称因子 1 对苯二酚 0.1 6.2 1.14 2 间苯二酚 0.17 10.9 20.76 1.15 3 2-甲基间苯二酚 0.7 13.1 7.18 1.33 4 4-氨基-3-硝基苯酚 0.1 20.5 22.37 0.98 5 对氨基苯酚 1 24.9 10.76 0.86 6 N，N-双(2-羟乙基)-对苯二胺硫酸盐 0.17 27.3 6.31 1.04 7 6-羟基吲哚 0.1 28.9 4.91 1.04 8 4-氯间苯二酚 0.17 29.8 2.63 1.11 9 4-氨基间甲酚 0.17 30.4 1.71 1.04 10 4-硝基邻苯二胺 0.17 31.0 2.25 1.00 11 2，4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐 0.1 31.6 2.43 1.09 12 苯基甲基吡唑啉酮 0.17 32.3 1.25 1.45 13 2-硝基对苯二胺 0.17 33.5 1.89 0.97 14 2-氯对苯二胺硫酸盐 0.08 33.8 1.29 1.00 15 2.7-萘二酚 0.17 35.6 6.06 1.08 16 N，N-二乙基对苯二胺硫酸盐 0.7 37.0 4.96 1.06 17 6-氨基间甲酚 0.17 39.7 11.58 1.03 18 4-氨基-2-羟基甲苯 0.17 40.5 3.28 0.99 19 甲苯-3，4-二胺 0.17 41.1 2.49 1.01 20 N-苯基对苯二胺 0.015 50.6 48.27 1.16 21 1-萘酚 0.17 51.9 7.79 1.02 图3.11种待测化学成分的混合标准溶液色谱图(流动相Ⅱ) 表2.11种待测化学成分的检测结果 序号 化合物 浓度 (mg/mL) 保留时间(min) 分离度 不对称因子 1 2-氨基-3-羟基吡啶 0.08 23.0 1.35 2 对甲基氨基苯酚硫酸盐 0.4 24.1 2.68 0.98 3 间氨基苯酚 0.2 25.3 3.94 0.95 4 对苯二胺 0.2 26.1 2.63 0.91 5 间苯二胺 0.2 26.5 1.97 0.95 6 邻氨基苯酚 0.2 27.3 3.78 0.97 7 甲苯-2，5-二胺硫酸盐 0.4 27.6 1.66 0.98 8 2，6-二氨基吡啶 1.11 28.3 3.34 0.85 9 邻苯二胺 0.2 28.9 3.20 0.97 10 1，5-二二酚 0.2 29.6 2.87 1.06 11 N，N-二乙基甲苯-2，5-二胺盐酸盐 0.2 32.7 12.60 1.10 如上，32种化学成分被分为两组，这两组待测物均在迪马 Spursil@C18色谱柱上得到了很好的分离(见图2和图3)，其洗脱顺序、保留时间、分离度和不对称因子如表1和表2所示。几乎所有待测物的色谱峰与相邻峰都达到了基线分离，分离度为1.25以上。除了2-甲基间苯二酚、苯甲基吡唑啉酮和2-氨基-3-羟基吡啶(不对称因子小于1.5)以外，其余待测物的峰形都几乎完美对称，不对称因子为0.85~1.16。 北京：400-608-7719上海：021-61263966天津：400-633-6606广州：020-85593520成戈：028-86612625沈阳：024-22943513济南：j：0531-83681355石家庄：0311-66686220 5结论 应用迪马 Spursil@ C18色谱柱建立了染发剂中32种禁限用化学成分的检测方法。同文献报道和官方颁布的方法相比，该方法更加简便，适于实验室日常检测使用。应用该方法，全部32种禁限用化学成分可以在迪马色谱柱上得到快速、有效的分离检测，故而可以为实验人员节省大量的时间，并使得检测工作更加顺利，检测结果更加可靠。 