血液、体液、组织中任何检测方案

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一优化过滤，经济高效 FFI20H Membranes Molecular diagnostics Glass and cellulose fibers Custocmoizmapbolneents Biosample collection 目录 1.1原料筛选 2 1.2原料制备 3 1.2.1杂交瘤细胞培养 3 1.2.2抗体抗原纯化方面的应用 5 1.2.3中空纤维在样品前处理步骤中的应用 6 1.3原料质控· ·9 1.3.1层析介质在质控方面的应用 9 1.3.2 Biacore在质控方面的应用 11 1.3.3 HCP和同位素检测的应用 13 1.4样品偶联前处理 115 1.5体系构建 17 1.5.1侧向流层析((滤血膜，样品垫，结合物释放垫，NC膜，吸收垫) 17 1.5.2渗透法 1.5.3普线分析· 22 1.5.4化学发光免疫分析 27 2.生化诊断 29 2.1胶乳增强免疫比浊 .330 2.2尿试纸条 33 3.1样品制备 .33 3.2酶的制备 3.3基因芯片 38 3.4RTG· --. 3.5 Genomiphi… .3 4.1卡式血型鉴定 41 4.2细胞分离(径迹蚀刻膜) 43 4.3 TCT(FPET膜) 45 5.定制化服务((Customization service) 46 6.应用系统简介 48 6.1细胞培养系统简介· 49 6.2过滤系统AKTA Flux简介 50 6.3纯化系统AKTA pure&avant 简介 .552 6.4分子互作分析系统Biacore简介. ...54 6.5超灵敏成像系统AI680简介…-- .556 体外诊断((IVD，In-Vitro Diagnostics)s)定义指将血液， 体液，组织等样本从人体中取出，使用体外检测试剂，试剂盒，校准物，质控物等对样本进行检测与校验，人从而对疾病进行预防，诊断，治疗检测，后期观察，健康评价，遗传疾病预测等一系列过程。体外诊断包括诊断仪器和诊断试剂两个部分，其中体外诊断仪器归属于医疗器械二级分类下的临床检验分析仪器，而诊断试剂则属于生物医药制品中的生物制品大类。 按照检测原理或检测方法，，可以分为生化诊断、免疫诊断、分子诊断、微生物诊断、临检类诊断、病理诊断等。而按照检测环境及条件不同，可以分为专业实验室诊断和POCT。其中生化，免疫和分子三大诊断仍是我国体外诊断的主要方法。而从IVD行业未来的发展归根结底在于新技术和新指标。在技术方面，自动化程度，检测精度，检测速度和成本四方面因素，6，将会成为衡量检测技术的主要指标。随着国家管理法规的日益严格，又对于供应商的原材料和 生产设备的要求越来越高。 GE医疗生命科学事业部打造的整体解决方案一直在生物制品领域处于领先地位。包括单克隆抗体，人用和兽用疫苗，细胞治疗，重组蛋白和细胞因子等。而GE医疗生命科学部旗下拥有许多品牌产品应用在生物制品科研和生产领域，比如设备有AKTA蛋白层析系统， AKTA flux过滤系统，Wave波良式一次成型生物反应器等，耗材有Whatman，Sera-mag以及Hyclone等。该应用手册是GE专门为中国广大诊断行业的用户量身定做的一本诊断应用解决方案手册。从应用角度出发，提供涵盖了免疫诊断中原料生产及及控，生生化诊断，分子诊断，定制化服务等多个解决方案。严格的质量控制体系保证了客户产品稳定性，多年的生产技术经验为客户提供了专业资源，稳定可靠的供货保障了客户生产持续性。携手GE医疗生命科学部，享国际领先的产品和解决方案，提早一步抢占市场先机。 最后希望GE生命医疗科学事业部推出的《GE在体外诊断领域的应用手册》，能助力所有中国体外诊断行业的用户，无论在技术上还是产品上，都能够快速提升，达到世界的领先水平。 1.免疫诊断 1.1[原料抗体筛选 对于免疫诊断，原料抗体筛选是产品研发的关键环节。相比传统ELISA方法， Biacore可以大大提高原料抗体筛选效率和准确性。ELISA方法存在人工操作多、误差大、数据量单一等问题，而Biacore可以实现超过60小时无人值守，同时提供动力学和亲和力数据。在筛选速率上， Biacore在1小时内可完成多达四块96孔板样品的筛选，相较ELISA提高了6倍。 动力学数据在原料抗体筛选中尤为关键，因为解离速率直接决定抗体的滞留时间，滞留时间越长的抗体越能耐受缓冲液冲洗，从而获得诊断试剂更高的灵敏度和稳定性。因此在原料抗体筛选中，实时无标记检测技术就显得尤为重要，我们会取解离的开始点和结束点进行解离速率的分析。ELISA方法因为是一种终点技术，只能获得亲和力，无法获得解离速率等动力学数据。 罗氏正是采用Biacore进行原料抗体的快速筛选，在24小时内完成了130个原料抗体的亲和力筛选，从最终结果中选择慢解离的候选抗体，5，获得Top 10的高亲和、高选择性的诊断抗体进行后期进一步的开发。 10 Yi 200 Antibodies# 10 10 10 的“稀有”抗体 在原料筛选中，筛选缓冲液、温度等条件对原料抗体性能的影响也很关键。在开发早期就能对不同条件对抗体的亲和力影响进行评估，从而能够有效降低降断试剂后期剂型开发的风险。通过Biacore可以快速、便捷地检验不同缓冲液成分对抗体效价的影响。如下图所示， 可以清楚地看到Ca2+对于免疫抗体结合的影响，只有达到4mM以上的Ca2+体系设计，诊断抗体才能表现出稳定的结合。 *B· Biacore系统简介请参考本手册6.4章节内容 1.2原料制备 用于抗体生产的各种悬浮杂交瘤细胞培养是WAVE BioreactorTM系统的一个普遍应用。细胞很容易生长并能够很容易地使用CellbagM一次性生物反应器放大。Cellbag 生物反应器的体积可以被增加10倍，减少接种物的需要和转移的需要。例如， 20L的Cellbag可以用低至1L的Hyclone CDM4Mab培养液开始，可以随着细胞生长加入新鲜培养基，最终培养体积达到10L。由于杂交瘤母细胞株的多样性和融合过程中产生的差异，杂交瘤细胞的生长特征变化非常大。放大前鉴定每种细胞株的生长和生产模式非常重要。接种用空气和10%CO2对Cellbag 生物反应器充气直到它变硬，加入培养基并夹紧进口和出口过滤器。以每分钟15次( rpm) 和7°的摇动角度开始摇动。使温度和pH达到平衡。向Cellbag 生物反应器中加入细胞。细胞接种量要充足，在初次运行期间提供的起始细胞密度至少为0.5×106个细胞/ml。如果细胞株需要使用更大的细胞密度。按照“培养参数”部分所述调整rpm和角度。由于WAVE Bioreactor 系统具有有效的气体交换，所以碳酸氢盐缓冲培养基的pH值会突然改变。在培养的早期阶段保持夹紧过滤器有助于维持稳定的pH。 操作 当细胞正在生长时，监测细胞密度、活率和代谢需要添加的培养基。如果可能，添加的培养基已经被预热到操作温度。保持Cellbag 生物反应器在任何时候都被充气至坚硬。培养液的溶氧水平对成功的细胞生长和生产十分关键。用溶氧(DOOPT) ：系统、WAVEPODM控制器或离线血液气体分析仪监测溶氧水平。对应培养中所需要的氧气调整rpm和角度。 培养参数 摇动速度 摇动速度取决于培养体积、细胞密度和Cellbag 生物反应器大小。一般情况下，随着氧气需要量的增加提高rpm。对于2L、10L和20L的Cellbag 初始设置为12到20 rpm。对于非常低的体积(10%到20%的工作体积))，12rpm的初始速度就已足够。随着更多的培养基被加入基培养液中，速度提高到20到25 rpm。当Cellbag 生物反应器在100%工作体积或高细胞密度时，速度可能需要高至25 rpm。 摇动角度 对于2L、10L和20L的Cellbag 初始角度为6°就足够。对于50L的Cellbag，使用的初始角度为5°。当Cellbag 生物反应器在100%工作体积时为了提高氧气传递，使用2L、10L或20L 的Cellbag 时可能需要的角度为7°或8°。 通气量 Cellbag 生物反应器应该保持充气至坚硬。充气期间，可以使用的流速最高达每分钟5升( Lpm)。在培养的开始阶段夹紧过滤器。一旦观察到急剧的生长，通气速度可以被设置为不小于2 Lpm。流速一般被设置为3 Lpm。 温度 杂交瘤细胞标准的操作温度是36℃到37℃。 pH控制 pH控制十分关键。由于Wave Bioreactor系统的高气体传递能力， pH会快速偏离。使用下列步骤： 1.首先用10%C02/空气对Cellbag生物反应器充气，然后向生物反应器加入培养基并关闭进口和出口过滤器。在15rpm摇动1到2小时使pH和温度达到完全平衡。接种前，通过取样检测pH。如果需要，调整pH。 2.用细胞接种。保持进口和出口过滤器关闭。 3.监测pH、葡萄糖浓度和细胞密度。，一旦pH和葡萄糖水平开始下降，切换到5%CO2/空气，以不小于2 Lpm的连续气流通过顶部空间。这可以在24到60小时内发生。。一旦发生细胞急剧生长，培养基pH将不会向上偏离，且在残留气体中的CO2浓度可以被用于控制pH。 4.增加摇动速度和角度以维持氧气浓度。使用离线取样、溶氧( DOOPT)系统或WAVEPOD控制器以测定溶氧浓度。 产品名称 包装规格 产品描述 货号 CDM4Mab 500mL， 1000mL 液体，含谷氨酰胺 SH30801 500ml，1000ml 液体，不含谷氨酰胺 SH30802 1x5L， 1x10L， 1x50L 干粉，不含谷氨酰胺 SH30800 CDM4NSO 500mL，1000mL 液体，不含谷氨酰胺 SH30579 1x5L，1x10L， 1x50L 干粉，不含谷氨酰胺 SH30578 SFM4Mab 500mL， 1000mL 液体，含谷氨酰胺 SH30513 500mL， 1000mL 液体，不含谷氨酰胺 SH30391 1x5L， 1x10L 干粉，不含谷氨酰胺 SH30535 ADCF-Mab 500mL，1000mL 液体，含谷氨酰胺 SH30349 500mL， 1000mL 液体，不含谷氨酰胺 SH30547 1x5L， 1x10L， 1x50L 干粉，不含谷氨酰胺 SH30635 *关于WAVE BioreactorM 系统简介详见本手册6.1章节 1) Ni Sepharose Excel填料和MBP、Strep( ll)标签在重断用重组抗原纯化中的应用 体外诊断试剂的原料中，各种重组抗原占据举足轻重的地位。以涉及血筛项目(乙肝、艾滋、丙肝、梅毒)的免疫试剂为例，相关试剂盒中，均有使用重组抗原核心原料。所以，重组抗原的纯化工艺开发也显得尤为重要。 目前， His标签和GST在诊断领域应用最主流的标签。GE推出的最新一代His标签纯化产品--Ni Sepharose excel填料，适用于真核分泌表达的His标签蛋白的纯化。可以耐受10mM的EDTA，能大幅缩减了纯化中最耗时的样品前处理工艺步骤，不用换液，，就可以直接纯化。同时，可用低浓度碱进行彻底、轻松的在线清洗以防止污染，提高层析介质的使用寿命。 (；2)2)抗体纯化填料的应用选择 鼠源性单抗，是体外诊断试剂中最为常用的单抗类原料。尽管2015版《中国药典》的体外诊断部分，对于这类原料的纯度并未给出明确的纯度要求。但在实际临床检测中，一些由鼠源性抗体与人血清之间产生的特异性反应，往往会干扰检测，严重情况下甚至造成假阳性。