甲硝唑氯化钠注射液中亚硝酸盐检测方案(离子色谱仪)

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SSL-CA20-684Excellence in Science Excellence in ScienceLC-255 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn 离子色谱法测定甲硝唑氯化钠注射液中的亚硝酸盐 LC-255 摘要：本文参考2020年版《中国药典》方法，对甲硝唑氯化钠注射液中亚硝酸盐含量进行测定。实验结果显示：亚硝酸根线性良好，标准曲线相关系数均≥0.999；对照品溶液连续分析6次，保留时间 RSD范围为 0.19%-0.21%，峰面积 RSD 范围为 0.18%-1.04%；低、中、高浓度加标样品回收率均在87.1~100.1%之间，方法准确可靠、重现性好、灵敏度高，可用于甲硝唑氯化钠注射液中的 NO，含量测定。 关键词：离子色谱甲硝唑氯化钠注射液亚硝酸盐 硝基咪唑类药物的一类降解产物——亚硝酸盐，能使血液中正常携氧低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，使其失去携氧能力而引起组织缺氧，人体吸收过量亚硝酸盐，会影响红细胞的运作，严重会令脑部缺氧，甚至死亡。甲硝唑是常见的一类硝基咪唑类药物，其主要的剂型有甲硝唑片剂、胶囊、泡腾片、栓剂以 及注射液等。其中对于甲硝唑注射液、甲硝唑葡萄糖注射液及甲硝唑氯化钠注射液三种注射剂，现行2020年版《中国药典》检查项下都有对亚硝酸盐测定的要求。本研究参考2020年版《中国药典》甲硝唑氯化钠注射液中亚硝酸盐含量测定的方法，采用岛津离子色谱仪对甲硝唑氯化钠注射主中的 NO， 的含量进行测定。 实验部分 1.1仪器 本实验使用 Essentia IC-16系统，具体配置为： 系统控制器：CBM-20Alite 脱气机： DGU-20A 输液泵：LC-16i 自动进样器： SIL-16i 检测器： CDD-10Avp 抑制器： AS-1000 柱温箱： CTO-20A 色谱工作站： LabSolutions Ver.5.99 1.2分析条件 色谱柱： ShodexIC SI-36 4D (150mm×4.0 mm l.D.， 3.5 um) 流动相：5mM氢氧化钾 柱温：30C 抑制电流：9mA 流速： 0.7 mL/min 进样量：2uL 洗脱方式：等度洗脱，采集时集35 min 1.3供试品溶液 取甲硝唑氯化钠注射液(规格为100mL：甲硝唑0.5g与氯化钠 0.8g)，即得。 1.4标准曲线制备 对照品溶液的制备：取亚硝酸根对照品适量，用超纯水稀释成1、2、5、10、20、40和60 ug/mL系列浓度的标准曲线溶液。 系统适用性溶液的制备：取亚硝酸根对照品适量，加0.9%氯化钠溶液稀释成每1mL中含亚硝酸根40 ug的溶液。 结果与讨论 2.1标准谱图 对照品溶液和系统适用性溶液的色谱图如图1、图2所示。2020版《中国药典》甲硝唑氯化钠注射液中亚硝酸盐含量测定的推荐进样体积为25ul，本系统条件下进样体积仅为2ul，小进样量也能获得高灵敏度；系统适用性溶液中亚硝酸根与氯离子之间的分离度为7.4，符合要求。 图1亚亚酸酸对照品溶液(浓度1ug/mL)色谱图 图2系统适用性溶液色谱图 2.2线性实验 将对照品溶液按照1.2分析条件进行测定，，1以亚硝酸根的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性回归分析，如图3、图4所示， 在1-60 ug/mL范围内，线性良好，线性相关系数均>0.999，准确度在97.2%~105.4%之间。 图3亚硝酸根系列浓度叠加图 图4 亚硝酸根标准曲线 2.3重复性考察 按照1.2分析条件，分别取1 ug/mL、5 ug/mL、40 ug/mL对照品溶液上机测试，并计算各化合物保留时间和峰面积的相对标准偏差 (RSD)，以评价系统的检测结果的重复性。表1结果显示，目标物保留时间和峰面积的RSD 分别在0.19%-0.21%和0.18%-1.04%之间，系统精密度良好。 表1亚硝酸根对照品溶液的保留时间和峰面积重复性E(n=6) 名称 Conc.(ug/mL) RSD% (R.T.) RSD% (Area) NO2 1 0.21 1.04 5 0.19 0.31 40 0.20 0.18 2.4实际样品分析 取某甲硝唑氯化钠注射液进行检测，其中甲硝唑氯化钠注射液中亚硝酸根含量见表2。色谱图见图5. 表2甲硝唑氯化钠注射液中亚硝酸根离子测定结果 化合物 检出浓度 (ug/mL) 样品含量(mg/100mL) 限度(mg/100mL) 图5甲硝唑氯化钠注射液中亚硝酸根离子的色谱图 2.5回收率实验 在供试品溶液中加入低、、中、高浓度标品，加标回收结果见表3。三个不同浓度加标回收率在 87.1~100.1%之间，方法准确可靠。 表3样品加标回收率 化合物名称 低水平 中水平 高水平 加标浓度 加标回收率 加标浓度 加标回收率 加标浓度 加标回收率 (ug/mL) % (ug/mL) % (ug/mL) % NO， 1 96.9 5 87.1 40 100.1 结论 本实验中使用岛津离子色谱仪(IC-16)，搭载阴离子电化学自再生膜抑制器，建立了一种对甲硝唑氯化钠注射液中的 NO，含量测定的方法。该方法进样量小、灵敏度高、校准曲线线性、仪器保留时间及峰面积的重现性良好，可以为定性、定量分析甲硝唑注射液、甲硝唑葡萄糖注射液及甲硝唑氯化钠注射液三种注射剂中的NO，提供准确、有效的检测依据。 岛津应用云 本实验中使用岛津离子色谱仪（IC-16），搭载阴离子电化学自再生膜抑制器，建立了一种对甲硝唑氯化钠注射液中的NO2-含量测定的方法。该方法进样量小、灵敏度高、校准曲线线性、仪器保留时间及峰面积的重现性良好，可以为定性、定量分析甲硝唑注射液、甲硝唑葡萄糖注射液及甲硝唑氯化钠注射液三种注射剂中的NO2-提供准确、有效的检测依据。