动物源性食品中利巴韦林检测方案(样品前处理)

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兽残篇 动物源性食品中利巴韦林残留量的 UPLC-MS/MS 分析 (Copure@PBA，) 《SN/T 4519-2016出口动物源性食品中韦巴韦林残留量的测定液相色谱-质谱质谱法》 一、样品提取 称取5.0 g样品于50mL离心管中，加入浓度为1ug/mL同位素内标利巴韦林-13C5溶液10 夜， 加入 12 mL 20 g/L三氯乙酸水溶液和2.5mL乙腈，涡旋混匀30s， 超声10 min，于8000 r/min 离心5 min， 上清液全部转移至50mL离心管中，再向样品中加入10 mL 20 g/L三氯乙酸水溶液重复提取一次，合并两次提取液，用三氯乙酸水溶液定容至25 mL， 再准确移取5 mL， 用氨水调节pH至8.5(±0.1)待净化(本实验是采用阴性样本做基质加标实验，故省略酶解步骤)。 二、SPE 净化 (Copure PBA， 100 mg/3 mL) 活化：向PBA柱中依次加入3mL乙腈，3 mL 0.25 mol/L 乙酸铵缓冲液(pH=8.5) 进行活化。 上样和洗脱：取上述待净化液过柱，控制流速不超过1滴/秒，然后用3 mL 0.25 mol/L乙酸铵缓冲液(pH=8.5)淋洗小柱，弃去全部流出液，抽干小柱，用2 mL 0.1 mol/L甲酸水溶液洗脱，抽干小柱，收集全部洗脱液。 上机：取上述洗脱液过0.22 Hm PES水系滤膜，供上机分析。 三、标曲配制 采用内标法定量，分别精密量取适量的利巴韦林标准溶液和同位素内标利巴韦林-13C5工作液，用0.1 mol/L 甲酸水溶液配制成适当浓度的标准工作溶液。 四、仪器条件 色谱条件 仪器： UPLC-MS/MS (Thermo Fisher TQS Endura) 色谱柱： CS211003H(HILIC， 2.1 mm×100 mm， 3 Hm) 流动相： A： 5 mmol/L乙酸铵溶液(含0.1%甲酸) B：乙腈 洗脱方式：梯度洗脱，见表1 表1梯度洗脱程序 时间/min A/% B/% 0 5 95 2.0 5 95 3.0 20 80 3.5 30 70 4.5 5 95 5.0 5 95 流速：0.4 mL/min 柱温：30℃ 进样量：2 质谱条件 离子源： HESI 电喷雾电压：3500V 鞘气压力：40 arb 辅气压力：1 arb 离子传输管：300℃ 辅气温度：400℃ 表2组分名称、保留时间及特征离子一览表(*为定量离子) 名称 保留时间/min 母离子 子离子 利巴韦林 1.91 245.012 96.086，13.083* 利巴韦林-13C5 1.90 250.05 96.083，113.071* 五、实验结果 表3添加水平为2.0 ug/kg动物源性食品中利巴韦林加标回收实验结果 目标物 基质 回收率(%) 平均回收 RSD 1 2 3 4 率(%) (%) 鸡肉 106.3 103.2 107.2 107.6 106.1 2.0 利巴韦林 鸡蛋 80.6 88.6 98.0 84.9 88.0 7.4 图11pg/L利巴韦林标准品 SRM色谱图 图21g/L利巴韦林-13C5内标溶液 SRM色谱图 订购信息 货号 描述 包装 COPBA3100 Copure@ PBA 固相萃取柱， 100 mg/3 mL 50支/盒 CS211003H CommaSil@ HILIC， 2.1 mm×100 mm， 3 Pm 1根/盒 SF130-22-PES PES 针式过滤器，直径13mm，孔径0.22Hm，水系 100个/盒 MF047-22-MCE MCE/中47 mm/0.45 pm/水系 200片/盒 MF047-22-NL NL滤膜， 直径47 mm， 孔径0.22Hm， 有机系 200片/盒 SC2-1 2mL蓝色聚丙烯盖，9-425 100个/盒 V2-AL 2mL螺纹棕色样品瓶，带书写处11.6*32 mm，9-425100个/盒 一、样品提取 称取 5.0 g 样品于 50 mL 离心管中，加入浓度为 1 μg/mL 同 位素内标利巴韦林 -13C5 溶液 10 µL，加入 12 mL 20 g/L 三氯 乙酸水溶液和 2.5 mL 乙腈，涡旋混匀 30 s，超声 10 min，于 8000 r/min 离心 5 min，上清液全部转移至 50 mL 离心管中， 再向样品中加入10 mL 20 g/L三氯乙酸水溶液重复提取一次， 合并两次提取液，用三氯乙酸水溶液定容至 25 mL，再准确移 取 5 mL，用氨水调节 pH 至 8.5（±0.1）待净化（本实验是采 用阴性样本做基质加标实验，故省略酶解步骤）。 二、SPE 净化（Copure® PBA, 100 mg/3 mL） 活化：向 PBA 柱中依次加入 3 mL 乙腈，3 mL 0.25 mol/L 乙 酸铵缓冲液（pH=8.5）进行活化。 上样和洗脱：取上述待净化液过柱，控制流速不超过 1 滴 / 秒， 然后用 3 mL 0.25 mol/L 乙酸铵缓冲液（pH=8.5）淋洗小柱， 弃去全部流出液，抽干小柱，用 2 mL 0.1 mol/L 甲酸水溶液 洗脱，抽干小柱，收集全部洗脱液。 上机：取上述洗脱液过 0.22 µm PES 水系滤膜，供上机分析。 三、标曲配制 采用内标法定量，分别精密量取适量的利巴韦林标准溶液和同 位素内标利巴韦林 -13C5 工作液，用 0.1 mol/L 甲酸水溶液配 制成适当浓度的标准工作溶液。 四、仪器条件 色谱条件 仪器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TQS Endura） 色谱柱：CS211003H（HILIC，2.1 mm×100 mm，3 µm） 流动相：A：5 mmol/L 乙酸铵溶液（含 0.1% 甲酸）   B：乙腈 洗脱方式：梯度洗脱，见表 1 表 1 梯度洗脱程序