所以，如何通过优化纯化工艺，最大程度提高单抗的纯度，对于原料的质量和试剂盒的品质，具有重要意义。 新一代的MabSelect Sure LX 填料是或断领域单抗纯化的理想选择，，它具有以下优势： 耐受0.1到0.5M NaOH清洗，从而解决亲和纯化CIP不彻底的问题i避免原本一些无法通过碱洗去除的杂质混入单抗原料中。同时兼具高载量、低Protein A配基脱、填料寿命长、生产成本低等优势。 由于小分子的Fab相对于完整的单抗，具有多种免疫学优点。所以体外诊断原料制备时，经常会使用胃蛋白酶或木瓜蛋白酶对单抗进行酶切，从而获得Fab及F( ab) 22片段。GE公司的CaptoL亲和填料，适用于纯化抗体片段，特异性亲和捕获Fab片段，ScFv和domain等小分子抗体片段。同样可以耐受0.1M NaOH的在位清洗，从而提高使用寿命。 3)8)抗体、抗原偶联溴化氢 相比单抗纯化第一步常使用ProteinA亲和层析，S，诊断行业往往需要将自制的抗体、抗原偶联到CNBr活化琼脂糖填料，制备成专用的亲和层析柱。然后，使用AKTA纯化系统特有的恒压装柱功能，在装柱的环节，获得理想的有效性。 而上述应用目前实验室阶段已经慢慢从手动纯化转向用层析系统纯化。轻松将带有纯化介质的预装柱或利用系统装填料到柱子的方式，来进行抗原抗体方面的纯化工作。AKTA系统作为全球纯化领域的金金准品牌，已经在众多领域如抗体，疫苗，重组蛋白，小分子药物等应用开发中，得到广泛使用。 1.2.3中空纤维在样品前处理步骤中的应用 样品前处理指在对样品进行检测或精细纯化之前对样品成份采用合适的方法进行提取、净化和浓缩的过程。免疫诊断中诸多酶类或抗体的研究开发或生产，绝大多数始于细菌细胞或组织的培养，细胞/细菌的分离澄清等样品前处理是多数工艺过程中不可避免的，传统的处理方法，都是通过高速离心机或者连续流离心机来完成，由此也带来一系列的问题，诸如： ·成本高昂 ·操作繁琐 ·维修成本居高不下 ·容易产生污染 ·难以工艺放大 ·工艺验证困难 而此类的问题适合用切向流过滤来解决，但是如果使用“筛网通道”(Screen channel)过滤器，由于其致密的结构会很容易导致过滤器的堵塞。如果使用开放式通道的切向流过滤器就不会带来这么多问题，实验证明它的过滤质量好，，并展现出较高的膜过滤能力(过滤体积/膜表面积)。中空纤维就是这样的开放式通道的过滤器，：其开放式的流道能够减少膜的堵塞，可以保持较低的剪切力，有利于保护产品的完整性。 (1l)中空纤维切向流用于细胞/菌体收集 对于大多数的细菌表达，如大肠杆菌，和部分真核细胞表达，如酵母细胞和少量哺乳动物，其表达的目的产物基本都在胞内，这时就需要先收集细胞和菌体，然后再进行冻融或高压匀浆等方法进行破碎以释放出目的产物，再利用中空纤维去除碎片来进行样品的除杂澄清。 此应用中，有4个关键变量以供优化选择以获得较好的实验结果(表1))： ·膜孔径大小 ·柱的通道长度 ·纤维管内径 ·工艺条件 表1、用于细胞/菌体收集的中空纤维的选择指南 因素 对细胞/菌体的收集建议 膜孔径大小 500kD或750kD(大肠杆菌等菌体)0.1pm或0.2pm(酵母等细胞) 中空纤维的通道长度 短通道长度柱(一般30到60 cm) 纤维管内径 较大内径纤维管(0.75到1.0mm) 工艺条件 循环流速--对易堵塞进料液流剪切速率6，000到12，000/sec( 大肠杆菌、酵母等) 对剪切力敏感的进料液流2，000到4，000/sec( 活率较低的细胞培养液等)；操作顺序--流量取决于颗粒的浓度，建议在流量明显减少之前，设置一个清洗步骤。使用低到中等过膜压力(<1 bar [15 psig])； 操作温度--室温下工作最佳，一般≥4℃. 利用750kD超滤膜收集大肠杆菌，通量快，不易堵塞，经过后续的洗滤换液把残余培养基换成破碎缓冲液就可直接进行机械或渗透压破碎(图1)。 图1、用750kD中空纤维收集大肠杆菌结果及通量-压力图示 )中空纤维切向流用于上游澄清 除了大肠杆菌等胞内表达体系，绝大部分细胞表达体系比如CHO/Vero等都是胞外表达的，加上细胞和菌体的悬浮破碎液，包涵体的收集和洗涤，复性液的澄清等等，都可直接过滤澄清，比起传统的离心方法加上滤芯过滤，中空纤维过滤一步到位，澄清过滤液可直接进行后续层析、盐沉淀等操作，典型的应用包括从杂交瘤细胞培养液分离单克隆抗体、从293细胞培养液纯化腺病毒和从细菌碱性裂解液澄清质粒等。对于此应用的中空纤维选择见表2。 表2、用于上游澄清中空纤维的选择指南 因素 对澄清工艺的建议 膜孔径大小 选择可使目的分子有效通过的最小孔径。专家们用比目的蛋白大10倍的孔径开始做。对大多数哺乳动物细胞培养液的澄清，许多用户选择0.2到0.65um孔径。 中空纤维的通道长度 短通道长度柱(一般30到60 cm) 纤维管内径 较大内径纤维管(0.75到1.0 mm) 工艺条件 循环流速--对易堵塞进料液流剪切速率8，000到12，000/sec(如酵母、活率高的细 胞液)，对剪切力敏感的进料液流2，000到4，000/sec( 活率较低的细胞培养液等)；操作顺序--流量取决于颗粒的浓度，建议在流量明显减少之前，设置一个清洗步骤。强烈建议控制透过液流速。使用低过膜压力(<0.7 bar [10 psig])对最佳的蛋白通 过防止滤膜被颗粒堵塞通常是极其重要的。操作温度--室温下工作最佳，一般≥4℃. 利用0.45um中空纤维进行CHO细胞培养液的澄清，载量高达48L/m2，处理时间短((<4h)1)， 抗体通透性好， 收率高((92%) 节约成本，，可以很好地代替离心及深层过滤(图2) Permeate Vol (ml) 图2、用0.45um中空纤维澄清抗体培养液结果及通量-压力图示 在样品前处理步骤中除了上述介绍到的典型应用，还有其他一些比较复杂的样品，比如动植物组织匀浆、中草药提取液及乳品和饮料的除杂澄清，诊断样品中乳胶颗粒和脂质体的收集除抗体或除杂((750kD)，胰岛素晶体的收集( 0.45pm)等等，只要涉及到固液分离的都可考虑到使用中空纤维这种技术进行快速有效得处理。 关于样品前处理使用的过滤系统AKTA Flux详见本手册6.2章节 3、参考文献 ( [1]中空纤维膜操作手册. GE Healthcare. ) ( [2]中空纤维滤柱分离纯化应用集锦. GE Healthcare. ) ( [3]解红艳等.中空纤维膜过滤技术在单抗生产中的应用. GE Healthcare. ) ( [4]疫苗和载体纯化手册. GE Healthcare. ) ( [5] Alice wang，etc. Comparison of D ifferent Options for Harvest of a Therapeutic Protein Product From High Cell D ensityYeast Fermentation Broth. Biotechnology and Bioengineering， 2005，94(1)：91-104. ) 1.3 原料质控 1.3.1 SEC层析技术在原料贡控(纯化工艺内控))方面的应用 抗原抗体及酶的活性质量对后期诊断检测效果的灵敏度起到关键作用，『而衡量活性或质量的一个重要因素是其聚合状态和降解情况。比如，在研究酶活时，发现其活性是依赖于二聚体状态，那么可以通过检测二聚体的比率来判断整个酶的纯化工艺中其活性组分的含量。此时， SEC(又称体积排阻层析、分子筛、凝胶过滤)层析技术可以很好的被应用于聚合状态和降解情况的分析检测，实现对每步纯化工艺的内控和整体纯化终产品的质控。 SEC的原理非常简单，即其填料颗粒本身内部具有大小不同的孔道，当大小不同的物质经过该填料时，物质越大则越早出峰，反之越小则越晚出峰，这样就可以根据物质的大小或者说分子量的差异将其进行区分，原理如右图。因此，该技术非常适合分离单体、聚集体和降解片段。 但是，因为不同类型的填料其孔道大小分布范围不同，因此其适合分离的分子量范围也不同，以球蛋白为例，现在最经典且分离效果较优的有如下四款层析填料： 这三种柱型各有特色，10/300(内径10mm，柱床高度300mm))最为常见，其上样量推荐为500pL，基于其极高的分辨率和较大的上样量，因此不仅可以用于分析，而且兼具小规模制备。3.2/300(内径3.2mm，柱床高度300mm)是典型的分析柱型，其上样量推荐为50pL，分辨率极高。5/150(内径5mm，柱床高度150mm)从分辨率上看比10/300和3.2/300低一些，但是速度快，过一个柱体积只需7min，特别适合高通量的分析检测，比较推荐于快速检测分析聚合状态和降解情况。如下图1是使用Superdex 200 Increase 5/150 GL预装柱，，对抗体的聚集体进行快速检测。单次检测时间为4分钟，能检测出≥0.1%聚集体。因此，这根预装柱可以作为抗体的筛选及评价中非常实用的工具。图2展示的Superdex 75 Increase 5/150 GL预装柱用于检测某蛋情稳定性的情况，在不同的存储条件下，不同时间段 ()以周为单位)，蛋白会出现不同程度的降解。 检测的稳定性即结果的可重复性是质控检测中非常重要的一点。通过工艺的优化、填料自身的稳定性以及对生产过程的严格监控，IrIncrease系列预装柱具有很好的结果重复性。并且其可使用NaOH清洗，大大延长了使用寿命。 *关于连接SEC层析柱的AKTA 纯化系统简介详见本手册6.3章节 1.3.2 Biacore在诊断试剂质控方面的应用 基于Biacore平台，可以建立原料抗体及诊断试剂的全面质控标准。原料抗体及诊断试剂的质量会受到很多因素的影响，例如结构序列、结合活性、糖基化修饰、活性浓度、杂质含量等，其中采用Biacore平台可以完成结合活性、糖基化修饰、活性浓度和杂质含量的质量控制。目前， Biacore技术已经获得了广泛认可，普遍应用于抗体的质量控制。Biacore采用的SPR技术是美国、日本药典唯一认可的分子互作分析技术。Biacore出色的检测性能和数据重复性，满足了质量控制对数据可靠性的要求。通过选择不同的方法设计，可以对抗体的不同功能位点进行定量分析，对抗体进行全面评价。 在原料抗体活性浓度分析上， Biacore有两种浓度测定模式。.-一是基于标准曲线的活性浓度分析，通过结合响应与标准品浓度之间的定量关系获得样品的活性浓度。。二是Biacore的专利方法，即无需标准曲线的浓度分析技术，通过表观结合速率获得样品的活性浓度，适合无法获得标准品或建立标准曲线的情况。 Biacore可以监控不同批次原料抗体及试剂试剂的活性，活性有问题的原料抗体及诊断试剂会出现解离速率加快，结合信号降低的现象，帮助企业快速发现质量问题。该功能也可用于研究原料抗体修饰前后对于其活性的影响。 除此之外， Biacore于可用于监控pH、氧化、温度等生产保存条件对原料抗体及诊断试剂产品质量的影响。罗氏就是采用Biacore平台分析环境因素对于原料抗体及诊断试剂的质量影响，1例如氧化减弱原料抗体活性，导致解离速率加快。企业可根据这些影响来设计相应的储存运输条件。 氧化对于原料抗体质量的影响 Schraml， M. and von ProffL.(2012)."Temperature-dependent antibody kinetics as a tool in antibody lead selection." MethodsMol Biol 901：183-194. Biacore系统简介请参考本手册6.4章节内容 宿主细胞蛋白(Host cell protein， HCP)既包括宿主细胞的结构蛋白，也包括宿主细胞(传代细胞)分泌的促生长因子。