心可宁胶囊中酸性红73染色的定性分析检测方案(液相色谱仪)

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SSL-CA20-416Excellence in Science Excellence in ScienceLC-239 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn 心可宁胶囊中酸性红73染色的定性检测 LC-239 摘要：本文采用岛津 Nexera LC-40 高效液相色谱仪建立了心可宁胶囊中酸性红73染色的定性方法，心可宁胶囊经70%甲醇超声提取，采用 PDA检测器在509 nm 波长下检测酸性红73紫外吸收峰，样品中未检出目标物酸性红73，心可宁胶囊加标样品在 RT=26.99 min 处检测到酸性红73，理论塔板数为14758，与酸性红73在200-600 nm 光谱图比较，相似度为99.95%，可判定为酸性红73。该方确准确可靠，可为相关企业检测心可宁胶囊中酸性红73提供帮助。 关键词：高效液相色谱法 酸性红 73心可宁胶囊 心可宁胶囊由丹参、三七、红花等中药材制成，具有活血散瘀、开窍止痛的作用，主要用于治疗心绞痛、冠心病等病症。据报道，近年来红花药材存在用酸性红73染色的现象。酸性红73，是一种合成染料，主要用于羊毛、纸张、皮革以及塑料制品的染色，如果直接摄入人体会危害身体健康。 国家药监局此前发布了《心可宁胶囊中酸性红73 检查项补充验方法(BJY201901)》规定了酸性红73染色的定性测定方法。要求采用液相色谱法，以保留时间、PDA光谱图信息对酸性红73进行定性识别。 本实验使用岛津 Nexera LC-40 高效液相色谱仪，参考补充检验方法中的要求对心可宁胶囊中的酸性红73进行定性测定，该方法准确可靠，， 可为相关企业检测心可宁胶囊中酸性红73提供帮助 输液泵：LC-40BX3 系统控制器：CBM-40Lite柱温箱：CTO-40S 检测器： SPD-M30A自动进样器： SIL-40C X3 色谱工作站：LabSolutions Ver. 5.97 1.2分析条件 色谱柱： Shim-pack GIST C18 (250 mmx4.6 mm l.D.， 5 um， 岛津(上海)实验器材有限公司，P/N：227-30017-08) 流动相： A：50mm乙酸铵水溶液；B： 乙腈 流速： 1mL/min 柱温：40℃ 检测波长：509nm 进样体积： 10uL 洗脱方式：等度洗脱， A：B=76：24 1.3样品前处理 对照品溶液的制备：取酸性红73对照品适量，加70%甲醇制成成1mL含20ug的溶液，即得。 供试品溶液的制备：取取可宁胶囊内容物4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇20mL， 密塞，称定重量，超声处理20 min， 放冷，称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤后取续滤液，即得。 1.4结果判断 供试品色谱中，在与酸性红73对照品溶液色谱峰保留时间相应的位置上不得出现相同的色谱峰。若出现保留时间相同的色谱峰，采用二极管阵列检测器比较相应色相峰在200 nm-600 nm波长范围内的紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不相同。(源自《心可宁胶囊中酸性红73检查项补充验方法(BJY201901)》，国家药品监督管理局，2019年1月) 结果与讨论 2.1标准品溶液色谱图 按1.2中的分析条件，对酸性红73标准品溶液进行测定，酸性红73的保留时间为 27.67 min， 理论塔板数为14758，系统适用性满足要求，酸性红73对照品、供试品溶液、供试品加标溶液色谱图如图1、2、3所示。供试品中未检出酸性红73，供试品加标样品中可检出酸性红73，因此可判定心可宁胶囊中不含酸性红73，结果符合预期。 图1 酸性红73对照品溶液色谱图图(20ug/mL) 图2 心可宁胶囊供试品溶液色谱图 图3 供试品加标溶液色谱图 2.2光谱相似度判定结果 供试品加标溶液中酸性红73的保留时间为 26.99 min， 与对照品溶液保留时间一致，酸性红73对照品和供试品加标样品对应色谱图的光谱图和相似度对比结果，如图4、5所示，其光谱相似度为 99.95%，光谱相似度高，可判定为酸性红73。 图4 对照品、供试品加标样品光谱图 ID# 显示 对象 对象参数 比例 缩放倍率 Amax 入min 相似度 Ch# 1 时间 26.98520 设置 1.00 511/246/214/346 233/408/287 0.9995 1 2 包 光谱 酸性红73.jcm 设置 1.00 511/211/246/347 232/383/289 Ref 图5 光谱相似度对比 2.3检出限及定量限 对加标浓度为 20 ug/mL 的心可宁胶囊供试品加标溶液进样分析，由信噪比计算酸性红73的检出限及定量限(LOD， S/N=3；LOQ，S/N=10)，结果如表1所示。 表1 酸性红73的检出限和定量限 名称尔 基质 检出限(ug/mL) 定量限(ug/mL) 酸性红73 心可宁胶囊 1.8 6 结论 本文采用岛津 Nexera LC-40 高效液相色谱系统，参考补充检验方法中的要求对心可宁胶囊中的酸性红73进行定性测定。该方法基于色谱保留时间、UV 光谱进行定性，准确度高，可为相关企业检测心可宁胶囊中酸性红73提供帮助。 岛津应用云 本文采用岛津Nexera   LC-40高效液相色谱系统，参考补充检验方法中的要求对心可宁胶囊中的酸性红73进行定性测定。该方法基于色谱保留时间、UV光谱进行定性，准确度高，可为相关企业检测心可宁胶囊中酸性红73提供帮助。