乳制品中三聚氰胺检测方案(液相色谱仪)

智能文字提取功能测试中

文件号：FLYQ-AD-FA-01浙江福立分析仪器股份有限公司成都应用中心 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法 分析报告 一、参考标准 依据国家标准《GB/T 22388-2008原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》 二、方法介绍 试样用三氯乙酸溶液-乙腈提取，经阳离子交换固相萃取柱净化后，用高效液相色谱测定，外标法定量。 三、试剂和材料 3.1试剂 3.1.1乙腈：色谱纯。 3.1.2甲醇：色谱纯。 3.1.3氨水：分析纯，含量为25%-28%。 3.1.4三氯乙酸：分析纯。 3.1.5柠檬酸：分析纯。 3.1.6辛烷磺酸钠：色谱纯。 3.1.7甲醇溶溶液：准确量取50mL 甲醇和50mL水，混匀后备用。 3.1.8三氯乙酸溶液友(1%))：准确称取 5g三氯乙酸于 500mL 容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀后备用。 3.1.9氨化甲醇溶液(5%))：准确量取5mL 氨水和95mL甲醇，混匀后备用。 3.1.10离子对试剂缓冲液：准确称取2.10g柠檬酸和2.16辛烷磺酸钠，加入约980mL水溶解，定容至1L备用。 3.1.12三聚氰胺标准品： CAS 108-78-01，纯度99.44%，有证书。 3.1.13阳离子交换固相萃取柱： CNW Poly-Sery MCX SPE 混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯苯基高聚物，60mg， 3mL。 3.1.14微孔滤膜： 0.45um，有机相。 3.1.15氮气：纯度99.999% ( 地址：四川省成都市成华区成致路50号3栋2单元3楼 ) ( 分析员：刘海侠赵倩 ) ( 日期：2 0 21.7.22. ) 3.2仪器设备 3.2.1高效液相色谱仪：福立LC5090 高效液相色谱仪，配备 LC5090 在线脱气机、LC5090二元高压输液泵、LC5090自动进样器、LC5090 柱温箱、LC5090 紫外检测器。 3.2.2色谱柱： Sunniest C18 柱，4.60 mm*250 mm， 粒径为5.0 um。 3.2.3分析天平：精度0.0001g。 3.2.4 50mL 具塞离心管。 3.2.510mL塑料离心管。 3.2.6高速离心机。 3.2.7涡旋混合器。 3.2.8流动相抽滤装置。 3.2.9 MultiVap-10 定量平行浓缩仪。 3.2.10固相萃取装置。 四、溶液配制 4.1标准溶液配制 4.1.1三聚氰胺标准储备溶液：准确称取13.3mg三聚氰胺标准品于 10mL容量瓶中，用甲醇水溶液(3.1.7)溶解并定容至刻度，配制成浓度为1.33mg/mL 的标准储备液，于4℃避光保存。 4.1.2三聚氰胺标准使用溶液：吸取1.00mL三聚氰胺标准储备液(1.33mg/mL)，用甲醇水溶液(3.1.7)稀释定容至10mL， 配制成浓度为133ug/mL 的标准使用液，于4℃避光保存。4.1.3标准曲线绘制：吸取不同体积的三聚氰胺标准使用溶液(133ug/mL)，用流动相稀释，配成浓度为0.4，0.8，2.0，20， 40， 80ug/mL的三聚氰胺标准系列溶液。 4.2样品溶液配制 4.2.1样品提取 称取2g(精确到0.01g) 试样于50mL 具塞离心管中，加入15mL三氯乙酸溶液(3.1.8)和5mL乙腈，涡旋混合2min，超声提取10min， 在 8000r/min 转速下离心10min， 将上清 地址：四川省成都市成华区成致路50号3栋2单元3楼 邮编： 610052 ( 分析员：刘海侠赵倩 ) ( 审核：金迁 ) ( 日期：2 0 21.7.22. ) 夜转移至25mL容量瓶中，用三氯乙酸溶液(3.1.8)定容至25mL， 移取5mL滤液，加入5mL水混匀后做待净化液。 4.2.2样品净化 将阳离子交交固相萃取柱(3.1.13)依次用3mL甲醇、5mL水活化，再加入待净化液(4.2.1)，依次用3mL 水和3mL甲醇洗涤，抽至近干后，用6mL氨化甲醇溶液(3.1.9)洗脱。