它不仅能引起机体的过敏反应，还有可能引起机体对蛋白质药物产生抗体。工业抗体生产后，会用商品化ELISA试剂盒或自制多克克抗体制作ELISA试剂盒进行HCP检测，从而确定抗体的纯度。 HCP标准品是试剂盒提供的，与不同产品中HCP有一定差异，需确认试剂盒能否检出自身产品中所有种类的HCP。2-D DIGE Werstern Blotting技术(荧光差异双向电泳结合化学发光实验技术)：)可以用于评估ELISA试剂盒的专属性。通过2-D DIGE实验将宿主蛋白按等电点及分子量的差异进行分离，获得宿主蛋白的图谱。转膜后用ELISA试剂盒的抗体孵育并进行WB成像，获得ELISA抗体的信号图。最后通过软件分析，比对HCP蛋白图和ELISA抗体的信号图，确定ELISA试剂盒检测HCP蛋白的效果(抗体信号点占所有蛋白点数量的百分比) 该验证方法已被收录至美国药典USP 38-NF33，(1132) Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharmaceuticals Gel image Western Blot：ta：ntibody probing 多光谱激光扫描成像系统在药物代谢研究中的应用 药物代谢研究主要考察新药在生物体内吸收、分布、代谢和排泄规律，并并运用数学原理和方法阐述血药浓度随时间变化的规律，，为新药的给药途径的设计、给药剂量等提供参考。 CMX001是抗单纯疱疹病毒Cidofovir( ：别名名称：西道法韦)的一种衍生物，它的体外抗病毒效果比cidofovir高50倍， 1)为了研究该潜在药物在体内的代谢及分布情况以小鼠为模型，将服CMX0014小时后的小鼠不同器官及组织切片，使用Typhoon多光谱激光扫描成像系统进行扫描，对同位素信号进行定量，从而实现对同位素标记药物在脏器、中枢系统中分布进行监控。 整体自显影研究[C2-14C]CMX001的药物分布 同位素标记药物在内脏器官中的浓度变化 同位素标记药物在中枢神经系统中的分布 ☆关于多激光扫描成像系统简介详见手册6.5章节 Efficacy of CMX001 Against Herpes Simplex Virus Infections in Mice and Correlations with Drug Distribution Studies((NIHPublic Access Author Manuscript J Infect Dis. Author manuscript； available in PMC 2011 November 15 1.4样品偶联前处理 在诊断试剂的生产过程中，我们经常会使用预活化的填料偶联特定的配体后用于纯化特定的蛋白。我们都是通过配体上特定的功能基团，进行偶联的(例如NHS或者CNBr填料偶联的是-NH2，而环氧树脂可以和-OH、-SH或-NH2相连)。可见，这一种偶联的方式是针对某一个功能基团进行的，因此我们在准备配体的溶液时，需要额外的注意，我们的缓冲液不能含有类似的功能集团离子(例如，在选择使用NHS填料时，缓冲液不能Tris这类带氨基基团的缓冲液，否则缓冲液中大量的氨基基团会偶联至填料上)1.。所以，为了确保偶联时不会受到一些小分子的影响，在偶联前，我手们往往会通过脱盐柱这种快捷简便的方法将配体转移到特定的偶联缓冲液中。那么让我们一起来看看脱盐柱是如何实现快速脱盐以及我们应该如何选择吧。 脱盐柱的原理 脱盐柱，属于分子筛，是根据不同大小的分子，在填料中走过的路径不同而进行分离的。当蛋白或者大分子超过了填料的极限分离的大小，则只能途径外水就流出，而盐或者小分子，因为非常小，所以会走入内水，走的路径更长，因此晚出来。我们就是根据他们两者出来的先后不同而进行分离的，就如下图： 图中蓝色的是 280nm 吸收值用于 检测蛋白，而红色 是电导的数值用于 检测盐分子。可见 大分子的蛋白质会 先出来，而小分子 的盐分子则是后出 来，因而实现了缓 冲液的置换。 相比传统的缓冲液置换方式，脱盐柱有着简单、快速，，脱盐效果好等优势，是样品制备中的常规流程之一。应该如何选择适合的脱盐柱 脱盐柱的选择，我们需要考虑以下几点： ①配体的大小。我们常用两种脱盐的基质SephadexG-25的拦截大小为5，000Da，对于更小的一些多肽类的小配体，还可以选择SephadexG-10的基质，，它的拦截大小为700Da。 ②样品的体积。伴随上样量的增加，蛋白的峰也会变宽，为了确保较好的脱盐质量，往往会有最大的上样量的限制，一般不会高于柱体积的25%。 ③除了上述的两个关键点之外，有时候我们还需要根据实验室的设备情况选择合适的操作方式，(例如，最简单的是通过重力的方式，这个无需额外的设备；；或者少量样品时，也可以搭配离心机使用；当处理量比较多的时候，也可以在AKTA上使用) 从左图可见，盐离子的出峰位置是保持不变的，伴随上样量的增加，蛋白峰会变宽，则后出的蛋白中就回带有盐离子而达不到目标的脱盐效果。 图示 产品名称 货号 拦截分子量 最大样品体积 包装规格 备注 PD Spin Trap G-25 28918004 5，000Da 180pl 50根/包 PD MultiTrap G-25 28918006 5，000Da 130pl 4x96孔板 PD MiniTrap G-25 28918007 5，000Da 0.5ml 50根/包 PD MiniTrap G-10 28918010 700Da 0.3ml 50根/包 PD MidiTrap G-25 28918008 5，000Da 1ml 50根/包 PD MindiTrap G-10 28918011 700Da 1ml 50根/包 PD-10 Desalting Columns 17085101 5，000Da 2.5ml 50艮/包 Hitrap Desalting 5ml 2904868417140801 5，000Da 1.5ml 1支/盒 可串联使用增加上样量 Hiprep 26/10 Desalting 1750870117508702 5，000Da 15ml 5支/盒 Sephadex 大包装填料 *如果以上表格中的产品未能满足您的需求，您还可以咨询当地销售负责人，他们会根据您的实际情况给您专业的建议。 产品名称 货号 用途 包装规格 LabMate PD-10 Buffer Reservoir 18321603 缓冲液储槽，延伸PD-10缓冲液体积 10根/包 PD-10 Spin Adaptor 28923245 PD-10在离心机使用配套 10个/包 MidiSpin Adaptor 28923244 MidiTrap在离心机使用配套 10个/包 MiniSpin Adaptor 29023243 MiniTrap在离心机使用配套 10个/包 Colletion Plate 28403943 MultiTrap配套收集板，96-well plate 500pl 5x96-well plate 总而言之，样品制备在实验过程中是非常重要的，希望脱盐柱能够在样品制备过程中给您带来不一般的体验。 1.5体系构建 1.5.1侧向流层析 侧向流层析免疫体系因其效果好，简单易用，成本低，，应用广的优点，近年来受到体外诊断制造商的普遍关注。一般来说，侧向流层析免疫体系的操作只需要加入样品一个步骤。典型的侧向流层析试纸包含样品垫(或全血分离膜)，结合物释放垫，硝酸纤维素膜及吸收垫。 1.5.1.1样品垫 样品垫位于侧向流层析试纸第一部分，功能是接收样品，并以一种均匀一致的方式将它转运至结合物释放区或分析膜。除此之外，样品垫还能将样品中的颗粒物质或细胞包样品中过滤，调节反应条件，有时还可对样品进行修饰。在一些反应中，样品垫还是添加封闭物质最好的场所。 样品垫一般采用可润湿的惰性反应材料制成。最合适的材料是棉纤维素或玻璃纤维。棉纤维素比较适合小样品量样品(最多不超过200 pL)，但流速和吸水率比玻璃纤维要低。玻璃纤维样品垫不会造成红细胞裂解，更适合全血血细胞分离。 全血样品 诊断市场中，血清和血浆一直是使用者最感兴趣的样品来源。对于快速检测来说，尤其是需要在床边或现场进行的检测，经典的血清或血浆制备方法几乎无法实现。因此，近年来，在全血样品检测装置中进行血细胞分离的需求不断增加。 免疫层析检测中常采用玻璃纤维对血液进行分离。除了需要有效去除血细胞外，还必须保证高的血浆回收率，而不能出现任何溶血或干扰分析物。溶血会严重影响诊断检测的结果，在血液样品中，即使只有0.5%的红细胞发生裂解，也会导致最终的血清或血浆中呈现明显的粉红色，从而增加免疫分析的背景。其次，血细胞的组成成分也会直接影响检测的结果，比如，相比血浆来说，红细胞中钾离子浓度更高。另外，溶血还会改变临床相关标记物(如乳糖脱氢酶，碱性磷酸酶，肌酸激酶和肌钙蛋白T等)的血浆水平。 顺应不断增加的全血测试需求， GE Healthcare提供了一系列的全血分离膜，，专门设计以满足快速诊断市场的严格要求和全血分离需求，并确保无红细胞溶血现象。 特点与优势： ·30-120秒内完成全血分离：为快速诊断赢得时间 ·无红细胞溶血：提高测试可重复性 ·材料一致性：测试可靠性 ·材料可适用于多种测试：：可灵活进行测试优化 ·分离次数可选：可进行测试优化 ·适用于多种体积血液样品：可根据血液样品体积提高分离率 产品 规格 材料 特性 厚度 (um@53kPA) 流速 (s/4cm) 吸水量 (mg/cm²) 货号 GF/DVA 22mm×50m 粘合玻璃纤维 适用于唾液样品，也可用作全血分离膜 785 28.2 93 8145-2250 LF1 17mmx50m 可用于侧向流层析，适合对1滴全血样品进行分析 247 35.6 25.3 8121- 1750 MF1 22mmx50m 可用于侧向流或垂直流分析，适合分析100pL全血样品 367 29.7 39.4 8122- 2250 VF2 17mm×50m 主要用于垂直流分析，单层多层形式均可，适用全血体积较广泛 785 23.8 86.2 8124- 1750 Fusion 5 210mm×297mm 混合材料 侧向流全血分离，通常用作2滴全血分离 370 43.9 42.3 8151- 6621 其它样品 除了全血样品之外，，诊断分析中还经常会用到其它多种样品，，如尿液体液等。这些样品中可能存在一些不利于分析的因素，样品垫的存在可以对样品性质进行调整。以尿样为例，不同样品间的pH值、离子强度以及分子子成相差很大。在侧向流层析体系中，用盐溶液和缓冲液对样品垫进行预处理后，可使样品到达结合物释放垫和检测膜时差异减小。另外，在一些实例中，在样品垫上添加使样品变粘稠的物质有助于降低爬速，提高检测的灵敏度。 特点与优势： 保证均一的吸收能力和流速：确保测试可重复性 ·产品选用高质量的原材料，并且在完全控制的环境中制造：避免由于样品污染导致的错误测试结果 低蛋白吸附：将分析物损失降至最低，以确保测试灵敏度 亲水性本质：可快速浸湿 各种厚度规格、吸水量和毛细爬升速度 和绝大部分不同类型的卡壳匹配 .