中药紫苏叶中33种农残检测方案

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中药紫苏叶的33种农残测定分析 背景 自2020版中国药典四部 2341农药残留量测定法中新增第五法，药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法，很多中药检测企业反馈含有色素成分较多品种基质效应较为严重，虽然药典规定的固相萃取法三石墨化碳氨基复合柱可以除去色素，但是该方法的平衡和洗脱用到大量的甲苯，不仅有毒，而且还需要浓缩，前处理时间非常的长，另外还有一些平面结构的农药回收率也不太好。纳谱分析根据植物色素成分特点，，调整亲水亲脂聚乙烯吡咯烷酮填料技术参数， 特别推出SelectCore HLB-A 中药农残专用固相萃取柱(200mg/6mL)产品。相比市面上常规 HLB产品， HLB-A可以吸附更多挥发油类成分，并且在除色效果上也较好，从而降低了基质效应。今天，我们来看看紫苏叶项目的前处理效果吧。 紫苏叶 适用范围 本方法参考中国药典2020版2341 第五法中的固相萃取法方式二，适用于含挥发油和色素较多的中药材农残检测。 实验步骤 对照品溶液的制备 1.1混合对照品配制 精密量取禁用农药混合1mL，置20mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用； 1.2气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备 取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1mL含1.0 mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1 mL 含0.1pg 的溶液。 1.3空白基质溶液的制备 取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。 1.4基质混合对照溶液的制备 分别精密量取空白基质溶液 1.0 mL(6份)，置氮吹仪上，40℃水浴浓缩至约0.6mL， 分别加入混合对照品溶液10 pL、20pL、50pL、100pL、150pL、200uL，加乙腈稀释至1mL，涡旋混匀，即得。 2供试品溶液的制备 2.1提取 称取5g紫苏叶样品，加氯化钠1g，加入50mL乙腈，匀浆处理2分钟，离心后分取上清液，残渣再加50 mL乙腈，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3~5mL，加乙腈定容至 10 mL，摇匀，待净化。 3 净化 SPE 柱： SelectCore HLB-A 中药农月专用固相萃取柱(200mg/6mL) 净化1：量取直接提取法制备的供试品溶液3mL， 过 SelectCore HLB-A 中药农残专用固相萃取柱，收集全部净化液，混匀，即得。如净化1方式磺隆类成分回收率较低，可以再结合下面的净化2的回收率数据； 净化2：量取直接提取法制备的供试品溶液5 mL， 过 SelectCore HLB 固相萃取柱，收集全部净化液，混匀； GC/MS/MS 测定：取过固相萃取柱后溶液1mL， 加入 0.3 mL内标溶液， 混匀，过 PTFE 膜，上机分析。 LC/MS/MS测定：取过固相萃取柱后溶液1mL，加入0.3mL水，混匀，过 PTFE 膜，上机分析。 4 高效液相色谱-串联质谱法(岛津LC-MS8050) 色谱条件 色谱柱： ChromCore C18-MS Pesticides 中药农残专用柱(2.1×100 mm， 2.6 um)流动相： A： 0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L 甲酸铵) B：乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L甲酸铵)=95：5 流速：0.3mL/min 柱温：40℃ 进样量：1uL 梯度： 时间(min) 流速(mL/min) 流动相A(%) 流动相B(%) 0 0.3 70 30 1 0.3 70 30 12 0.3 0 100 14 0.3 0 100 14.1 0.3 70 30 16 0.3 70 30 质谱条件 离子源：电喷雾离子源 (Electrospray ionization， ESI) 正离子扫描 监测方式：多反应监测 (Multiple Reaction Monitoring， MRM) 离子源接口电压：4.5kV 雾化气：：氮气3.0L/min 加热气： 干燥空气 10.0 L/min DL温度：250℃ 加热模块温度：400℃ 接口温度：300C 干燥气： N2 10 L/min 图1： ChromCore C18-MS Pesticides 分析30种农药标准品(以甲胺磷计 0.025 ug/mL)的典型谱图 图2：紫苏叶空白基质加标的典型谱图(SelectCore HLB-A 净化) 图3：紫苏叶空白基质加标的典型谱图(SelectCore HLB 净化) 从以上紫苏叶基质加标LC/MS/MS 图对比来看，常规 HLB 处理后的加标样品的谱图有很多的基质干扰，而 HLB-A处理后的加标样品的谱图基质干扰去除较好，基质效应影响更小，让分析检测结果更为准确。 