海水、海洋沉积物和海洋生物体中六溴环十二烷检测方案(液质联用仪)

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SSL-CA19-114Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-407 http：//www.shimadzu.com.cn上海市徐汇区宜州路180号B2栋咨询电话：021-34193996Hotline：021-34193996Building B2， No.180 Yizhou Road， Shanghai LC-MS/MS 测定海水，海洋沉积物和海洋生物体中3种六溴环十二烷异构体含量 LCMSMS-407 摘要：本文对海水，海洋沉积物及海洋生物体样品中的 HBCDs 以正己烷提取，经过 SPE 小柱净化后，使用岛津超高效液相色谱仪 LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8050联用检测，建立了测定海水，海洋沉积物和海洋生物体中3种HBCDs异构体(a，B，y-HBCDs)的方法。结果表明：在0.1~50 ng/mL范围内， 3种 HBCDs异构体内标法校准曲线线性良好，线性相关系数r均不低于0.9991；参照标准HJ168，将浓度为0.1 ng/mL标准样品连续8针进样，仪器定量限为0.072~0.084 ng/mL； 海水样品中各目标物加标回收率为71.0~75.1%，海洋沉积物样品加标回收率为86.3~106.5%，海洋生物体加标回收率为79.8~87.4%. 六溴环十二烷 (HBCDs)位列世界三大阻燃剂产品之一，作为添加型阻燃剂，其容易从产品中释放到环境中，造成对水体，土壤等的污染，且在环境中极难降解，造成对环境的持久危害。环境中的 HBCDs 可进入生物体内，并通过食物链进入动物和人类体内，对内分泌和免疫系统等产生不利影响，引发一系列疾病。2008年10月，欧盟审议通过了15 种 SVHC (高度关注的物质)，其中包括 HBCDs； 2013年5月《关于持久性有机污染物的斯德哥尔摩公约》禁用化学品 黑名单中亦包括了 HBCDs；2017年起《中国严格限制进出口的有毒化学品目录》中收录了 HBCDs， 其生产、使用和进出口被严格限制。 本文对样品中的 HBCDs 以正己烷提取，经过 SPE小柱净化后，使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8050联用检测，建立了测定海水，海洋沉积物和海洋生物体中3种 HBCDs 异构体(a，B，y-HBCDs) 的方法，供相关检测人员参考。 图1六环十二烷结构式 I实验部分 1.1仪器 本实验使用超高效液相色谱仪LC-30A、三重四极杆质谱仪LCMS-8050联用系统。具体配置为LC-30AD×2输液泵， DGU-20As 在线脱气机， SIL-30AC 自动进样器， CTO-20AC柱温箱， CBM-20A 系统控制器，LCMS-8050三重四极杆质谱仪， LabSolutions Ver. 5.91色谱工作站。 表1梯度时间程序 Time(min) Module Command Value 3.00 Pumps Pump B Conc. 90 6.50 Pumps Pump B Conc. 90 6.60 Pumps Pump B Conc. 50 10.00 Controller Stop 质谱条件 离子化模式： ESI(-)雾化气流量：2.0 L/min接口电压：-4kV加热气流量：10.0 L/min接口温度：300℃DL温度：120℃加热块温度：400℃干燥气流量：10.0L/min MRM参数：见表2 表2MRM 参数 ID 化合物名称 监测离子对 Q1 pre CE Q3 Pre (V) (V) (V) 1 六溴环十二烷 640.70>80.90* 22.0 25.0 30.0 (HBCD) 640.70>78.90 22.0 22.0 15.0 C12-六溴十二烷 (C-HBCD) 2 652.70>78.90 22.0 24.0 14.0 注：带“*”表示定量离子对， HBCD不同异构体MRM参数相同 1.3样品前处理 1.海水样品： (1)提取：量取25mL海水样品于50mL离心管中，加入10 uL 混合内标标准使用液(500ng/mL)， 再加入5mL正己烷，剧烈振荡2 min， 静置分层后，取上层正己烷，收集于15 mL离心管中，再加入5mL正己烷，重复上述操作，合并萃取液，加入无水硫酸钠除水，40℃下N2吹干，加入5mL正己烷溶解，震荡1 min 备用； (2)净化：移取提取液加至已用5mL正己烷活化后的硅胶固相萃取柱(6mL，含1g硅胶)上，先用2mL正己烷淋洗，再用5mL二氯甲烷洗脱，洗脱液于40℃下氮气吹干，加1.00mL甲醇，旋涡振荡1 min，经0.22 um 有机相微孔滤膜过滤后分析。 2.