药材及饮片中30种农药残留检测方案(液质联用仪)

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thermoscientific 前处理流程： 热线8008105118电话4006505118www.thermofisher.com仅用于研究目的。不可用于诊断目的。◎ 2020 Thermo Fisher Scientific Inc.保留所有权利。所有商标均为 Thermo Fisher Scientific Inc. 及其子公司的资产，除非另有指明。 全新一代三重四极杆质谱TSQ Fortis结合变色龙软件同时检测药材及饮片中30种农药残留 孙银、刘钊、高鹏、陈冰、王立杰赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词 TSQ Fortis、药材及饮片、农残 摘要 本文在变色龙软件的控制下建立了针对药材及饮片中30种农药的超高效液相色谱串联三重四极杆质谱TSQ Fortis的分析方法。所用色谱条件：色谱柱为Accucore aQ (100×2.1mm， 2.6um)， 流动相A为0.1%甲酸(含5mmol/L甲酸铵)水溶液，B为乙腈-0.1%甲酸水溶液(含5mmol/L甲酸铵)(95：5)，流速0.3mL/min， 柱温40℃。使用ESI源，扫描方式为选择反应监测(SRM)。结果表明：采用QuEChERS法对人参、甘草、金银花等10种中药基质样品进行前理，TSQ Fortis进行测定，以金银花基质为例，30种农药限值均能满足药典中“0212药材和饮片检定通则”中定量限的要求；在0.1~100ng/mL浓度范围内，所有化合物线性关系良好； 5ng/mL浓度水平下连续6针进样，30种农药RSD均小于10%。因此，该方法可用于基质样品的检测分析。 1.引言 我国是中药资源最丰富的国家，随着我国医药的不断发展，药材及饮片使用量不断增多，中药材产业的发展日益受到人们的重视。然而，为了追求经济效益的最大化，在中药种植和保存过程中滥用农药的行为屡见不鲜，这将不利于中药行业的长期稳定发展。近年来，国家药典委员会颁布了一系列检测法规以提高中药材质量。最近《中国药典》2020版也已发行，预计将于12月30日正式实施。这对于保障公众用药的安全性和有效性，推进医药产业升级以及提高药材质量具有重要意义。 2020版《中国药典》四部通则修订了“0212药材和饮片检定通则”以及“2341 农药残留测定法””。其中“0212药材和饮片检定通则”中明确规定禁用农药种类及限量标准，并在“2341农药留留测定法”中第五法给出禁用农药的具体检测方法，标准中规定使用LC-MS/MS方法检测的化合物有30种。 LC-MS/MS方法因其检测灵敏度高、选择性好、分析速度快等优点，从而成为农药残留分析检测的重要方法。本文基于新版药典通则，建立了超高效液相色谱串联三重四极杆质谱TSQ Fortis分析药材及饮片中30种农残的方法，在多种中药基质中均取得了良好的灵敏度、重现性和线性，因此方法符合新版药典标准要求，，可用于药材及饮片中农残的准确定量分析。 2.实验部分 2.1仪器与试剂： Thermo ScientificTM Vanquish超高效液相色谱仪； ThermoScientificTM TSQ Fortis三重四极杆质谱配置变色龙软件；乙乙(LCMS级， 美国Thermo Fisher公司)、甲醇(LCMS级， 美国Thermo Fisher公司)；实验用水为去离子水；甲酸(LCMS级， Fisher A117-50)；甲酸铵(LCMS级， SIGMA)。30种农药化合物清单如下表。 表130个化合物列表 2.2色谱条件 色谱柱：：Thermo Scientific Accucore aQ (100×2.1 mm， 2.6 pm)； 柱温40℃；进样量2pL；流动相A：0.1%甲酸， 5 mmol/L甲酸铵水溶液，B：乙腈-0.1%甲酸水溶液(含5 mmol/L甲酸铵))(95：5)；梯度洗脱程序见表2。 表2梯度洗脱程序 Time (min) Flow (mL/min) A(%) B(%) 0 0.3 70 30 1 0.3 70 30 12 0.3 0 100 14 0.3 0 100 14.1 0.3 70 30 16 0.3 70 30 2.3质谱条件 表3离子源参数 lon Source Type ESI(+) Positive lon (v) 4000 Sheath Gas (Arb) 35 Aux Gas (Arb) 10 Sweep Gas (Arb) 0 on Transfer Tube Temp(℃) 350 Vaporize Temp (℃) 350 Q1 Resolution (FWHM) 0.7 Q3 Resolution (FWHM) 1.2 表430个化合物SRM参数 化合物名称 分子量 母离子 子离子 碰撞能 Tube Lens Source Fragmentation 411 196.071* 15.07 74 0 胺苯磺隆 410.41 411 168 27.16 74 0 243.014 130.958* 20 80 3.2 灭线磷 242.33 243.014 214.97 10.81 80 3.2 304.113 217* 23.04 102 1 苯线磷 303.36 304.113 201.929 35.48 102 1 247 108.929* 17.72 62 3.2 地虫硫磷 246.33 247 137.071 10.39 62 3.2 314 162.071* 15.61 