5 气相色谱-串联质谱法(岛津 GC-MS 8030) 色谱条件 色谱柱： DB-17MS， 30mx0.25mm， 0.25pm； 进样口温度：250℃； 升温程序：初始温度为60C， 保持1 min；以10℃/min升温至160C；再以2℃/min 升温至230℃，最后以15℃/min 升温至300℃， 保持6min； 载气：高纯氦气(纯度>99.999%)； 进样方式：不分流进样； 恒压模式：146kPa； 进样量：11 pL. 质谱条件 电离方式：电子轰击电离源(EI)； 电离能量：70 Ev： 传输线温度：250℃； 离子源温度：250C； 监测方式：：多反应检测模式(MRM)； 溶剂延迟：：10.0min。 表1紫苏叶中33种农药残留的的测定添加回收结果：(%) 农残成分 回收率 农残成分 回收率 农残成分 回收率 甲胺磷 98.1% 地虫硫磷 98.3% 涕灭威砜 101.0% 甲基对硫磷 98.3% 硫线磷 92.9% 涕灭威亚砜 95.6% 对硫磷 76.5% 蝇毒磷 96.9% 灭线磷 89.7% 久效磷 94.1% 治螟磷 98.9% 氯唑磷 98.8% 磷胺 97.2% 特丁硫磷 89.1% 水胺硫磷 65.5% α-六六六 95.5% 特丁硫磷砜 109.4% α-硫丹 71.6% B-六六六 93.3% 特丁硫磷亚砜 92.6% β-硫丹 88.0% y-六六六 94.5% 甲基硫环磷 95.1% 硫丹硫酸酯 84.6% 8-六六六 95.7% 甲磺隆 96.5% 氟虫腈 104.8% 2，4'-滴滴涕 65.4% 氯磺隆 98.7% 氟虫腈砜 101.6% 4，4'-滴滴滴 80.5% 胺苯磺隆 91.5% 氟虫腈亚砜 101.8% 4，4'-滴滴涕 60.7% 甲拌磷 90.5% 氟甲腈 100.8% 4，4'-滴滴伊 66.9% 甲拌磷砜 86.9% o，p'-三氯杀螨醇 76.4% 杀虫脒 76.2% 甲拌磷亚砜 106.9% p，p'-三氯杀螨醇 71.8% 除草醚 70.2% 甲基异柳磷 98.1% 硫环磷 97.9% 艾氏剂 65.6% 内吸磷-O 92.0% 注：磺隆类、三氯杀螨醇农残用 3mL 供试品溶液净化时，回收率 偏低，可以另取5 mL 供试品溶 液净化，回收率可以满足药典要 求(回收率红色字体代表的是5mL 样品过柱)。 狄氏剂 67.6% 内吸磷-S 91.9% 苯线磷 104.4% 克百威 99.9% 苯线磷砜 92.3% 3-羟基克百威 91.5% 苯线磷亚砜 90.4% 涕灭威 95.7% 6 处理后溶液的颜色比对 紫苏叶提取液过 HLB-A柱 紫苏叶提取液过 HLB柱 由上图可以看出，紫苏叶提取液经过 SelectCore HLB-A 中药农专用柱净化后样品颜色澄清透明，而常规HLB 柱净化后样品颜色较深。 7 紫苏叶过 HLB 与 HLB-A SPE 柱的部分农残基质响应的区别(左边为HLB， 右边为 HLB-A) 涕灭威亚砜 3：207.10>89.00(+) 0003207105132082 45000 70000 40000 一 -5000- 0.2 0.50 0.75 1.00 125 1.50 1.75 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 1.75 甲拌磷砜 4，4-DDT 8实验讨论 通过以上实验数据比对，可以看出， SelectCore HLB-A 中药农残专用固相主取柱，针对紫苏叶大量色素成分和少量的挥发油成分去除效果良好，这样，不仅保护了分析柱和离子源，还极大的消除了由于基质效应带来的涕灭威亚砜、甲甲磷、甲拌磷砜和 DDT 等农残成分的检测灵敏度下降、基质干扰导致的定量不准确等问题。该方法不需要固相萃取柱活化步骤，提取液直接过柱就可以测定，过柱时间花费不到5分钟，不仅操作便捷，对于33种农残成分的峰形均有明显改善。 纳谱分析纳谱分析技术(苏州)有限公司Phone： E-mail： customerservice@nanochrom.com Web： www.nanochrom.com NanoChrom 紫苏叶中33种农药残留的的测定添加回收结果（%）农残成分回收率农残成分回收率农残成分回收率甲胺磷98.1%地虫硫磷98.3%涕灭威砜101.0%甲基对硫磷98.3%硫线磷92.9%涕灭威亚砜95.6%对硫磷76.5%蝇毒磷96.9%灭线磷89.7%久效磷94.1%治螟磷98.9%氯唑磷98.8%磷胺97.2%特丁硫磷89.1%水胺硫磷65.5%α-六六六95.5%特丁硫磷砜109.4%α-硫丹71.6%β-六六六93.3%特丁硫磷亚砜92.6%β-硫丹88.0%γ-六六六94.5%甲基硫环磷95.1%硫丹硫酸酯84.6%δ-六六六95.7%甲磺隆96.5%氟虫腈104.8%2,4'-滴滴涕65.4%氯磺隆98.7%氟虫腈砜101.6%4,4'-滴滴滴80.5%胺苯磺隆91.5%氟虫腈亚砜101.8%4,4'-滴滴涕60.7%甲拌磷90.5%氟甲腈100.8%4,4'-滴滴伊66.9%甲拌磷砜86.9%o,p'-三氯杀螨醇76.4%杀虫脒76.2%甲拌磷亚砜106.9%p,p'-三氯杀螨醇71.8%除草醚70.2%甲基异柳磷98.1%硫环磷97.9%艾氏剂65.6%内吸磷-O92.0%注：磺隆类、三氯杀螨醇农残用3 mL供试品溶液净化时，回收率偏低，可以另取5 mL供试品溶液净化，回收率可以满足药典要求（回收率红色字体代表的是5 mL样品过柱）。狄氏剂67.6%内吸磷-S91.9%苯线磷104.4%克百威99.9%苯线磷砜92.3%3-羟基克百威91.5%苯线磷亚砜90.4%涕灭威95.7%