最小的试剂条上泄漏：消除检测结果污染 产品 规格 材料 特性 厚度 (um@53kPA) 流速 (s/4cm) 吸水量 (mg/cm²) 货号 CF1 22mmx50m 100%棉纤维 轻，薄，适合小体积样品 176 207.3 18.7 8111-2250 CF3 22 mm×50m 中等重量 322 174.3 34.6 8113-2250 CF4 22 mm×50m 482 67.3 49.9 8114-2250 470 22mmx50m 840 77 78 10539995 Standard14 22mmx50m 玻璃纤维 流速较棉纤快，样品滞留率低 355 23.1 50.9 8133-2250 Standard17 22mm×50m 370 34.5 44.9 8134-2250 33 Glass 210mmx297 mm 370 48 40 10537807 侧向流层析体系中所用到的检测试剂通常都是抗体，这些抗体一般结合胶体金颗粒，有色或荧光乳胶颗粒，或磁珠等。结合物释放垫的功能是吸收这些试剂，使这些试剂在保质期内处于一种有效状态，并在样品流经释放垫时有效释放。此外，结合物释放垫还必须具有良好的亲水性，以保证样品能均一可靠地转移到反应膜上。 结合物释放垫的材质必须均一。结合物一般都保存在含有稳定剂的缓冲液中，以保证抗体的结合并能重新溶解。结合物成分包含了表面活性剂、糖类、蛋白以及人工合成的亲水聚合物等多种成分。在试纸制造过程中，结合物释放垫可以事先浸泡结合物或在其上喷洒结合物，在此过程中，垫材料的体积均一性直接影响了最终垫上结合物的数量，从而可能影响最终的检测结果。结合物的释放必须尽可能充分，在样品流经时，释放垫对结合物的吸附应完全可逆。另外，结合物释放垫不应干扰样品中的待测物浓度。 结合物释放垫需为亲水性材料，经典的材质为玻璃纤维。玻玻纤维本身具有亲水性，不需要经过表面修饰即可发挥亲水作用。在侧向流层析体系中，曾经有人选择经表面修饰的聚酯纤维和人造纤维，但是不同批次生产的聚酯纤维和人造纤维之间亲水性差异较大。因而，采用玻璃纤维得到的样品检测结果更加稳定且可信。 Whatman结合物释放垫自身亲水，，：结合物和样品均可通过材料开放结构快速渗滤。 特点： 高水平的结合物释放：减少浪费，降低试剂成本 ●E更多结合物到达捕获线，保证了捕获线更高的强度：：提升灵敏度 产品 规格 特性 厚度 (um@53kPA) 吸水量 (mg/cm²) 金结合 物释放%(90秒后) 货号 Standard14 22 mm x50m 未经过封闭处理的玻纤 355 50.9 75 8133-2250 Standard17 22mmx50m 370 44.9 75 8134-2250 Fusion 5 210mm×297mm 370 42.3 >94 8151-6621 33 Glass 210mm×297 mm 370 40 75 10537807 AccuflowG 20mmx75 m 经过处理的玻璃纤维， 可直接使用 370 40 89 10537200 Rapid 27 27mm x50m 365 35 86 8132-2750 硝酸纤维素膜是侧向流测试的重要功能部分。膜必须能够吸附足量的蛋白以保证能有锐利紧凑的捕获线形成，同时，非特异性背景应该足够低，以方便地进行结果读取。 毛细爬升时间决定了侧向流测试的热力学和动力学。检测灵敏度和流速之间的关系遵循反向平方定律。一个研发人员若想检测能达到最终要求的灵敏度必须选择可能的最小标称孔径的膜。孔径越大，检测线越宽，这是由于捕获试剂溶液能够更加快速地从应用区域扩散入膜--爬速越快，检测线越宽。 Whatman为侧向流免疫产品提供了一系列的膜。包括带背衬和无背衬的膜。膜系列也可通过表面活性剂含量进行区分。大多数的膜都有不同的孔径，能提供不同的毛细流速。 无支撑的NC膜非常脆，并且很难处理。由于缺乏弹性且拉伸差使得这些膜在某些生产流程中无法使用。背衬(直接浇注)膜则可方便地进行检测线使用，层压，切割以及检测组装等操作。背衬的存在也防止了粘贴物质渗透进膜当中。然而，直接铸造的膜其皮带面无法使用，而在很多的检测中皮带面其实都有很好的性能。而对于无背衬膜，研发人员可以检测究竟膜的哪个面更适合于自己的检测。 毛细爬升检测结果图 背衬膜 无背衬膜 ·提高 NC膜莫械强度，简化 reel-to-reel 机器使用流程。 ·分作空气面和被带面，做不同的分析测试。 ·避免硝酸纤维材料和底板(测试元件安装部位)粘合剂间直接接触。 特点与优势： ·提高体系一致性 ·保证检测间灵敏度一直 ·减少优化成本 产品 规格 特性 毛细爬升时间(s/4cm) 厚度(um) 货号 AE99 22mmx50m1/pk 无背衬膜，试用范围广，可同时提供较好的灵敏度与流速 120-160 120 10548081 FF80HP 25mmx50m1/pk20mmx50 m 1/pk 带背衬，流速快，适合高粘度样品，如未稀释的血清 60-100 200 1054700310547002 FF120HP 25mm×50m1/pk 20 mm x50m1/pk 带背衬，可适用于多种样品 90-150 200 1054700110547006 FF170HP 25mmx50m1/pk 20mm×50m1/pk 带背衬，适用于低粘度样品 140-200 200 1054700510547004 immunoporeRP 25mm×50m1/pk 带背衬，快流速，反应时间短，灵敏度与重复性好 90-150 200 78356403 immunoporeFP 25mm×50 m1/pk 带背衬，检测线强度高，流速快 140-200 200 78336403 1.5.1.4吸收垫 位于试纸条的下游末端，控制着样品流的走向，所以吸水垫的正确选择十分重要。GE Healthcare 开发了一系列流速性能优良的吸水垫，可提高一致性。 特点： ·均一的吸收能力：确保测试可重复性 ·产品选用最高质量的原材料，并且在完全控制的环境中制造：i：避免由于样品污染导致的错误测试结果 ·亲水性本质：将分析物损失降至最低，以确保测试灵敏度 ·各种厚度规格、吸水量和流速：长期存储后可快速浸湿 ·最小的试剂条上泄漏：消除检测结果污染床旁检测分析 CF6 -结合物回流的解决方法 回流问题多年来一直是侧向流试纸条厂商的一个问题。在许多检测中，由于加样后测试停滞，样品和它所含有的任何结合物都有从吸收垫回流到膜下方的趋势。这可能导致假阳性的结果。CF6 采用专有的生产工艺，作为吸水垫时，，可避免结合物回流到膜片，为回流问题提供一个简单的解决方案。 产品 规格 材料 特性 厚度 (um@53kPA) 流速 (s/4cm) 吸水量 (mg/cm²) 货号 CF3 22 mm×50m 100%棉纤维 中等重量 322 174.3 34.6 8113-2250 CF4 22 mmx50m 482 67.3 49.9 8114-2250 CF5 22mm×50m 954 63.3 99.2 8115-2250 470 22mmx50m 840 77 78 10539995 CF7 22mm×50m 较厚材 料，适用于大体积样品 1873 35 252.3 8117-2250 CF6 22 mm ×50m 玻纤和棉绒 较厚材料，有效解决回流问题 1450 65 128 8116-2250 渗滤法，也叫纵向流或垂直流免疫检测，本质为“半干”斑点印迹。由于其小型化且集成度高，所需样品体积和试剂量都较少，该检测可使用简单的一次性装置。反应膜置于吸收垫上方，将试剂加于膜上，试剂在吸收垫的作用下泳动，这种吸收垫相当于是检测过程中所有使用液体的吸收槽。然而，渗滤检测系统的集成度远不如侧向流免疫层析。因此使得浐品开发更加容易，也能方便的避开 一些在免疫诊断检测中所用到的重要专利技术。渗滤法中膜上捕获分子的空间方位并不像侧向流检测一样与检测动力相连，，因此更便于多分析物检测的开发。另一方面，集成度更低的检测又常需要更复杂的检测操作方案。反复的试剂添加步骤是必需的。一般在第一步时加入样品，第二步时加入检测试剂，如胶体金结合物。酶联检测系统还需要加入底物，等等。有时还需准备离线样品。检测结果的解读有时会不明晰，或对经验不足的使用者形成困惑。毕竟，渗滤法的典型应用领域多为专业的诊断领域，其中一个经典的应用领域是在传染性疾病方面。 渗滤检测中液体垂直通过反应膜，因此膜的过滤属性比毛细上升时间更重要。原则上所有类型的膜，只要拥有高水平且持续的蛋白载量，都可以使用。然而，出于与侧向流免疫层析相同的考虑(润湿能力，捕获蛋白使用便捷，易于封闭，可信度高)，硝酸纤维素也是渗滤检测中的膜最常使用的材料。蛋白结合能力主要由使用比表面积-SAR(由膜的厚度决定)、孔径大小和孔隙率决定。SAR越高，蛋白载量越强。由于渗滤检测仅需克服膜的厚度这一小段距离，故其毛细流速极低。正因如此，反应膜常选用小孔径材料。通常印迹膜的孔径大小为0.45pm或0.2pm。这些膜的蛋白结合能力与侧向流检测中所使用的大孔径膜相比几乎高出一个数量级。 硝酸纤维素膜可使用小孔径、无背衬薄膜，上比如BA83和BA85；这些高灵敏度小孔径的膜拥有很大的表面积和很高的蛋白吸附能力，但是必须小心进行封闭，石确保膜和吸水垫接触良好，样品流动性好。 特点： ·为纵向流测试制造：消除由毛细爬升引起的问题 ·较小的孔结构：结果准确，更更低的非特异性吸附，更高的灵敏度 ·100%纯硝酸纤维素：提供较高结合力 渗滤分析所用吸水垫必须流速快且具有较高的吸水量。渗滤分析中所用溶液体积远大于侧向流分析，f，较厚且具有较高流速的棉纤材料是渗滤检测中吸水垫材料的首选。 具体产品和货号请咨询GE相关销售 1.5.3谱线分析 谱线分析可以看做蛋白印迹技术的一个变化在这个领域中开始流行。与蛋白印迹法不同，谱线分析无需电泳分离和印迹(从电泳凝胶到膜的转移)。该装置获得的蛋白(重组蛋白)检测线与在侧向流检测中捕获蛋白条带相似或等同。 抗体扫描是谱线分析法的典型应用。多重分析换言之即固定一种以上的抗原，1使用此种检测方式非常容易操作，因为和侧向流免疫层析一样，，：其检测线的位置不会对检测动力学造成影响。大多数条带可肉眼观察，通常将检测线与阳性控制线的强度进行比较。一般给出的结果多为有/无(阳性/阴性)。当试纸条上有很多条检测线用肉眼判断会变得困难。为了使检测结果不那么模棱两可，并且能进行定量地评估，目前流行的做法是通过建立包括扫描仪、电脑辅助图形分析和数处理流程加强谱线分析的分析能力。 理论上只要能与蛋白进行良好结合的膜类型都可适用。对于含大量阴离子的蛋白而言带电尼龙膜(比如NytranSPC) 是首选。PVDF膜通过疏水结用蛋合蛋白，并具有较硝酸纤维素膜更好的抗张强度。但硝酸纤维素仍被绝大多数蛋白印迹和谱线分析选用。除其深为人知的优越性能(湿润能力好，易于捕获蛋白结合，易封闭)‘外，硝酸纤维素膜另一大优点是，其膜上的蛋白可长期保稳定。已知在适宜的存放条件下很多蛋白可以长时间保持其结合活性，这一时间甚至可长至数年。不同蛋白分子属性不同，固定于硝酸纤维素膜上后稳定性也有所不同。不同蛋白的稳定性，要根据保质期具体问题具体分析。 具体产品和货号请咨询GE相关销售 1.5.4化学发光免疫分析 磁珠法化学发光免疫分析近年来发展越来越迅速，在磁珠法化学发光免疫分析中，常用到的磁珠包括羧基磁珠、链霉亲和素磁珠与氨基磁珠。磁珠的结合量与表面性质直接影响了后续的检测结果，是化学发光免疫分析的重要成分。 特点与优势： 独特的表面结构保证更大的结合面积及更大的结合量； 粒径分布均匀，批次间稳定性好； 除目录产品的1um磁珠外，还提供多种定制产品，满足研发人员的多项需求； ·多种功能基团满足化学发光免疫分析要求。 