6、相关产品信息 货号 名称 规格 色谱柱及保护柱 82020 Spursil@ C18极性改性色谱柱 250 x4.6 mm，3 um 6801 Spursil C18保护柱芯 3 um 10x4.0 mm 2/pk 6220 EasyGuard 保护柱柱套 适用于10x4.0 mm柱芯 1/pk HPLC溶剂•缓冲盐•离子对试剂 50101 乙腈HPLC级 4L 50102 甲醇 HPLC级 4L 403128 辛烷磺酸钠 HPLC级 100 g 50159 磷酸二氢钾无水 HPLC 级 100 g 通用色谱产品 52401B 瓶架/蓝色 50孔 52401A 瓶架/白色 50孔 30039 FitMax 针头式过滤器 Nylon 13 mm， 0.22 um 100/pk 30040 FitMax针头式过滤器 Nylon 13 mm， 0.45 um 100/pk 1034 样品瓶(棕色/螺纹) 2mL， 100/pk 1035 样品瓶盖/含垫(已经组装) 100/pk H80365 HPLC 进样针 10 pL 广州：020-85593520 石家家：0311-66686220 哈尔滨：180.4537.3042 北京： 上海： 天津： 广州：戈： 沈阳： 济南：j： 石家庄：庆： 青岛： 西安： 哈尔滨： 重庆： 青岛： 西安： 哈尔滨：         目前，染发剂在全世界受到越来越多的消费者的欢迎，但是染发剂中可能含有一些化学成分，其对人体健康将产生威胁。近年来，很多研究报道，这些化学成分可能会穿透过人的皮肤和头发，甚至留在人体内数年，进而可能引发皮肤破损、癌症和基因毒性等很多不良反应。因此，对染发剂中这一类化学成分禁止和限制使用就显得尤为必要。        迪马科技应用实验室建立的染发剂中32种禁限用物质的检测方法可以作为国家食品药品监督管理局颁布的官方方法的补充版。同以往很多方法相比，该方法大大简化了检测过程，有效改进了同分异构体或者结构类似物的分离度。应用该方法，在简单的反相梯度洗脱过程中，32种禁限用化学成分得到了很好的分离分析，整个分析过程简单且重复性好。在染发剂及其他相关领域，该方法都具有较强的实用性，可以推广应用于各种检测工作中，使检测工作更加简单、标准、可靠。图1.染发剂中32种禁限用化学成分的结构式1、适用范围        本方案适用于化妆品染发剂中32 种禁限用染料的检测。2、标准溶液的配制单标储备液：准确称取各待测化学成分标准品50 mg (精确至0.1 mg)，置于10 mL容量瓶中，用甲醇-2 g/L亚硫酸氢钠水溶液(1:1 v/v)的混合溶液溶解并定容，分别制成5 mg/mL的单标储备液。部分标准品在上述混合溶液中溶解性较差，采取的措施如下：甲苯-2,5-二胺硫酸盐和2-氯-p-苯二胺硫酸盐用2 g/L亚硫酸氢钠水溶液溶解并定容，浓度均为5 mg/mL；甲苯-3,4-二胺和4-硝基-o-苯二胺用甲醇溶解并定容，浓度均为5 mg/mL；2-硝基-p-苯二胺用无水乙醇溶解并定容，浓度为2.5 mg/mL。所有单标储备液需保存在-20 ℃的冰箱中，保存期限为1个月。混合标准溶液：将32种待测化学成分分为两组，分别准确移取单标储备液适量置容量瓶中，用2 g/L亚硫酸氢钠水溶液定容至刻度，配制成目标浓度的混合标准溶液，同样保存在-20 ℃的冰箱中，保存期限为1个月。可根据需要对此混合标准溶液继续稀释，配制成系列浓度的混合标准工作溶液，现用现配。3、色谱条件色谱柱: Spursil® C18, 250 x 4.6 mm, 3 μm (Cat.No.: 82020)仪器: Agilent 1260液相色谱仪配紫外检测器流速: 1.0 mL/min进样量: 5 μL柱温: 35 ℃检测器: UV 280 nm流动相Ⅰ: 40 mM磷酸二氢钾(pH 2.8) + 10 mM辛烷磺酸钠缓冲液(A)-乙腈+甲醇(40+60)(B)梯度设置时间(min)01020304044475454.560流动相A90%90%80%70%60%60%40%40%90%90%流动相B10%10%20%30%40%40%60%60%10%10%流动相Ⅱ: 40 mM磷酸二氢钾(pH 2.8) + 10 mM辛烷磺酸钠缓冲液(A)-乙腈(B)梯度设置时间(min)01323333440流动相A90%90%80%70%90%90%流动相B10%10%20%30%10%10%4、检测结果图2. 21种待测化学成分的混合标准溶液色谱图（流动相I）表1. 