液体样品中荧光光谱检测方案(分子荧光光谱)

检测样品 包装饮用水

检测项目 理化分析

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荧光分光光度计灵敏度高,能够对液体和固体样品的荧光物质进行定性和定量分析。本文主要介绍液体样品的荧光测量技巧,在样品前处理和测量过程中需要注意的事项。

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HITACHI 日立1nspire the Next 液体样品的荧光测定技巧 1.概要 荧光分光光度计灵敏度高,能够对液体和固体样品的荧光物质进行定性和定量分析。本文主要介绍液体样品的荧光测量技巧。 2.测量技巧 2.1注意样品的浓度 对于一般的液体样品,直接使用10mm 的常规石英比色皿测定即可。但若样品的浓度太高,则会出现内滤效应,即样品会对激发光或发射光产生吸收,导致获得的荧光强度偏低。 图1低浓度样品的测定 图2高浓度样品的测定 如图所示,低浓度的样品所有位置均会产生荧光,检测器可以接收到所有荧光信号。高浓度的样品在液体表面产生荧光,检测器无法接收到全部荧光,会出现标准曲线线性偏移。 图3罗丹明B的线性关系(普通测光方式) 因此,测定高浓度样品时,由于高浓度样品的吸光度高,激发光无法到达液体内部。为获得线性标准曲线,一方面激发波长处的吸光度最好低于0.02,另一方面选用表面测光方式可以准确获得荧光光谱,常用的表面测光附件有固体样品支架、三三角样品池。 图3固体样品支架 图4三角样品池 图5罗丹明B的线性关系(表面测光方式与普通测光方式对比) 表面测光方式中也要注意样品自吸收的影响,浓度过高的样品,还会发生荧光峰向长波长方向的移动。 1.07 图6样品的吸收光谱 图7不同浓度样品的荧光光谱 2.2注意样品的PH值 不同样品在不同 PH 值下测得的荧光强度不同,尤其是含羟基和氨基的荧光性分子,酸解离常数对光谱数据和荧光强度会产生较大的影响。 图8荧光素荧光强度随 PH值的变化 中性 碱性 图9不同PH值下的样品 2.3注意样品中的溶解氧 溶解氧对一些的样品具有荧光消光效应,其消光程度取决于荧光分子量。而且它会影响荧光强度及量子产率。通过使用带盖样品瓶,在数分钟内吹入氮气,可去除溶解氧。 图10脱气和未脱气甲苯中 Ir(ppy)3 的荧光强度对比 2.4注意样品的温度 考虑温度的影响,有的样品受温度影响较大,一般随温度升高荧光强度会减小。因此测定受温度影响较大的样品时,应在恒温条件下测试。 图11普通药品的荧光强度随温度的变化 1500 图12荧光光谱随温度的变化 2.5注意激发光的影响 若样品对激发光的照射敏感,则需要使用高灵敏度、高扫描速度的仪器,按照以下方式设置合适的条件,实现稳定测量。一是扫描速度设置为快速。在可接受的噪音范围内,尽量提高扫描速度。此外,通过 CAT(Computing for Averaging Transient) 可有效获得平均光谱。二是缩小激发侧狭缝,,当样品荧光强度足够时,可缩小激发侧狭缝。当灵敏度低时,可增加发射侧狭缝,以提高感光度。 图13荧光色素的荧光光谱(一般测定,扫描速度设为 300nm/min) 图14荧光色素的荧光光谱(高速测定,扫描速度设为3000nm/min) 2.6注意污染的控制 在测定液体样品的过程中,对于污染的控制,,一是溶剂的选用,用于定量分析的试剂,其纯度十分关键。有些情况下,特级试剂中的杂质可能会产生荧光,有些杂质还可能会和试剂发生反应。目前市场上有荧光专用的分析试剂。 图15荧光分析专用试剂 测定低浓度物质时,还需注意纯水的浓度,超纯水比纯水的背景吸收更小。此外,在使用自来水清洗器具后,使用纯水或超纯水再清洗一遍效果更佳。 图16不同纯水的荧光强度 二是注意容器类别的选择,推荐使用玻璃器具,若测定微量物质时,应该使用专用器具。塑料器具不适合微量物质的检测。 图17塑料器具和玻璃器具 三是注意容器材质产生的污染,在测定有机溶剂时,若使用塑料容器,容器中的增塑剂析出会造成污染,引起背景信号上升。 图183二氯甲烷的测定(左为玻璃容器,右为塑料容器) 2.7注意样品池的选择 一是样品池的安装,保持样品池的摆放方向一致。样品池不同面的透过率不一样,由此造成荧光强度不同。使用不同的样品池,在不同的方向测定纯水,结果如图19所示。 图19样品池各面的荧光强度 二是样品池的类型,对于挥发性溶剂的测定,建议使用带盖样品池,防止溶剂挥发,使测量更稳定。 三是样品池的材质,玻璃样品池在紫外区会发出荧光。因此,不适合紫外区样品测定,应使用合成石英材质的样品池。 四是样品池的清洗,清洗过程请勿破坏光学表面,应将样品池浸至专用清洗剂中清洗。 图20样品池清洗示例 3.总结 在进行液体样品的荧光测定时,对于样品前处理和测定过程需要注意以下几点: 1)测定高浓度样品时,注意内滤效应和自吸收的影响。 2)对于荧光特性受 pH 值影响的样品,应选择合适的 pH 值进行测定。 3)溶解氧会消除样品荧光时,应对样品进行脱气处理并置于带盖样品池中测定。 4)对于具有温度特性的样品,应控制在恒温条件下测定。 5)对于易分解的样品,应选择合适的扫描速度和狭缝宽度。 6)注意溶剂、纯水的纯度、容器的污染。 7)注意样品池的摆放方向,选择满足测量目的的样品池。 荧光分光光度计灵敏度高,能够对液体和固体样品的荧光物质进行定性和定量分析。本文主要介绍液体样品的荧光测量技巧,在样品前处理和测量过程中需要注意的事项。

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日立科学仪器(北京)有限公司为您提供《液体样品中荧光光谱检测方案(分子荧光光谱)》,该方案主要用于包装饮用水中理化分析检测,参考标准《暂无》,《液体样品中荧光光谱检测方案(分子荧光光谱)》用到的仪器有日立F-7100荧光分光光度计、日立F-4700荧光分光光度计。

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