独有的双层磁层工艺，磁相应速度更快，分析通量更高 品名 货号 浓度 浓度 特性 快速羧基磁珠 65152105050350 50 mg/mL 50 mg/mL 羧基基团，双层磁层保证更快磁响应速度， 灵敏度高 链霉亲和素磁珠 21152104010350 10 mg/mL 10 mg/mL 链霉亲和素磁珠，表面特殊修饰减少非特异性吸附，背景信号低，灵敏度高 氨基磁珠 19152104010350 10 mg/mL 10 mg/mL 氨基磁珠，表面特殊修饰减少非特异性吸附，背景信号低，灵敏度高 *其他多种选择，请咨询GE Healthcare销售人员 2.上生化诊断 2生化诊断 2.1中空纤维在乳胶免疫比浊法中去除游离抗体的应用 (11)背景介绍 乳胶颗粒增强免疫比浊虫(Particle-Enhanced Turbidimetric Immunoassay，?，PETIA)A)是近年来出现的一种较为稳定准确的体液蛋白均相免疫比浊检测方法，是以单克隆或多克隆抗体为基础的改良免疫比浊分析法。PETIA已被越来越多地应用于各种血液生理指标的快速检测，如反应早期糖尿病肾病病变的尿微量白蛋白、全血中的IgE等。在PETIA所用乳胶微球的清洗、包被和回收及未包被游离分子的去除这整个生产过程中，中空纤维切向流技术都可以被很好的应用(FFig.1) 。中空纤维由于其开放式流道，不易堵塞，低剪切力，不易损坏目标分子以及操作简便，易放大等优点，使微球体的整个生产步骤更加简单和划算。 包被和回收 Fig.1中空纤维应用于PETIA法微球生产过程示意图 (22)实验条件和结果 实验处理条件 样品：聚苯乙烯微球体抗体包被悬浮液(微球球大小约150nm， 悬浮缓冲液为PB，游离抗体浓度18mg/ml) 体积：550ml 系统：QuixStand实验室切向流膜系统(Fig.2) 膜型号：UFP-750-E-3MA(可高压灭菌) NMWC：750kD 纤维管内径：：1mm 膜面积：：1110cm2 路径长度：5：30cm 循环流速：260rpm(0.9LPM)，12000sec-1 TMP： 3.6psi Fig.2QuixStand系统 实验结果 在实验过程中，透过通量Flux和过膜压力TMP稳定，，平均Flux高达84.9LMH，平均TMP为3.6psi，较低的TMP不会导致膜的堵塞( Fig.3)，3.5倍浓缩完之后利用缓冲液进行了3倍等体积的洗滤，这时浓缩液中游离抗体检测浓度为2mg/ml，未达质量标准，继续洗滤至6倍等体积后游离抗体浓度降至0.3mg/ml， 已达质量标准，」、此外，浓缩后微球体悬浮液的抗原-抗体反应度检测也已达标(表1).)，整个过程耗时在2h以内。 Time(min) Fig.3、实验通量Flux和TMP随时间变化图 表1、实验样品检测结果 样品 游离抗体蛋白含量( mg/ml) 游离抗体蛋白去除百分比(%) 抗体-抗原反应度检测 原液 18 0 不合格 3倍洗滤后浓缩液 2 88.9 不合格 6倍洗滤后浓缩液 0.3 98.3 合格 检测设备 Leadman抗体检测试剂盒 岛津UV-2450分光光度计 从实验中可看出， GE中空纤维可成功用于乳胶微球悬浮液中游离蛋白分子的去除，通量高，：速度快，操作简便，容易放大，为胶乳颗粒增强比浊法((PETIA)的成功运用起到了积极的促进作用，而且在荧光微球分离等相似的应用中也可以直接使用。 (33)中空纤维切向流技术与其他技术对比 在传统的乳胶免疫比浊法中，客户在利用乳胶颗粒或磁珠偶联完抗体等分子以后，多采用离心或磁珠分离等技术来进行分离，耗时耗力，操作复杂，不易放大，成本也居高不下，亟待改进， 下面就比较一下中空纤维切向流技术和其他技术的优劣(表2).) 表2、中空纤维切向流和传统分离技术比较 优势： 劣势： 离心 ·操作简便 ·适合小体积、多批次处理·溶剂使用量少 ·无液体残留 ·需要重悬、再分散 ·耗时长 ·稳定性差，易污染 ·很难放大 ·维修成本高 磁性分离 ·成本低 ·溶剂使用量少 ·适合较大粒径的磁性颗粒 ·需要重悬、再分散 ·速度慢 ，不能线性放大，不适合大体积工业化生产 膜包切向流 ·扰流层筛网有一定湍流混合作用·澄清、固含量低的样品通量大 ·平板式流道压降低 ·不适合微滤澄清操作 ·易出现清洗“死角” ·需要夹具，操作繁琐 ·耗材成本高 ·基本不能反冲或高压灭菌 中空纤维切向流 ·工艺线性放大简单、稳定 ·TC卫生接头，拆装十分简便·可高压灭菌，部分可SIP ·工艺重复性很好 ·处理效率高，质量优 膜柱可多次重复使用，大规模生产平均成本低 溶剂使用量稍多 ·一次性系统成本投入较高 ·工艺需要技术人员优化 中空纤维由于其独特的开放式流道，不易堵塞，易清洗，消除“死角”，降低滞留体积，很容易线性放大，适合处理固含量较多的料液，可以重复使用，大大降低了消耗成本，而且已经有众多应用实例，相信不久的将来在诊断领域一定会越来越受到用户的青睐。 *关于连接中空纤维使用的切向流过滤系统AKTAFlux详见本手册6.2章节 ( 参考文 献 ) ( [1]中空纤维膜操作手册. GE Healthcare. ) ( [2]中空纤维滤柱分离纯化应用集七. GE Healthcare. ) ( [3]郭建晖.乳胶增强免疫比浊法测定血清总IgE.医学检验与临床， 2008，19(5)：9-10. ) ( [4]王华成等.乳胶凝集免疫比浊法检测梅毒特异性抗体的性能评价.国际检验医学杂志，2012，23(15)：1877-1878. ) 2.2尿试纸条 试纸检测广泛应用于从临床化学到环境监测的多个领域，比较常用的试纸检测原理是将纤维素垫浸泡试剂中，而这些试剂在检测过程中可发生颜色反应，结果根据颜色变化进行判断。尿试纸检测大多就是基于这种以比色法测定为原则的方法。 纤维素材料是这种检测方法的基础，一致性、吸收能力、爬速和湿强度是检测产品和性能最重要的参数。在大规模生产中，纤维素材料对于检测所需活性化学物质的一致性惰性吸收保证了不同试纸条之间结果的一致性，而纤维素材料中的湿强剂极大增强了纸张的强度，尤其是湿润时的强度，使用湿强级别的纤维素纸，可以降低生产中的浪费，也降低了使用中纸张破损的风险。 Whatman为比色法试纸检测产品提供各种级别的纤维素材料，这些材料采用高纯度的纤维素材质，配合Whatman严格把控的制作生产工艺，具有高度的一致性，也使得Whatman的纤维素滤纸成为广大尿试纸生产厂家的理想选择。 等级 厚度 [pm@53kPA] 吸水量(mg/cm²) CF1 176 18.7 CF2 172 16.1 CF3 322 34.6 CF4 782 49.9 CF5 954 99.2 CF7 1873 252.3 CF10 490 42 470 840 78 3MM 340 185 31ET 500 192 C7218 720 300 CCP500 520 194 *滤纸规格及货号请咨询GE医疗生命科学部销售人员 3.分子诊断 3.1样品制备 3.1.1生物样品保存与运输 体外诊断应用不断发展使得个体化用药需求不断增长，对环境温度下生物分子的采集、运输和存储而言，标准化生物样品采集运输技术日趋重要。GE Healthcare 的Whatman FTA 技术，可满足以上新的需求。目前，FFTA产品已应用在宫颈癌筛查中阴道细胞的采集和运输，1使样品远距离采样、自采样及常温运输保存变得可能。 此外， GE Healthcare 可定制生产生物样品采集卡和试剂盒，满足客户特殊的样品采集需求。如需设计定制生物样品采集试剂盒，请联系GE Healthcare 销售代表。 采集、运输、纯化和存储DNA一均在室温下进行 Whatman FTA 卡是特殊化学试剂处理的卡片，相比未经处理的普通卡片，可以更高效保存DNA，确保其在环境温度下的长期存储。 由于被捕获的DNA可在环境温度下保存，使用FTA采集样品非常方便，而且样品采集后无需即刻冷冻并装运返回实验室，可节省特殊处理过程和冷链运输的费用，简化样品从非临床或边远区的运输过程。 Whatman FTA 技术按照原理分类有两种产品，即FTA和FTA Elute， 均可简化您样品采集和下游工作流程： ·上样时裂解细胞 ·蛋白质变性 ·DNA在环境温度下长期存储保护； 目前数据显示，22年前FTA血液样品和12年前FTA口腔脱落细胞样品仍然可被分析。 FTA 采用FTA技术后， DNA可牢固粘附在基质上，而蛋白质及抑制剂均已清洗干净。采用FTA技术的产品包括FTA卡(卡片为白色，适合有色样品)及指示型FTA卡(-卡片为粉色，适合无色样品，样品加到卡上后卡片变为白色)，)。 DNA样品圆片直接做模板 采样后， DNA牢固粘附在FTA卡上，细胞膜和细胞器已经裂解，蛋白质和抑制剂已经清洗干净((见上页图)稳定的DNA可用于环境温度运输、即时处理或长期存储。 特点： ·一步操作完成样品采集和DNA捕获； ·30分钟内完成DNA纯化用于下游应用，比如PCR， SNP分析和RT-PCR； ·环境温度下采集、运输和存储样品，节省了生物样品冰上运输和实验室冰箱存储的高昂费用； ·适用于多种样品类型，，包括血液、培养细胞、口腔脱落细胞、实体组织、植物叶片、菌液病毒、宫颈脱落细胞等。 FTA Elute 采用FTA Elute技术后，蛋白质可牢固粘附在基质上， 而DNA已经从基质中洗脱下来。采用FTAElute技术的产品包括FTA Elute卡(卡片为白色，适合有色样品)及指示型FTA Elute卡(卡片为紫色，适合无色样品，样品加到卡上后卡片变为白色)。 DNA存在于溶液中 采样后，细胞接触FTA卡后发生裂解，蛋白质仍牢固吸附在卡片上，而DNA从卡片中洗脱下来，，而且此时DNA溶液中无任何抑制剂(见上页图)])。 特点： ·环境温度下采集、运输和存储样品，节省了生物样品冰上运输和实验室冰箱存储的高昂费用； ·操作简单，无需使用DNA纯化试剂盒，将DNA纯化时间降低至15-30分钟(通常为4-16小时))； ·纯化后的DNA兼容下游多种应用，包括Q-PCR； ·小样品体积要求(：(12-125pl)，，无需采集静脉血液样品。 FTA Cards： 推荐用于血液等有颜色的样品，样品打孔圆片可直接做下游反应的模板 货号 产品 样品区域 最大加样量/区域 卡片最大加样量 包装 WB120310 FTA Micro Card 1 125 pL 125 pL 25/pk WB120355 FTA Mini Card 2 125 pL 250pL 25/pk WB120305 FTA Classic Card 4 125 pL 500 pL 25/pk *其他包装请咨询GE Healthcare相关销售 指示型FTA Cards：推荐用于口腔脱落细胞等无色或颜色较浅的样品，打孔圆片可直接做下游反应的模板 货号 产品 样品区域 最大加样量/区域 卡片最大加样量 包装 WB120311 指示型FTA Micro Card 1 125 pL 125 pL 25/pk WB120356 指示型FTA Mini Card 2 125 pL 250 pL 25/pk WB120306 指示型FTA Classic Card 4 125 pL 500 pL 25/pk *其他包装请咨询GEHealthcare相关销售 FTA Elute Cards：推荐用于DNA需要被洗脱下来，以溶液形式做下游反应模板的应用 货号 产品 样品区域 最大加样量厂区域 卡片最大加样量 包装 WB120401 FTA Elute Micro Card 4 12-40 uL 160 pL 25/pk WB120412 指示型FTA Elute Micro Card 1 125 pL 125 pL 25/pk *其他包装请咨询GE Healthcare相关销售 3.1.2玻璃纤维用于离心柱法核酸提取 玻璃纤维膜柱法(又称为硅胶膜柱法)核酸抽提方法是经典的核酸提取方法，应用于大多数离心法核酸抽提试盒中。