猪肉中金刚烷胺和金刚乙胺检测方案(样品前处理)

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兽残篇www.biocomma.cn固相萃取产品应用手册(6版) indd 682021/1/2715：04：59 动物源性食品中金刚烷胺和金刚乙胺残留量的 UPLC-MS/MS分析(Copure@ MCX) 《SN/T 4253-2015出口动物组织中抗病毒类药物残留量的测定液相色谱-质谱质谱法》 一、样品提取 称取2.0g样品于50mL离心管中，加入浓度为1 ug/mL金刚烷胺-D6标准工作液20， 加入5mL 2%三氯乙酸水溶液，超声10 min， 5000 r/min 离心5 min，上清液全部转移至15mL离心管中，再向样品中加入5mL 2%三氯乙酸水溶液按上述步骤重复提取一次，合并两次提取液，用乙用定容至10 mL待净化。 二、SPE净化 (Copure° MCX， 60 mg/3mL) 活化：向MCX柱中依次加入3mL甲醇， 3mL水和3mL 2%甲酸水溶液进行活化。 上样和洗脱：准确移取待净化液5mL过柱，依次用5mL 2%甲酸水溶液，1%甲酸乙腈淋洗，弃去全部流出液，抽干小柱，用4mL 5%氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，45℃氮吹至干。重新溶解：准确加入1mL复溶液(乙夜-甲醇-水=70：20：10) 涡旋溶解，过0.22 Hm尼龙滤膜供上机分析。 三、标曲配制 采用内标法定量，分别精密量取一定量的金刚烷胺和金刚乙胺混合标准液及内标溶液，用金刚烷胺复溶液(乙腈-甲醇-水=70：20：10)定容至1mL，配制成适当浓度的标准工作溶液。 仪器条件/色谱条件 仪器： UPLC-MS/MS (Thermo Fisher TQS Endura) 色谱柱： CS215018P (PFP， 2.1 mm×50 mm， 1.8 Hm) 流动相：A：水(0.1%甲酸) B：甲醇(0.1%甲酸) 洗脱方式：梯度洗脱，见表1 表1梯度洗脱程序 时间/min A/% B/% 0 95 5 1.0 70 30 3.0 10 90 4.0 10 90 4.1 95 5 5.0 95 5 流速：0.4 mL/min 柱温：35℃ 进样量：5 质谱条件 离子源： HESI 电喷雾电压：3500V 鞘气压力：40 arb 辅气压力：2arb 离子传输管：380℃ 辅气温度：420℃ 表2组分名称、保留时间及特征离子一览表(*为定量离子) 名称 保留时间/min 母离子 子离子 金刚烷胺 2.28 152.038 93.09，135.08* 金刚烷胺-D6 2.28 158.0 141.1* 金刚乙胺 3.10 180.1 163.075，107.154* 五、实验结果 表3动物源性食品中金刚烷胺和金刚乙胺加标回收实验结果 目标物 基质 (g/kg) 1 2 3 收率(%) RSD (%) 金刚烷胺 鸡肉 10 87.63 91.48 88.59 89.2 2.2 20 89.42 87.57 97.48 91.5 5.8 鸡蛋 10 81.22 89.05 87.27 85.1 4.8 20 91.36 93.97 93.81 92.7 1.6 金刚乙胺 鸡肉 10 89.59 82.73 88.38 86.9 4.2 20 87.68 72.12 83.34 84.4 9.9 鸡蛋 10 84.31 83.86 87.73 84.1 2.5 图1 5pg/L金刚烷胺标准品SRM色谱图 订购信息 货号 描述 包装 COMCX360 Copure@ MCX 固相萃取柱， 60 mg/3mL 50支/盒 CS215018P CommaSil@ PFP， 2.1 mm×50 mm， 1.8 Hm 1根/盒 BC-1000 biocomma@ 多管涡旋混匀仪 1台/箱 SF130-22-NL 尼龙/中13mm/0.22 um/有机系 100个/盒 MF047-22-MCE MCE/中47 mm/0.45 pm/水系 200片/盒 MF047-22-NL NL滤膜， 直径47mm， 孔径0.22Hm， 有机系 200片/盒 SC2-1 2 mL蓝色聚丙烯盖，9-425 100个/盒 V2-AL 2 mL螺纹棕色样品瓶，带书写处11.6*32 mm， 9-425 100个/盒 一、样品提取 称取 2.0 g 样品于 50 mL 离心管中，加入浓度为 1 μg/mL 金 刚烷胺 -D6 标准工作液 20 µL，加入 5 mL 2% 三氯乙酸水溶液， 超声 10 min，5000 r/min 离心 5 min，上清液全部转移至 15  mL 离心管中，再向样品中加入 5 mL 2% 三氯乙酸水溶液按上 述步骤重复提取一次，合并两次提取液，用乙腈定容至 10 mL 待净化。 二、SPE 净化（Copure® MCX, 60 mg/3 mL） 活化：向 MCX 柱中依次加入 3 mL 甲醇，3 mL 水和 3 mL 2% 甲 酸水溶液进行活化。 上样和洗脱：准确移取待净化液 5 mL 过柱，依次用 5 mL 2% 甲酸水溶液，1% 甲酸乙腈淋洗，弃去全部流出液，抽干小柱， 用 4 mL 5% 氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，45℃氮吹至干。 重新溶解：准确加入 1 mL 复溶液（乙腈 - 甲醇 - 水 =70:20:10） 涡旋溶解，过 0.22 µm 尼龙滤膜供上机分析。 三、标曲配制 采用内标法定量，分别精密量取一定量的金刚烷胺和金刚乙胺 混合标准液及内标溶液，用金刚烷胺复溶液（乙腈 - 甲醇 - 水 =70:20:10）定容至 1 mL，配制成适当浓度的标准工作溶液。 仪器条件 / 色谱条件 仪器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TQS Endura） 色谱柱：CS215018P（PFP，2.1 mm×50 mm，1.8 µm） 流动相：A：水（0.1% 甲酸）   B：甲醇（0.1% 甲酸） 洗脱方式：梯度洗脱，见表 1 表 1 梯度洗脱程序