玉米、大米、小麦和玉米油中玉米赤霉烯酮检测方案(固相萃取仪)

智能文字提取功能测试中

自动化样品前处理解决方案-RK-2020-F002 Knowledge Optimized Laboratory 解决方案 玉米、大米、小麦和玉米油中玉米赤霉烯酮的测定 关键字 全自动固相萃取；高效液相色谱法；玉米赤霉烯酮 介绍 采用Raykol Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪分析粮油中的玉米赤霉烯酮，试样经过90%乙腈水溶液提取，提取液经离心、稀释后用含有玉米赤霉烯酮特异抗体的免疫亲和柱自动净化。用5mL水淋洗柱子将免疫亲和柱上的杂质除去，以甲醇洗脱免疫亲和柱。将洗脱液在55℃条件下氮吹干，用1mL初始流动相定容，经高效液相色谱仪上机分析。 图-1玉米赤霉烯酮结构式 本应用文章参考GB5009.209-2016《食品中玉米赤霉烯酮的测定》第一法，采用免疫亲和柱净化，高效液相色谱检测，建立了复杂粮油样品基质中玉米赤霉烯酮高灵敏度的前处理和分析方法，得到四种常见粮油基质中玉米赤霉烯酮的加标回收率在88.0-112.0%之间， RSD值小于5%。 1.仪器、耗材 Raykol Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪 Raykol Auto Prep 200 全自动液体样品处理工作站 Raykol AutoEVA-60 全自动平行浓缩仪 玉米赤霉烯酮免疫亲和柱(北京中检葆泰生物 2.标准曲线配置 使用睿科 Auto Prep 200可实现标准品的全自动化配置，可将购买的单标母液(1000mg/L)通过工作站的直接稀释模式，配置成浓度为 10 mg/L的工作中间液，紧接着可通过程序设置，吸取该工作液，配置一条浓度分别为 0.01mg/L， 0.02 mg/L，0.1 mg/L， 0.2 mg/L 和 0.5 mg/L 的标准工作曲线。 3.样品提取与前处理 大米、玉米、小麦样品 准确称取5g粉碎过的样品于50 mL离心管中，加入20mL 乙腈-水溶液(9：1)(v/v)，涡旋震荡提取20 min， 以7000 r/min 的转速离心5 min； 玉米油样品 准确称取5g粉碎过的样品于 50 mL 离心管中，加入20 mL乙腈-水溶液(9：1)(v/v)， 涡旋震荡提取 20 min， 以7000 r/min 的转速离心5 min；固相萃取净化条件 表-1固相萃取净化条件 全自动固相萃取仪 睿科Fotector Plus 固相萃取柱 玉米赤霉烯酮免疫亲和柱(60 mg/3mL) 淋洗 超纯水 洗脱 甲醇 以2 mL/min的速度精确上样10mL待测液，5mL水清洗样品瓶，5mL水淋洗免疫亲和柱，气推30 mL吹干免疫亲和柱，推速为80 mL/min。最后用2mL 甲醇以0.5mL/min 的速度洗脱样品，收集 技术有限公司，60 mg/3mL) 高效液相色谱： Waters ACQUITY UPLC I-Class配备大体积流通池 甲醇(Merck，色谱纯)；乙腈(Merck， 色谱纯)；吐温-20 (Sigma， 试剂纯)；超纯水 (Waston) PBS盐包 图-2. Auto Prep 200 液体工作站配标程序 取5mL上清液于试管中，加入20 mL 0.1%吐温-20的 PBS缓冲液混匀，以7000 r/min 的转速离心5 min，取10 mL上清液于80 mL 上样管中，待用。 取5mL上清液于试管中，加入20 mL 0.1%吐温-20的PBS 缓冲液混匀，以7000 r/min 的转速离心5 min，取10 mL上清液于80mL上样管中，待用。 洗脱液用睿科 AutoEVA-60 全自动平行浓缩仪于55℃、2 psi 条件下氮吹干，用初始流动相定容至1 mL， 过滤膜上机分析。详细步骤见图-3。 序号 命令 溶剂 排出 (min) 清洗样品通道 H20 2.8 2 填充样品路径 H20 40 3 1.3 3 特殊上样 废水 2 10 5.8 4 清洗样品瓶 H20 废水 80 5 3.4 5 气推 废水 80 30 22.2 6 清洗注射泵 CH30H 80 5 0.5 7 洗脱 CH30H 收集 0.5 2 4.4 8 气推 收集 0.5 2 4.4 9 气推 收集 80 120 1.6 10 结束 11 图-3. Fotector Plus 玉米赤霉烯酮免疫亲和净化方法 4.检测条件 表-2玉米赤霉烯酮液相色谱检测条件 色谱柱 Waters BEH-C： (2.1×100 mm， 1.7 um) 流速 0.200 mL/min 流动相 水：甲醇：乙乙=46：8：46 柱温 35°C 进样体积 10uL 梯度洗脱 等度洗脱 荧光检测器 激发波长303nm，发射波长440nm 5.