在高离液盐浓度条件件，玻璃纤维上的硅羟基与核酸特异性结合，而蛋白可以通过离心心过而除去，而在低盐条件下，核酸与玻璃纤维的结合被打破，从而从玻璃纤维滤纸上洗脱下来。 Whatman玻璃纤维滤纸具有多种孔径，适合不同大小核酸的提取。在实际应用中，核酸得率高，无黏合剂的配方不会对核酸提取造成干扰，帮助核酸抽提试剂盒生产厂家进一步提高核酸得率与纯度。 产品 货号 尺寸 厚度 GF/B 1821-915 46cmx57 cm 675 um GF/F 1825-915 46 cm×57 cm 420 um 3.2体外诊断原料的“无人区”--酶结合物的纯化与鉴定 体外诊断试剂原料中，一些抗原、抗体往往不是直接使用，而是需要通过偶联标记，成为最为核心的原料--酶结合物。常见的标记物有： HRP(辣根过氧化物酶)、生物素(Biotin)、链霉亲和素( SA) 、AP(碱性磷酸酶)等。 在抗体、抗原与标记物偶联前，通过SDS-PAGE等检测手段，往往发现，存在不同程度上的聚集。这类聚集的发生，会对之后的偶联标记物的质量产生不确定性的影响。如果不能采取有效手段进行控制，反映在实际的研发生产过程中，就会产生较为明显的批间差。 所以需要在偶联之前对抗体、抗原进行去除聚集体的精细纯化。通常可以利用单体与聚集体分子量的差异，通过凝胶层析进行去除。对于抗原类原料，较为适合使用Superdex 75 increase进行纯化。对于抗体类原料， Superose 6increase是理想的选择。如果凝胶层析实验后，想进一步提高选择性，还可以尝试离子交换层析或疏水层析。 CaptoS impAct或者SOURCE填料是理想的选择。这个阶段的层析效果，将决定偶联后酶结合物的组成，为之后得到高纯度的酶结合物的奠定基础。 完成偶联后，所得到的酶结合物是混合物，它常常包括抗体-标记物、抗原-标记物、未偶联标记物的游离抗体、抗原、游离的标记物。所以，；需要通过以上层析技术，去除游离的标记物和抗体、抗原。这阶段的纯化通常是为了解决一些由特异性反应所造成的假阳性问题和降低检测背景。精纯的效果，将直接决定酶结合物最终的品质。 尽管2015版《中国药典》对于酶结合物的纯度鉴定方法和要求并没有提出明确规定，但作为体外诊断试剂盒核心原料的酶结合物，除了以最终的临床结果作为依据，如何对酶结合物本身进行检测，建立符合实际应用的质检标准，进而控制批间差，这对于整个试剂盒的研发生产周期内的原料质量控制是非常有意义的。 鉴于酶结合物分子量大、成分复杂的特点，，传统的SDS-PAGE并不是理想的检测手段。而基于AKTA pure和AKTAavant纯化平台所进行的微量分析级纯化是理想的检测手段。一些分析级的层析预装柱，如Superdex 200 increase、Superdex 75 increase、Minibeads、MonoQ不仅可以提供高质量的检测结果，同时可以通过自动化编程，1，在短时间内完成鉴定工作、减轻QC部门工作负担。实验生成的图谱配以Unicorn软件强大的数据分析功能，可对单次及对批次的实验结果进行计算、分析、对比，帮助QC部门控制批间差异、为定期的质量回顾提供科学的依据。 上述应用目前实验室阶段已经慢慢从手动纯化转向用层析系统纯化。轻松将带有纯化介质的预装装柱利用系统装填料到柱子的方式，来进行抗原抗体方面的纯化工作。AKTA系统作为全球纯化领域的金标准品牌，，已经在众多领域如抗体，疫苗，重组蛋白，小分子药物等应用开发中，得到广泛使用。 3.3基因芯片：： (CyDye 基因芯片是分子诊断最基本的检测手段之一，目前多种疾病的早期筛查和检测都可以通过基因芯片的形式进行检测，，例如耳聋等遗传性疾病，自身免疫疾病，肝炎等。 基因芯片是以核酸杂交原理的检测技术，荧光检测方法以其高灵敏度、宽线性范围和多通道同时检测的特点，是应用最多的检测手段。荧光检测法的基因芯片的主要过程为：首先用荧光染料标记扩增过的靶序列或样品，然后将扩增产物与芯片上的大量探针进行杂交，将未杂交的分子洗去后，用荧光成像设备对基因芯片进行成像，，根据每个点的荧光强度积分，可还原样品中靶序列的含量，从而达成对样品中靶基因的定性和定量分析。由于不同荧光染料可以在不同激发光下分别成像，荧光检测的基因芯片可以同时检测多种疾病，或对疾病进行分型筛查 CyDye系列荧光标记染料，具有极高的消光系数(EExtinction coefficient)和量子效率(Quantum Yield))，，能够最大程度吸收激发光能量，并高效转化为发射光，使得检测灵敏度大大提高，能够检测痕量痕品。CyDye系列染料还具有较强的光稳定性和化学稳定性，为分子诊断提供稳定检测。 ·活化的NHS官能团可以对RNA/DNA/蛋白质进行后标记； ·CyDye标的的核苷酸可用于CGH的检测； ·CyDye标记的亚磷酰胺可用于寡核苷酸探针的合成。 3.4室温稳定技术加速分子诊断(RTG) ，分子诊断式剂盒包括多种组成成分，例如多种缓冲液、酶、dNTP等，使得剂剂盒需要冷冻运输和储存。室温稳定技术的Ready-To-Go反应珠可以将单个反应所需的缓冲液和酶等，预先分装在反应容器中(如8连管或96孔板等)，并通过特殊处理使其成为单个反应珠，并在室温能够保持稳定，1使断试剂盒能够实现室温下长距离运输和储存。预先分装确保不同反应的重复性，减少因吸样造成的错误和污染。 室温稳定技术可以根据现有的实验方案进行产品定制，可以为试剂盒提供2年的室温稳定期。RTG反应珠在使用时仅需加入样品和水，即可进行检测，简单易用，使得可以在多种环境下进行即时检测，同时有效避免交叉污染。室温运输也大大减少运输成本。 基因组扩增是很多分子检测方法的首要步骤，如何在保证扩增高保真的同时获得大量的扩增产物是基因组扩增的关键。基于来自噬菌体的重组DNA聚合酶Phi29，和改性的随机六聚体组合引物，，；为基因组高质量扩增提供了帮助。Phi29 DNA聚合酶具有很强的校对活性，保证极其准确的DNA复制。基于Phi29DNA聚合酶的TempliPhi试剂盒，可以实现对环状DNA的滚环复制； GenomiPhi试剂盒可对线性DNA实现多链置换扩增。 少样本，高效率，检测准确是未来分子诊断市场竞争力的体现。少量临床样本，甚至在单细胞水平上的基因组分析，在不同的领域如癌症、免疫学和微生物学研究中提供了前所未有的生物学见解。研究单细胞基因组学， 扩增技术是检测的灵敏度和准确性的前提。少于1000个细胞可以使用专门的单细胞GenomiPhi DNA扩增试剂盒进行扩增，可以使扩增灵敏度达到fg级gDNA，产物可以应用到下游SNP， CGH， NGS等诊断检测方法中。 单细胞GenomiPhi可以在2h内从1pg DNA模板扩增获得4-7uggDNA，老若仅有1fg DNA模板，则在4h内可以完成扩增。 分子诊断 ☆图为gDNA扩增动力学曲线 4.其他应用 4+其他应用 4.1卡式血型鉴定 1988年发明的卡式法血型鉴定和交叉配血使抗人球蛋白应用输血检测成为现实，克服旧的方法的缺点，，使试验检测有了质的飞跃，因此被认为是输血发展史上的里程碑。 其原理是在卡式的微量柱中，充满特制的凝胶介质或细小的玻璃珠介质，介质之间的间隙只能使单个红细胞变形通过，起到类似细胞筛的作用。红细胞与与应抗体发生凝聚反应，经离心后不能完全到达柱的底部，)，而呈现阳性，全部沉到底部者为阴性，可以根据凝块位置评分4+、3+、2+、1+，因大凝块在上层，小凝块散布柱中，未凝集到达管底。 其他应用 卡式法实现了血型配血的标准化，其结果重复性好，操作规范、程序化，结果易读、稳定、明确、清楚，可保有备查。并且具有操作简便易行、安全快捷，样本体积小，易自动化等诸多优势。 其中微柱凝胶法应用尤为广泛，而专业提供各种凝胶填料的GE医疗生命科学部成为国际、国内各大厂商的首选品牌。目前GE的Sephadex G系列层析介质( G10，G15，G25，G50，G75，G100)，以及Sepharcyl系列( S-100到S-500)))：等为不同客户选用，确保了稳定的结果和优异的品质。 Sephadex系列介质选择表格如下所示： Fractionation Bed volume Maximum in 150 mM range， M. ml/g dry operating sodium Product (globular proteins) pH stability* Sephadex flow chloride (pm) Sephadex G-10 Medium <7×10 Long term： 2 to 13 2 to 3 Darcy's law 55 to 165 Short term： 2 to 13 Sephadex G-25 Superfine 1×10to5×10 Long term： 2 to 13 4to6 Darcy's lawt 15 to 88 Short term： 2 to 13 Sephadex G-25 Fine 1×10to5×10 Long term： 2 to 13 4to6 Darcy's law’ 17 to 132 Short term： 2 to 13 Sephadex G-25 Medium 1×10to 5×10 Long term： 2 to 13 4to 6 Darcy's law 80 to 260 Short term： 2 to 13 Sephadex G-25 Coarse 1×10to 5×10 Long term： 2 to 13 4 to 6 Darcy's law 87 to 510 Short term： 2 to 13 Sephadex G-50 Fine 1×103to3×104 Long term： 2 to 10 9 to 11 Short term： 2 to 13 Darcy's lawt 34 to 208 * Long-term pH stability refers to the pH interval where the medium is stable over a long period of time without adverse sideeffects on its chromatography performance. Short-term pHstability refers to the pH interval for regeneration， cleaning-in-place， and sanitization procedures. All ranges are GE Healthcare estimates. In practice this means that the pressure/flow considerations that must be made when using other SEC media do not applyto Sephadex. Doubling flow rate will double column pressure. See Appendix 2 for an explanation of Darcy's law. Sepharcyl系列根据分离目标物的分子量大小而提供的从S100-S500的选择表格如下所示： Separation range (MW) SephacrylS-100 High Resolution 1000-100000 SephacrylS-200 High Resolution 5000-250000 SephacrylS-300 High Resolution 10 000-1500000 SephacrylS-400 High Resolution 20000-8000 000 SephacrylS-500 High Resolution 40 000-20 000 000 4.2径迹蚀刻膜在诊断中的应用 径迹蚀刻膜(TEMs))：具有严格控制的孔径，可轻松实现细胞或微生物的捕获。