海洋沉积物样品： (1)提取：称取2.00g(准确到0.01g)待测样品，置于15mL离心管中，加入10 pL内标标准使用液(500ng/mL)， 再加入5mL正己烷，涡旋振荡1 min， 超声振荡10 min 后， 6000 r/min 离心5 min， 将上清液转移至15mL离心管中；残渣用5mL正己烷按上述方法再提取一次，所得上清液合并，在40℃下N吹干，加入5 mL正己烷溶解，震荡1 min 备用； (2)净化：操作步骤同海水样品。 3.海洋生物体样品： (1)提取：称取2.00g(准确到0.01g)质质后的待测样品(干紫菜)，置于15mL离心管中，加入10 uL内标标准使用液(500ng/mL)， 再加入5mL正己烷，涡旋振荡1 min， 超声振荡10 min 后， 6000 r/min离心5 min， 将上清液转移至15mL离心管中；残渣用5mL正己烷按上述方法再提取一次，所得上清液合并，在40℃下N2吹干，加入5mL正己烷溶解，震荡1 min 备用； (2)净化：操作步骤同海水样品。 结果与讨论 2.1标准样品色谱图 a，B，Y-HBCD标准溶液 MRM色谱图如图2所示。 图2.a，B，y-HBCD标准溶液MRM色谱图(0.5ng/mL) 2.2标准曲线 以甲醇为溶剂，配制1 ug/mL a，B，y-HBCD标准混合溶液及 0.5 ug/mL[3C1z]a，B，y-HBCD 内标混合溶液.以50%甲醇水溶液逐级稀释得浓度分别为0.1、0.2、0.5、1、5、10、20、50 ng/mL 的混合标准溶液(均含5ng/mL 混合内标)i)，取5uL进样，以目标组分与内标物的浓度比为横坐标，峰面积比为纵坐标，绘制标准曲线如图3. 面积比(x10) 面积比 图3标准曲线(上左：a-HBCD， 上右： B-HBCD，下：Y-HBCD) 表3标准曲线方程、线性相关系数 ID 组分名称 标准曲线方程 线性范围 相关系数 准确度% (ng/mL) (R) 1 a-HBCD Y=1.02X-0.004 0.1~50.0 0.9991 89.0~108.9 2 B-HBCD Y=0.92X+0.007 0.1~50.0 0.9995 89.3~109.0 3 y-HBCD Y=1.02X-0.001 0.1~50.0 0.9991 91.1~109.5 2.3.检出限 参照标准HJ168，将浓度为0.1 ng/mL标准样品连续进8针，以测定结果计算其标准偏差S为0.006~0.007ng/mL，此时仪器检出限IDL=S×2.998(n=8)，以4倍检出限确定目标物的定量限。测定结果标明：仪器检出限为 0.018~0.021ng/mL，定量限为 0.072~0.084 ng/mL。 2.4样品检测结果和加标回收率 将待测样品及加标样品(加标浓度5.0 ng/mL)，安照“1.3样品前处理”中步骤处理后，得样品检测结果和加标回收率，结果如表4所示。 表4样品结果及加标回收率 海水 海洋沉积物 海洋生物体 No. 化合物名称 检测结果 回收率 检测结果 回收率 检测结果 回收率 (ng/L) (%) (ng/L) (%) (ng/L) (%) 1 a-HBCD N.D 75.1 N.D 86.3 N.D 80.9 2 B-HBCD N.D 71.0 N.D 106.5 N.D 87.4 3 V-HBCD N.D 72.6 N.D 102.4 N.D 79.8 ■结论 本文对海水，海洋沉积物及海洋生物体样品中的 HBCDs 以正己烷提取，经过 SPE 小柱净化后，使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A 和三重四极杆质谱仪 LCMS-8050 联用检测，建立了测定海水，海洋沉积物和海洋生物体中3种HBCDs异构体(a，B，y-HBCDs) 的方法。结果表明：在0.1~50 ng/mL范围内，3种HBCDs异构体内标法校准曲线线性良好，线性相关系数r均不低于 0.9991；参照标准HJ168， 将浓度为0.1 ng/mL标准样品连续8针进样，仪器定量限为 0.072~0.084 ng/mL；海水样品中各目标物加标回收率为71.0~75.1%，海洋沉积物样品加标回收率为 86.3~106.5%，海洋生物体加标回收率为79.8~87.4%。 Shimadzu(China)CO.，LTD. Analytical Applications Center 本文对海水，海洋沉积物及海洋生物体样品中的HBCDs以正己烷提取，经过SPE小柱净化后，使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8050联用检测，建立了测定海水，海洋沉积物和海洋生物体中3种HBCDs异构体（α,β,γ-HBCDs）的方法。结果表明：在0.1~50 ng/mL范围内，3种HBCDs异构体内标法校准曲线线性良好，线性相关系数r均不低于0.9991；参照标准HJ168，将浓度为0.1 ng/mL标准样品连续8针进样，仪器定量限为0.072~0.084 ng/mL；海水样品中各目标物加标回收率为71.0~75.1%，海洋沉积物样品加标回收率为86.3~106.5%，海洋生物体加标回收率为79.8~87.4%.