红曲米中桔青霉素CIT检测方案(液相色谱仪)

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上海通微分析技术有限公司Unimicro (Shanghai) Technologies Co.， Ltd.Application NoteAN2524-ZY010045 通微应用案例-HPLC-FLD助力红曲米中桔青霉素的检测 1、背景介绍 在世界范围内，桔青霉素(Citrinin， CIT) 是最常见的青霉属 (Penicillium)和曲霉属(Aspergillus) 某些菌株产生的一种霉菌毒素，主要污染小麦、裸麦、大麦和燕麦等农作物。CIT含1个羧基，有离子态和非离子态(羧基和相邻的酮基及羟基形成分子内氢键)2种形式(图1)。 CIT 作为一种抗菌素，具有杀死革兰氏阳性细菌的能力，以及抗真菌和抗原虫等功效。但是，同时 CIT 对哺乳动物也具有肾脏毒性。此外，CIT 还经常伴随着肾毒素一赫曲霉毒素一同污染水果、肉类和奶酪等食品。两种或多种霉菌毒素加起来的毒性比任何单一毒素的毒性都大。红曲霉可产生红曲色素(Monascus pigments， Mps) 和抑菌素等多种次级代谢产物，具有降血压、降血糖和降低胆固醇等功效，但部分红曲菌产生的CIT引起了人们对红曲产品安全性的关注。 CIT 会污染红曲色素及红曲产品，如霉、酱、红曲米、功能性红曲、酿酒用曲等。近年来的调查研究发现， CIT 对大鼠经口 LD50为50mg/kg；小鼠为112 mg/kg。有文献报道表明，将 CIT 污染的米喂大鼠，动物生长缓慢，并且出现肾脏功能和形态改变，排尿量增加。通过病理学检查可见肾脏明显增大，呈灰白色，肾脏重量为对照组的一倍半。2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中 CIT在3类致癌物清单中。2019年11月14日，据欧盟官方公报消息，欧盟委员会发布 (EU) 2019/1901号条例，修订以红曲霉发酵的大米基食品补充剂中CIT的最高限量为 100 ug/kg。 Citrinin 图1CIT结构 本实验参照国家标准《GB 5009.222-2016食品安全国家标准食品中桔青霉素的测定》和《QB/T 2847-2007功能性红曲米》，采用免疫亲和柱-高效液相色谱-荧光法(HPLC-FLD)检测了红曲米中 CIT的含量，助力红曲米质量控制。 2、样品制备 参照《GB 5009.222-2016食品安全国家标准食品中桔青霉素的测定》中 CIT 前处理和测试方法。 3、仪器条件 仪器：通微 EasySep@ 3030二元梯度高效液相色谱仪 色谱普：通微 C18柱(4.6×250mm， 5um) 流动相：乙腈：10mmol/L 磷酸水溶液=60：40 流速：0.8 mL/min 检测波长：激发波长330 nm； 发射波长500 nm 柱温：35℃ 进样量：20 pL 41、测试结果 方法检出限：5.0 pg/kg；方法定量限：20.0 pg/kg 线性范围：1.0~20.0 ng/mL 相关系数： 图 2 CIT标准色谱图 5结论 采用 EasySep @ 3030 液相色谱系统，配备荧光检测器，可以实现红曲米中 CIT的检测，满足国家标准要求，方法准确、灵敏度高。 6、配置要求 通微 EasySep@ 3030二元梯度高效液相色谱仪(配自动进样器、柱温箱和荧光检测器) 通微C18柱(4.6×250 mm， 5 um) 通微 Unimicro ChromStation色谱工作站 Lnimicro www.unimicrotech.com.cn TEL： E-mail：info@unimicrotech.comcn 在世界范围内，桔青霉素（Citrinin，CIT）是最常见的青霉属（Penicillium）和曲霉属 （Aspergillus）某些菌株产生的一种霉菌毒素，主要污染小麦、裸麦、大麦和燕麦等农作物。