GE医疗生命科学部为诊断客户提供多种Whatman径迹蚀刻膜，其中，大孔径的径迹蚀刻膜透明度高，可完全透光，在透射荧光检测中保证了良好的信噪比。 DAPI染色观察黑色Cyclopore径迹蚀刻膜上的酵母细胞 电镜下Cyclopore表面截留的乳胶颗粒 特点 优势 生物惰性 适合多种细胞检测 低蛋白吸附和低萃取溶出 膜本身不会对检测结果产生干扰 具有疏水和亲水表面可以选择 适合不同检测对样品透过或截留的需求 不易结合污染物或标记物 相比传统材料，背景信号低 表面光滑平整 细胞或颗粒在膜表面易见并容易被反冲回收 低滞留体积 样品利用率高 可控的光学特质(透明、半透明或有色) 保证检测的优质光学信噪比-透明的材料可以完全透过光线，有色膜可以阻止膜背面的信号 应用实例 红细胞变形性测试 健康的红血球柔韧性高，很容易改变形状而通过小孔。在一些疾病如镰刀状细胞贫血症、糖尿病和心血管疾病中，细胞的柔韧性会下降，无法再通过小孔。红细胞的变形性测试测般选择3-5 pm的膜作为筛选屏障，是目前比较通用的一种测量血细胞变形性的方法。 细胞捕获 TEMs 严格控制过滤的特点，，可以很好地用于细胞捕获。膜表面截留的细胞可以进行染色，然后在非常清晰的环i境中观察。其他的样品碎片或污染物可以通过膜孔除去，Ⅰ以提高分辨率和精确度。这可以在临床化学的任何领域应用，特别是大规模筛选程序中。 颗粒捕获检测法 采用膜法对颗粒进行捕获检测是一类广泛接受的技术，这类检测方法可以通过染色或荧光乳胶颗粒作为标记而得到进一步增长。应用径迹蚀刻膜可以进行更特异的捕获获应，将颗粒捕获在膜的表面而不是膜的内部，提高灵敏度。 种类 尺寸 包装规格 货号(孔径um) 聚碳酸酯膜 0 13mm 100片/盒 110401(0.015 pm)； 110405 (0.1 um)；110406 (0.2 um)； 110407 (0.4 um)；110409 (0.8 pm)；110410 (1.0 pm)； 110412 (2.0 pm)； 110413 (5.0 pm)； 110414 (8.0 pm)； 110415(10.0 um) 聚碳酸酯膜 019 mm 100片/盒 800307(0.03 pm)； 800308 (0.05 pm)； 800309 (0.1 pm)； 800281 (0.2pm)；800282 (0.4 um)； 800284 (0.8 um)； 800319 (1.0 um) 聚碳酸酯膜 0 25 mm 100片/盒 110601(0.015 pm)； 110602 (0.03 um)； 110603 (0.05 pm)；110604 (0.08pm)；110605 (0.1 pm)； 110606 (0.2 pm)； 110607 (0.4 pm)；110608 (0.6pm)； 110609 (0.8 um)；110610(1.0 pm)；110611 (2.0 um)；110612 (3.0 pm)； 110613 (5.0pm)； 110614(8.0 pm)；110615(10.0 pm)；110616(12.0 um) 聚碳酸酯膜 047mm 100片/盒 111101(0.015 pm)； 111103 (0.05 pm)；111104 (0.08 pm)； 111105 (0.1 pm)；111106(0.2 pm)； 111107 (0.4 pm)； 111108 (0.6 pm)； 111109 (0.8pm)；111110(1.0 pm)； 111111(2.0pm)； 111112 (3.0 pm)； 111113 (5.0 pm)；111114(8.0 pm)； 111115(10.0 pm)； 111116 (12.0 pm) 聚碳酸酯膜 090mm 25片/盒 111703 (0.05 pm)；111705 (0.1 pm)； 111706 (0.2 um)； 111707 (0.4 pm)；111710 (1.0 pm)； 111711 (2.0 pm)； 111712 (3.0pm) 聚碳酸酯膜 0142mm 25片/盒 112104(0.8 pm)； 112105 (0.1 pm)； 112106 (0.2 pm)； 112110 (1.0 um) GE医疗生命科学部采用专利性技术，提供一系列不同孔径的径迹蚀刻刻，i请联系GE医疗生命科学部相关销售人员获取更多信息。 4.3PET宫在宫颈癌检测阴道涂片制片中的应用 液基薄层细胞涂片技术( TCT) 是宫颈癌检测的一项重要技术，通过标本采集、细胞混匀、细胞的负压过滤膜采集、细胞转移等步骤，‘制成薄层玻片，然后干燥后，进行染色检验。在此过程中，采用过滤膜法的细胞采集制片方法被称为膜式制片。这种制片方式简单，快捷，相较传统的巴氏涂片，可大大提高检验的准确性。 在宫颈癌检测中，对于阴道细胞样本，一般采用7-8pm滤膜进行细胞采集，这种膜足以保证细胞成分不被穿过，以及细胞的均匀分布。但是由于在制片过程中需要采用负压，对膜的要求高，否则容易造成膜的断裂。Whatman的PET滤膜多年来以细胞得率高，!重复性好及不易断裂的优点，应用在多种自动制片机中。 种类 尺寸 孔径 货号 PET膜 24cmx100m 7-8um 113740 5.定制化服务及合同生产 5定制化服务及合同生产 GE Healthcare旗下的Amersham及Whatman产品广泛应用于生命科学、诊断、制药及环境研究等多个领域。除了提供产品之外，， GE Healthcare还利用自身通过ISO认证的生产厂房，为客户提供产品设计、六西格玛及精益生产，满足客户的多方面需求。GE Healthcare致力于与客户一起，提供满足客户需求，质量可靠的一流定制化服务与合同生产。 目前GE拥有的质量管理体系认证： ·ISO 9001 ·ISO 13485 GE Healthcare目前在桐庐拥有研发团队，，可对多种产品进行定制(j(示例如下)， 更多定制及生产需求请联系GE Healthcare相关销售人员。 ·Whatman产品：不同尺寸，规格，及试纸生产 ·Sera-mag磁珠：不同修饰基团，不同粒径磁珠 ·FTA产品 ·Ready-To-Go产品 合同生产 定制化生产 ·体系验证 ·配方研发 ·试剂盒生产及包装 ·成分分析 。终产品测试验证 ·精益六西格玛生产 ·产品设计 ·客户定制产品 ·大批次供应 ·室温化体系 ·产品设计 6.应用系统简介 Wave生物反应器 Xecellex生物反应器10L/50L 配液系统 细胞培养袋 1/2 in ReadyMate和TC快接 无菌接管机和封管机 无介入式搅拌，剪切力低；溶氧传递系数高；符合CFRPart 11支持Batch/Feed batch/Perfusion培养方式 培养范围：引： 3300ml-25L，可培养贴壁细胞和悬浮细胞 底部磁力耦合搅拌，， !剪切力低；底通微泡和大泡通气，溶氧传递系数高；符合CFR Part 11 支持Batch/Feed batch/Perfusion培养方式 培养范围：44.5-50L，i可培养贴壁细胞和悬浮细胞 XDR50可以支持细胞和微生物培养 PP和不锈钢材质 可监控和调节pH/电导/温度体积范围：550L/100L/200L/500L/1000L/2500L 双层膜结构， y辐照灭菌规格：2L/10L/20L/22L/50L多种配置，可实现进液/补料/收获/取样 支持管道快速连接和系统组装。 基本规格： 1/4 in、3/8 in、1/2 in、3/4 in、Mini TC、TC 支持热塑管连接和断开。 多种管夹，支持管道外径1/4in、5/16 in、3/8 in、7/16 in、1/2 in、9/16 in、5/8 in、、3/4 in、7/8 in 6.2 AKTAflux半自动台式切向流膜过滤系统 AKTAflux是一种多用途的切向流过滤系统，用于浓缩和洗滤(缓冲液置换)以及细胞收获和澄清。这个系统可以通过使用膜包和中空纤维膜柱很容易地进行过滤。AKTA flux系统现有两种型号： AKTAfluxs用于研究和过滤器筛选，AKTAflux 6用于工艺开发和小规模生产。半自动功能能够进行终点控制、恒截留体积( CRV) 控制和数据记录。这些功能节省的时间可以用于完成实验室中的其它任务。从易于使用的触摸屏上可以方便地监测和处理过程信息和控制。这个系统能够进行低工作体积的样品处理并达到各种浓缩倍数。AKTAflux过滤系统非常适合作为AKTA层析系统的补充在蛋白质纯化工作流程中使用。 AKTAflux具有如下优势： 1)同时兼容中空纤维膜柱和平板膜包，具有更广的应用范围； 2)直观的触摸屏(内置计算机)便于系统的使用和程序的设定； 3)极小的循环体积适合用于少量样品的处理或达到更高的样品浓度； 4)可以设定多种工艺参数(流速、压力、温度等)的警告和报警，对于工艺过程进行及时的提醒，，使得使用人员操作时更加轻松； 5)自动化终点控制和数据记录节省时间用于完成实验室中的其他任务； 6)可以进行恒定体积洗滤或恒定流速的滤出，有效减缓膜的污染，延长膜寿命. AKTAflux切向流过滤系统有两种版本： AKTAflux s((左)用于研究和过滤器筛选， AKTAflux6( 右)用于工艺开发和小规模生产 AKTAflux系统规格： 一般规格 AKTA flux s AKTA flux 6 尺寸(W×LxH) 460x400x570mm 680×520×800mm 重量，大约 28kg 40 kg 储液罐体积 0.5L 8L 电压 100-120/220-240VAC， ±10% 100-120/220-240VAC， ±10% 相数 单相 单相 频率 50-60Hz 50-60Hz 最大功率 300 VA 400 VA 操作范围 进料泵压力 最大4 bar 最大4 bar 输送泵： 出口压力 最大1 bar 最大1 bar 渗透泵 进口压力 出口压力 最大1 bar 最大1 bart 最大1bar 最大1 bart 室温 2℃-35℃ 2℃-35℃ 液体温度： 过程温度 在位清洗 2℃-40℃ 2℃-40℃C 最大50℃ 最大50℃ 流体管路 部件和管道 储液罐 -0.4-4.0 bar+ -0.1-0.05 bar -0.4-4.0bar+ -0.1-0.05 bar 系统容量 AKTA flux s AKTA flux 6 泵管路PFB 泵管路PFD 管路尺寸 物料流量范围 内径3.2 mmx外径6.4 mm4 bar时20-150 mL/min 内径6.4mmx外径9.6 mm1.5 bar时20-350 mL/min 内径6.4mmx外径12.7 mm100-6000 mL/min 输送流量范围 1-50 mL/mint 1-50mL/mint 20-1000 mL/min 渗透流量范围 产生的TMP范围 1-50 mL/mint 0.3-4.0 bar 1-50 mL/mint 0.3-2.5 bar 20-1000 mL/min 0.3-4 bar 滞留体积 最小工作体积* 10mL 15mL 17 mL 21mL 120mL150mL *流体管路和泵管路允许的最大压力为4bar， 渗透泵的最大压力被指定为1 bar。 