样品测试 玉米油样品加标测试 取空白玉米油样品5g， 添加20 ug/kg 的玉米赤霉烯酮标准品，进行上述步骤的前处理净化，样 品回收率如下表-3所示： 表-3添加水平为 20 ug/kg 玉米油样品的回收率 基质 回收率 平均回收率 RSD 1 2 3 4 5 6 玉米油 106.4% 107.3% 104.6% 113.9% 108.1% 104.7% 107.5% 3.2% 大米、玉米、小麦样品加标测试 分别取大米、玉米、小麦样品各5 g， 添加20ug/kg 的玉米赤霉烯酮标准品，进行上述步骤的前 处理净化，样品回收率如下表-4所示： 表-4添加水平为20 ug/kg 大米的回收率结果 基质 回收率 平均回收 率 RSD 1 2 3 4 5 6 大米 94.8% 93.2% 91. 4% 95.0% 89.8% 95.4% 93.3% 2.4% 玉米 91.2% 88.6% 95.2% 94.2% 97.4% 93.2% 95.0% 2.9% 小麦 104.2% 100.8% 100.0% 108.8% 112.0% 109.3% 105.9% 4.6% 6.结果与讨论 样品提取液 pH对回收率的影响 只用纯水稀释样品提取液进行上述净化步骤，样品中的加标回收率只有71-78%；若采用0.1%吐温-20的 PBS 缓冲液进行样是提取液稀释，样品回收率为88-112%。因此需要加入 PBS 缓冲液进行样品上样环境 pH 的调节。 洗脱速度的影响 采用1 mL/min 的洗脱速度，洗脱效果不佳，回收率在72%-81%；降低洗脱速度至0.5 mL/min，洗脱效果有明显提升，回收率在88-112%。因此洗脱速度不宜设置得过快。 乙腈提取液用 PBS 缓冲液稀释后容易变浑浊，用滤纸过滤混合液效果不佳，因此建议采用高速离心的方式使混合液变澄清以利于后续的过柱。 谷物中离心完成后，不可放置过长时间，否则谷物容易重新吸水，可能导致提取液的浓度过高， 采用 Auto Prep 200 全自动液体工作站搭配Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪及 AutoEVA-60全自动平行浓缩仪整体解决方案，准确性、重复性、再现性均满足实验要求，能够用于 GB5009.209-2016《食品安全国家标准食品中玉米赤霉烯酮的测定》方法对大米、玉米、小麦和玉米油的测定。 采用 Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪对样品进行检测能同步进行6个样品净化，连续自动处理60个样品，做样通量高；同时可无人值守， 使样品的回收率偏高，影响测试结果。 固相萃取进行提取液净化前，特别对于偏酸或偏碱性样品，应用 PBS缓冲溶液(pH=7.4) 进行稀释后上机，否则可能会导致回收率偏低。 大幅度减少了工作人员的工作量，提高了工作效率。此外还可避免工作人员因操作失误导致的检测偏差，也可将实验人员更迭对检测结果的影响最小化。Auto Prep 200 全自动液体工作站可实现混标、标准曲线的自动配置，全程无需人为值守，让实验人员远离有毒有害的化学物质，保护身体健康。AutoEVA-60 全自动平行浓缩仪处理通量高，60个样品可同时进行氮吹，实验平行性好，且耗气量小，省时省力。 全自动液体样品处理工作站 高通量全自动固相萃取仪 全自动平行浓缩仪 标液配制 净化 浓缩 RayKol 睿科集团股份有限公司 RayKol Group Corp.， Ltd. 网址： www.raykol.com 电话：400-885-1816 邮箱： info@raykol.com 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知 @睿科集团股份有限公司 2020年5月版 邮箱： info@raykol.com网址：www.raykol.com热线： 网址：www.raykol.com邮箱： info@raykol.com热线： 采用Raykol Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪分析粮油中的玉米赤霉烯酮，试样经过90%乙腈水溶液提取，提取液经离心、稀释后用含有玉米赤霉烯酮特异抗体的免疫亲和柱自动净化。用5 mL水淋洗柱子将免疫亲和柱上的杂质除去，以甲醇洗脱免疫亲和柱。将洗脱液在55 ℃条件下氮吹干，用1 mL初始流动相定容，经高效液相色谱仪上机分析。本应用文章参考GB 5009.209-2016《食品中玉米赤霉烯酮的测定》第一法，采用免疫亲和柱净化，高效液相色谱检测，建立了复杂粮油样品基质中玉米赤霉烯酮高灵敏度的前处理和分析方法，得到四种常见粮油基质中玉米赤霉烯酮的加标回收率在88.0-112.0%之间，RSD值小于5%。