红鱱鱼中水解氨基酸检测方案(氨基酸分析仪)

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DKSH Biochrom30+氨基酸分析仪检测红鱼鱼中水解氨基酸 摘要： 以红鳕鱼为原料，使用 Biochrom30+全自动氨基酸自动分析仪对其肌肉的氨基酸组成进行分析。结果表明红鱼肌肉中氨基酸总量的质量百分比为16558.3mg/100g，必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸总量的 39.78%，鲜味氨基酸占氨基酸总量的 39.09%。 -、样品前处理 1、 所用试剂 1、1 浓盐酸，浓度≥36%，优级纯 1、2 6mol/L盐酸：取500mL 盐酸加水稀释至1000mL，混匀。 1、3 水：去离子水 1、4 苯酚：须重蒸 1、5 17 种氨基酸标准品 行号 氨基酸 行号 氨基酸 1 Asp 天冬氨酸 2 Thr 苏氨酸 3 Ser 丝氨酸 4 Glu 谷氨酸 5 Pro 脯氨酸 6 Gly 甘氨酸 7 Ala 丙氨酸 8 Cys 胱氨酸 9 Val 缬氨酸 10 Met 蛋氨酸 11 lle 异亮氨酸 12 Leu 亮氨酸 13 lyr 酪氨酸 14 Phe 苯丙氨酸 15 His 组氨酸 16 Lys 赖氨酸 17 Arg 精氨酸 2、 前处理设备 1)分析天平：感量分别为0.0001g和0.00001g。 2))水解管：耐压螺盖玻璃试管，体积为 25mL 3) 匀浆机。 4)无油真空泵 5)干浴水解浓缩仪 6)移液管 1)0.22um 滤膜 3、 样品制备(参考国标GB 5009.124-2016) 原料鱼手工去除鱼鳞、鱼皮、鱼刺和内脏，采肉后清洗、沥干，在匀浆机中打成肉糜，，于-18℃冰箱中冷冻保存，分析时取出解冻后使用。 4、 试样水解 称取含蛋白7.5-25mg的试样，加入水解管中，加入15mL 6mol/L盐酸，继续向水解管内加入苯酚3滴~4滴。冷冻 3min~5min，接到真空泵的抽气管上，抽真空(接近OPa)，然后充入氮气，重复抽真空-充入氮气3次后，在充氮气状态下拧紧螺盖。 将水解管放入干浴水解浓缩仪中，110°℃水解 22-24h，冷却、混匀、开管、转移并定容到50ml容量瓶中，用移液管取适量样液，在干浴水解浓缩仪中50°℃吹干，必要时加入少许水，重复吹干1-2次，加入3-5mL PH2.2的稀释上机用柠檬酸钠缓冲液溶解，振荡混匀后，吸取溶液通过 0.22 um 滤膜后，转移至仪器进样瓶，为样品测定液，供仪器测定用。 二、分析方法描述 (Biochrom 30+) 氨基酸分析仪分析方法参数： 1)色谱谱： Biochrom Na 型阳离子交换树脂柱，4.6x20cm 2)分离程序： NO. Time Temp Buffer FPump Nin Rec Comman ds 1 01：00 48 1 35.0ml/ ON OFF h 2 00：00 48 1 35.0ml/ ON OFF Reset h 3 01：00 48 1 35.0ml/ ON OFF Load h 4 06：40 48 1 35.0ml/ ON ON h 5 13：00 52 2 35.0ml/ ON ON h 6 01：00 52 5 35.0ml/ ON ON h 7 16：00 95 5 35.0ml/ ON ON h 8 04：00 95 6 35.0ml/ ON ON h 9 04：00 95 1 35.0ml/ ON ON h 10 09：00 48 1 43.0ml/ OFF OFF h 11 02：00 48 1 35.0ml/ ON OFF h End 3)运行时间：经分析时间+再生时间57min 4)反应单元温度：135°C。 5)检测波长：570nm、440nm同时检测。 三、样品中氨基酸含量的计算 样品测定液氨基酸的含量按式(2)计算： 式中 ci———样品测定液氨基酸i的含量，单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL)； Ai一――试样测定液氨基酸i的峰面积； As一——氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积； CS -氨基酸标准工作液氨基酸 s 的含量，单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL)。 试样中各氨基酸的含量按式(3)计算： 式中： Xi -试样中氨基酸i的含量，单位为克每百克(g/100g)； ci ―――试样测定液中氨基酸i的含量，单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL)； H——-—稀释倍数； V ———试样水解液转移定容的体积，单位为毫升(mL)； M -———氨基酸i的摩尔质量，单位为克每摩尔(g/mol)； m ――—称样量，单位为克(g)； 10°———将试样含量由纳克(ng)折算成克(g)的系数； 100 -换算系数。 附、红鳕鱼分析图谱及做样结果 pk # Name Retention Time Area8 ESTD concentration(mg/100g) 5 Asp 7.733 4011179 1766.2 7 Thr 9.499 2014750 777.2 8 Ser 10.333 2127398 698.3 9 Glu 12.399 5492183 2533.2 10 Gly 19.065 4600523 1058.7 11 Ala 20.432 3642670 1113.8 13 Val 22.665 2220412 871.1 14 Met 24.498 1106118 479.9 15 Ile 25.998 1746255 794.5 16 Leu 26.998 3262177 1351.9 19 Tyr 29.998 946131 590.2 20 Phe 30.998 1327675 679.7 22 His 36.231 981666 423.7 23 Lys 38.098 3957099 1633.2 26 Arg 46.030 2103284 1094.7 Totals 39539520 15866.2 440nm Results Pk # Name Retention Time Area ESTD concentration(mg/100g) 3 Pro 14.132 757699 692.0 Totals 757699 692.0 选择大昌华嘉，就是选择仪器应用专家Think Asia.Think DKSH.www.dksh-instrument.cn 电话： 邮箱： ins.cn@dksh.com 以红鱱鱼为原料，使用Biochrom30+全自动氨基酸自动分析仪对其肌肉的氨基酸组成进行分析。结果表明红鱱鱼肌肉中氨基酸总量的质量百分比为16558.3mg/100g，必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸总量的39.78%，鲜味氨基酸占氨基酸总量的39.09%。