泵管路PD被限定为1.5 bar。 *在150 mL/min下测试。总的最小工作体积需要加上过滤器体积。 * 关于中空纤维在样品前处理步骤中的应用详见1.2.3章节 ☆关于中空纤维在乳胶免疫比浊法中去除游离抗体的应用详见2.1章节 6.3层析系列AKTA简介 6.3.1 AKTA pure系列 AKTA pure是一台灵活和直观的层析系统，可用于快速纯化从微克到克水平的蛋白、肽和核酸等目标产物。同时AKTA pure是一台可靠的系统，它的硬件以及UNICORNTM软件与各种层析柱和填料一起可满足任何纯化挑战。系统支持各种层析技术，并满足需要提供最高纯度的自动化要求。系统配置灵活，并可以根据您的需要随时升级，进一步提高其性能。 AKTA pure系统是在蛋白领域超过五十年研究经验和三十年AKTA纯化系统开发经验的结晶。 AKTA pure提供两种型号： AKTA pure 25适合广泛的科研应用和多用户环境下的纯化任务； AKTA pure 150适合在大规模纯化下优化资源利用和提高产能。 新一代AKTA系统 AKTA pure具有以下优点： ·多样化选择的模块化系统设计可以灵活地应用在蛋白质和多肽的纯化中； ·客户定制化系统可随着用户研究需要的进程而轻松升级； ·系统设计理念来源于公认的AKTA avant，可靠性值得信赖； ·UNICORN 7软件提供简单、直观和灵活的预编方程模板和系统控制，t可简化您的工作； ·可用于所有GE Healthcare实验室规模层析柱。 6.3.2 AKTAMM avant 系列 AKTA avant优点是用于方法探索和纯化工艺优化的全自动智能型制备层析系统((图1)，现有两个型号。AKTA avant两款系统具有不同的流速/压力参数，但具有相同的硬件装置。 AKTA avant 25系统最大设计流速为25 ml/min， 用于填料筛选，方法优化和数百毫克级样品制备。AKTA avant 150系统最大流速为150 ml/min，可用于填料筛选方法优化和工艺放大，以及克级样品的制备。专为AKTA avant开发的UNICORNTM7版控制软件，用于提高纯化效率。AKTA avant为快速、高质量的蛋白分离并同时维持灵活性和工艺可靠性提供一种完整的解决方案。 关键性能和优点： 整合在UNICORN7软件中的实验设计( DoE))1工具，可以通过在更少的系统性设计的实验，捕捉更准确的信息，从而节约时间和成本。 ·可以识别每根层析柱及其运行历史数据，提供可追溯性，保障凝胶操作的安全性； ·集成半导体制冷的组分收集器，可以保护纯化的样品活性； ·BufferPro自动在线缓冲液配制功能，减少了用于缓冲液混合的手动滴定所需要的时间，提高您的工作效率和产出； ·UNICORN7采用可视化程序编辑界面用于直观和灵活的方法编辑，并能够在不同纯化规模的AKTA avant上进行方法转换，直观而轻松完成制备规模的线性放大。 ( ☆ 关于抗原抗体纯化应用详见手册1.2.2章节 ) ( ☆ 关于SEC层析技术在原料质控方面的应用详见手册1.3.1章节 ) ☆关于样品偶联前处理的应用详见手册1.4章节 *关于酶制备的纯化应用详见手册3.2章节 6.4 Biacore系统简介 Biacore系统应用表面等离子共振原理 (Surface Plasmon Resonance，SPR) 对分子间相互作用过程实时监控，检测过程中无需对待测分子进行标记或处理，是目前灵敏度最高且可以提供实时、动态和定量信息的分子互作分析系统。它不仅提供分子结合过程的动力学、亲和力和特异性等表征数据，还能高灵敏、高特异性地测定目标分子的活性浓度。 Biacore系统目前在国内外领先的科研机构和生物医药企业得到大量应用，涉及基础科研、药物研发、试剂开发、生产以及质控等诸多领域，美国、欧洲、日本都已将SPR技术写入法规药典。 Biacore 8K：高通量与高质量互作数据兼得的最新一代SPR系统 高通量，16组检测通道，8根进样针平行分析； 每小时内完成384个样品结合水平筛选，64组动力学表征仅需要5小时； ·60小时无人值守作业，，4-40℃样品仓控温，支持4块96/384孔板； 高灵敏度，<0.02RU 超低噪音水平，满足小分子量样品和超低偶联分析需求； ·仅需要1块芯片完成检测，通量更高但成本更低； 全新的ABA、2D Kinetics模块，满足药物竞争抑制实验、条件摸索和快速动力学表征。 Biacore S200)：：超高灵敏度分子相互作用分析系统 ·超高灵敏度，，<0.015RU，对有机化合物没有分子量下限，浓度检测限降至pM级； 样羊消耗量降至ng级，最小进样体积2pl，每通道固定样品仅需要0.03到3 pg； 全新的ABA模块，拓展更多应用； 一天可检测>400个样品，4-45℃控温； 软件支持高达5000个数据的批处理和自动质量控制 ·24通道检测系统，448小时无人值守、灵活支持96孔板、384孔板和1.5mlEP管等不同的上样方式。 Biacore T200： 全功能的分子相互作用分析系统 ·基于标准曲线和无需标曲两种浓度定量方法； ·完整的免疫原性分析模块和样品回收模块； ·提供更多结构信息的热力学分析模块； ·全面的亲和力、动力学、生物类似药一致性分析功能； 48小时无人值守、支持96孔板、384孔板或1.5ml EP 管上样； 4通道检测系统，高灵敏度<0.03RU， 48h无人值守，4-45℃控温。 iacore X100：智能的高性能分子相互作用系统 ·流程化软件设计助您快速开展生物分子互作研究； 满足蛋白、抗体等分子类型的相互作用分析； 1创新的单循环动力学与传感图质控模块； ·j选配的扩展包为变温分析、在线脱气、有机溶剂校正和活性浓度分析等提供支持； 双通道检测系统，灵敏度<0.1RU，24小时自动运行，，4-40°控温。 关于免疫诊断中原料筛选应用详见1.1章 关于biacore在迷断质控应用详见1.3.2章 6.5 AI680系统简介 Amersham Imager680超灵敏成像仪 Amersham Imager 680系列产品是Amersham Imager 600系列的升级产品，用于凝胶和膜中蛋白质与DNA样品数字图像的检测和分析。检测范围包括：：化学发光、荧光(紫外、红、绿、蓝)和白光成像。该产品将继续搭载Fujifilm先进的光学系统，用户界面直观，结合GE在蛋白免疫印迹应用方面的专业知识，提供卓越出众的图像质量。 ·操作直观： 可使用平板电脑直接操作仪器，采集到分析数据一气呵成。 。性能卓越：沿用Super CCD和FujinonTM镜头，通过优良的光学系统传输高质量图图。 系统稳健： 该产品适合多用户实验室，只需极少的保养维护。可设置九位登录密码以确保系统安全性。 升级特点 1.成像分辨率提升 化学发光成像模式中，共有4种像素合并方式可选择，可选择“no binning"模式，|以获得更清晰图片。 3.操作软件升级 可连续累加曝光成像50张，最长曝光时间增至10小时。 2.Marker和化学发光条带同时成像功能化学发光模式可以同时成像化学发光样品和彩色分子量标记物。 4.安装与操作认证(IQ/OQ**)19验证服务 GE Healthcare 在设备的整个寿命期间提供验证服务支持您的设备。我们的验证测试和程序由验证专家开发和批准，并且由训练有素和经过认证的服务工程师执行。我们的方法与 GAMP5、ICH Q8-10 和 ASTM E2500 保持一致，据此验证活动和文件考虑到风险、复杂、差异等因素，集中关注实验结果的关键因素。我们提供的验证服务包括安装与操作认证 IQ/OQ**)、再认证和变更控制协议 CCP)。 ( *OD校正功能仅在白光透射模式下进行 ) ( **IQ/OQ需额外购买 ) 关于GE医疗集团 GE医疗集团通过提供革新性的医疗技术和服务，于开创医疗护理的新时代。我们在医学成像、信息技术、医疗诊断、患者监护系统、药物研发、生物制药技术、卓越运营和整体运营解决方案等领域拥有广泛的专业技术，能够帮助客户以更低的成本为全世界更多的人提供更优质的服务。此外，我们还和医疗行业领袖一道，正努力通过全球政策，打造成功的、可持续的医疗体系。 我们的“健康创想”愿景普及全球。我们不断通过创新在世界范围内推动降低医疗成本、增加医疗机会、提高医疗质量。GE医疗集团总部设在英国，是通用电气公司(纽约证券交易所： GE)下属的业务集团之一。GE医疗集团的员工分布于全球100多个国家和地区，致力于为医疗专业人士和患者服务。欲了解更多有关GE医疗集团信息，请致电客服热线线访问公司网站。 全国免费客服热线：：8800-810-9118 GE医疗中国 北京办公室上海办公室广州办公室成都办公室北京市经济技术开发区上海市张江高科技园区广州市天河区珠江新城花城大道87号成都市高新西区西芯大道3号同济南路1号华佗路1号通用电气大厦10楼创智联邦3号楼、4号楼邮政编码：100176邮政编码：201203邮政编码：510623邮政编码：611731电话：010-58068888电话：021-38777888电话：020-38157777电话：028-62722345传真：010-67872812传真：021-38777451传真：020-38157797传真：028-62722464 ( O[2018]通用电气公司 (General Electric Company) GE， GE Monogram 是通用电气公司 (General Electric Company) 的商标。 ) ( 未经通用电气(GE)公司事先的书面许可，不得以任何方式进行复制或再造。该资料中任何内容不应被使用于诊断或治疗任何的病情或疾病。读者请务必咨询医疗卫生专业人士。 ) ( 通用电气(GE)公司有权在任何时候，在不另行通知的情况下，不负有任何义务地对上述规格和性能等进行更改，并有权终止该产品的供应。详情请与您当地的 GE 业务代表联系。 ) ( 禁忌内容或者注意事项详见说明书若推荐给个人自用的医疗器械的广告，应当显著标明"请仔细阅读产品说明书或者在医务人员的指导下购买和使用" ) 体外诊断（IVD,In-Vitro Diagnostics）定义指将血液，体液，组织等样本从人体中取出，使用体外检测试剂，试剂盒，校准物，质控物等对样本进行检测与校验，从而对疾病进行预防，诊断，治疗检测，后期观察，健康评价，遗传疾病预测等一系列过程。体外诊断包括诊断仪器和诊断试剂两个部分，其中体外诊断仪器归属于医疗器械二级分类下的临床检验分析仪器，而诊断试剂则属于生物医药制品中的生物制品大类。按照检测原理或检测方法，可以分为生化诊断、免疫诊断、分子诊断、微生物诊断、临检类诊断、病理诊断等。而按照检测环境及条件不同，可以分为专业实验室诊断和POCT。其中生化，免疫和分子三大诊断仍是我国体外诊断的主要方法。而从IVD行业未来的发展归根结底在于新技术和新指标。在技术方面，自动化程度，检测精度，检测速度和成本四方面因素，将会成为衡量检测技术的主要指标。随着国家管理法规的日益严格，对于供应商的原材料和生产设备的要求越来越高。