71 9.7 氯唑磷 313.7 314 120 25.81 71 9.7 水胺硫磷 289.29 307.09 307.09 188.887* 230.958 10.86 15.32 75 75 0 0 141.962 94.014* 14.3 79 0 甲胺磷 141.13 141.962 124.96 14.3 79 0 223.16 224.068 127* 16.17 84 1 久效磷 224.068 193 10.25 84 1 260.38 261 75.125* 10.18 55 0 甲拌磷 261 199 7.23 55 0 255.29 256.095 140.039* 27 80 5 硫环磷 256.095 61.343 26 80 5 磷胺 299.69 300.038 174.125* 12.5 80 6.5 300.038 226.958 12.83 80 6.5 治螟磷 333.32 323.03 171.071* 14.5 98 1 323.03 114.889 29.31 98 1 320.43 321.065 115.074* 28 97 1 特丁硫磷砜 321.065 143.045 22 97 1 288.36 305.071 187* 10.23 97 0 特丁硫磷亚砜 305.071 96.946 39.34 97 0 *为定量离子 2.4样品前处理 参考“2341通则《第五法药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定》”快速样品处理法(QuEChERS)对10种中药基质进行处理，耗材清单见表5。 10种基质如下： 表5 QuEChERS 法所用耗材 方法类别 规格 货号 无水硫酸镁6g，无水乙酸钠1.5g， 50/包 60105-335-B 无水硫酸镁900 mg、N-丙基乙二胺 300 mg、十八烷基硅快速样品处理法(QuEChERS 法)烷键合硅胶300 mg、硅胶 300 mg、石墨化碳黑90 mg， 15 60105-509-BmL，50/包 色谱柱 Accucore aQ C18 (100×2.1 mm， 2.6 um) 17326-102130 图1 QuEChERS法前处理流程图 3.结果与讨论 3.1样品的色谱图 4.0e4- 图25ng/mL浓度下金银花基质中30个化合物的提取离子流图 3.2仪器灵敏度、线性和精密度 以金银花基质为例，采用2.4样品前处理方式制备空白基质，将高浓度混标逐级稀释，配制成浓度为0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、100ng/mL的基质标准溶液，使用Fortis进行分析检测，考察仪器灵敏度和线性范围。另配制浓度为5ng/mL的基质加标样品，连续进样6次，考察精密度。 表630个化合物LOQ、线性以及重现性 结果表明，所有化合物的LOQ在0.1~1ng/mL之间，具有良好的灵敏度，限量值与国标限值相比较，所有化合物定量限均低 于药典中“0212药材和饮片检定通则”规定的定量限；所有化合物在0.1~100ng/mL浓度范围内，线性关系良好；5ng/mL连续6针进样，峰面积重现性均小于10%。图3为金银花基质中30个化合物的线性关系。 图3金银花基质中30个化合物的线性关系(1-100ng/mL) 3.3回收率实验 选用人参、党参、泽泻、甘草、半夏、金银花、菊花、五味子、车前子、陈皮10种中药基质为代表，按照2.4样品前处理方式进行处理，加标浓度分别为5 pg/kg和10 pg/kg， 每个浓度水平平行处理3份样品，考察前处理方法的稳定性。结果表明，每种基质的回收率结果符合2341通则方法学指标，前处理精密度良好，可用于中药基质的实际测定。 图3金银花基质加标回收率结果 图4陈皮基质加标回收率结果 4.结论 本文建立了TSQ Fortis检测药材和饮片中30种农残的方法，结果表明，所有化合物灵敏度均能满足要求，所得定量限均在0.1~1ng/mL之间，远优于药典中“0212药材和饮片检定通则”规定各化合物的定量限；按照“2341农药残留测定法”采用QuEChERS 法对人参、甘草、金银花等10种中药基质样品进行前处理，加标回收率以及方法重现性均能满足方法学指标，表明该方法可用于中药材及饮片中农药残留的分析检测。 我国是中药资源最丰富的国家，随着我国医药的不断发展， 药材及饮片使用量不断增多，中药材产业的发展日益受到人 们的重视。然而，为了追求经济效益的最da化，在中药种植 和保存过程中滥用农药的行为屡见不鲜，这将不利于中药行 业的长期稳定发展。近年来，国家药典委员会颁布了一系列 检测法规以提高中药材质量。最近《中国药典》2020 版也 已发行，预计将于12月30日正式实施。这对于保障公众用 药的安全性和有效性，推进医药产业升级以及提高药材质量 具有重要意义。2020版《中国药典》四部通则修订了“0212药材和饮片检 定通则”以及“2341 农药残留测定法”。其中“0212药材 和饮片检定通则”中明确规定禁用农药种类及限量标准，并 在“2341农药残留测定法”中第五法给出禁用农药的具体检 测方法，标准中规定使用LC-MS/MS方法检测的化合物有30 种。 LC-MS/MS方法因其检测灵敏度高、选择性好、分析速度快 等优点，从而成为农药残留分析检测的重要方法。本文基于 新版药典通则，建立了超高效液相色谱串联三重四极杆质谱 TSQ Fortis分析药材及饮片中30种农残的方法，在多种中药 基质中均取得了良好的灵敏度、重现性和线性，因此方法符 合新版药典标准要求，可用于药材及饮片中农残的准确定量 分析。