21种待测化学成分的检测结果序号化合物浓度 (mg/mL)保留时间(min)分离度不对称因子1对苯二酚0.16.2-1.142间苯二酚0.1710.920.761.1532-甲基间苯二酚0.713.17.181.3344-氨基-3-硝基苯酚0.120.522.370.985对氨基苯酚124.910.760.866N,N-双（2-羟乙基）-对苯二胺硫酸盐0.1727.36.311.0476-羟基吲哚0.128.94.911.0484-氯间苯二酚0.1729.82.631.1194-氨基间甲酚0.1730.41.711.04104-硝基邻苯二胺0.1731.02.251.00112,4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐0.131.62.431.0912苯基甲基吡唑啉酮0.1732.31.251.45132-硝基对苯二胺0.1733.51.890.97142-氯对苯二胺硫酸盐0.0833.81.291.00152,7-萘二酚0.1735.66.061.0816N,N-二乙基对苯二胺硫酸盐0.737.04.961.06176-氨基间甲酚0.1739.711.581.03184-氨基-2-羟基甲苯0.1740.53.280.9919甲苯-3,4-二胺0.1741.12.491.0120N-苯基对苯二胺0.01550.648.271.16211-萘酚0.1751.97.791.02图3. 11种待测化学成分的混合标准溶液色谱图（流动相II）表2. 11种待测化学成分的检测结果序号化合物浓度 (mg/mL)保留时间(min)分离度不对称因子12-氨基-3-羟基吡啶0.0823.0-1.352对甲基氨基苯酚硫酸盐0.424.12.680.983间氨基苯酚0.225.33.940.954对苯二胺0.226.12.630.915间苯二胺0.226.51.970.956邻氨基苯酚0.227.33.780.977甲苯-2,5-二胺硫酸盐0.427.61.660.9882,6-二氨基吡啶1.1128.33.340.859邻苯二胺0.228.93.200.97101,5-萘二酚0.229.62.871.0611N,N-二乙基甲苯-2,5-二胺盐酸盐0.232.712.601.10        如上，32种化学成分被分为两组，这两组待测物均在迪马Spursil® C18色谱柱上得到了很好的分离（见图2和图3），其洗脱顺序、保留时间、分离度和不对称因子如表1和表2所示。几乎所有待测物的色谱峰与相邻峰都达到了基线分离，分离度为1.25以上。除了２-甲基间苯二酚、苯甲基吡唑啉酮和2-氨基-3-羟基吡啶（不对称因子小于1.5）以外，其余待测物的峰形都几乎完美对称，不对称因子为0.85～1.16。5、结论        应用迪马Spursil® C18色谱柱建立了染发剂中32种禁限用化学成分的检测方法。同文献报道和官方颁布的方法相比，该方法更加简便，适于实验室日常检测使用。应用该方法，全部32种禁限用化学成分可以在迪马色谱柱上得到快速、有效的分离检测，故而可以为实验人员节省大量的时间，并使得检测工作更加顺利，检测结果更加可靠。染发剂中32种禁限用化学成分的检测相关产品信息货号名称规格色谱柱及保护柱82020Spursil® C18 极性改性色谱柱250 x 4.6 mm,3 μm6801Spursil C18 保护柱芯3 μm 10 x 4.0 mm 2/pk6220EasyGuard 保护柱柱套适用于10 x 4.0 mm柱芯 1/pkHPLC溶剂Ÿ缓冲盐Ÿ离子对试剂50101乙腈 HPLC级4 L50102甲醇 HPLC级4 L403128辛烷磺酸钠HPLC级100 g50159磷酸二氢钾 无水 HPLC级100 g通用色谱产品52401B瓶架/蓝色50孔52401A瓶架/白色50孔30039FitMax针头式过滤器 Nylon13 mm, 0.22 μm 100/pk30040FitMax针头式过滤器 Nylon13 mm, 0.45 μm 100/pk1034样品瓶（棕色/螺纹）2 mL, 100/pk1035样品瓶盖/含垫（已经组装）100/pkH80365HPLC 进样针10 μL