整个固相萃取过程流速不超过 1mL/min。洗脱液于50℃下用氮气吹干，残留物(相当于0.4g样品)用1mL流动相定容，涡旋混合1min， 过滤0.45微米滤膜后供液相色谱测定。 五、分析结果 5.1试剂空白谱图 图1 试剂空白谱图 5.2 20ug/mL三氰胺标准溶液典型谱图及结果 地址：四川省成都市成华区成致路50号3栋2单元3楼 邮编： 610052 分析员：刘海侠赵倩审核：：金迁电话：15657600027日期：2021.7.22. 图22三聚氰胺标准溶液谱图 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 min uAU| LuAU*s」 1 三聚氰胺 13.041 123421.8 1583924.1 123421.8 1583924.1 系统评价表 峰序 组分名 保留时间 半高峰宽 容量 理论 分离度 拖尾 min| min| 因子 塔板 因子 1 三聚氰胺 13.041 0.19985 0.0000 23589 0.000 0.975 5.3重复性实验 图3 三聚氰胺标准溶液八针重复性谱图 1 三聚氰胺 13.097 0.066 3218568.4 0.149 247949.5 0.149 5.4标准曲线 分别将一系列不同浓度的三聚氰胺标准溶液(4.1.3)各20uL，进行HPLC分析。然后以峰面积为纵坐标，以含量为横坐标，绘制标准曲线。 5.4.1三聚氰胺标准溶液(0.4ug/mL) 谱图及结果 审核：金迁 ( 日期：2 0 21.7.22. ) 图4三聚氰胺标准溶液(0.4ug/mL)谱图 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积min uAU| uAU*s」 1 三聚氰胺 13.057 2496.5 32122.4 2496.5 32122.4 系统评价表 柱长：250mm 死时间： 峰序 组分名 保留时间 minl 半高峰宽 容量 理论 分离度 拖尾min 因子 塔板 因子 1 三聚氰胺 13.057 0.20061 0.0000 23470 0.000 1.005 5.4.2三聚氰胺标准溶液(0.8ug/mL)谱图及结果 图5三聚氰胺标准溶液(0.8ug/mL)谱图 地址：四川省成都市成华区成致路50号3栋2单元3楼 邮编： 610052 审核：：：金迁 ( 日期：2 0 21.7.22. ) 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 [min] uAU uAU*s 1 三聚氰胺 13.038 4962.1 63301.5 系统评价表 柱长：250mm 死时间： 5.4.3三聚氰胺标准溶液(2.0ug/mL)谱图及结果 00.511.522.533.544.555.566.577.588.599.51010.51111.51212.51313.51414.51515.51616.51717.518[min] 图6三聚氰胺标准溶液(2.0ug/mL)谱图 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 minl uAU| luAU*s 1 三聚氰胺 13.037 12273.0 157642.5 12273.0 157642.5 系统评价表 柱长：250mm 死时间： 峰序 组分名 保留时间 半高峰宽 容量 理论 分离度 拖尾 min| min] 因子 塔板 因子 1 三聚氰胺 13.037 0.19928 0.0000 23712 0.000 1.014 5.4.4三聚氰胺标准溶液 (20ug/mL)谱图及结果 ( 邮编： 610052 ) ( 审核： ： 金迁 ) ( 日期：2 0 21.7.22. ) [min] 图7三聚氰胺标准溶液(20ug/mL)谱图 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积min luAUl uAU*s 系统评价表 柱长：250mm 死时间： 峰序 组分名 保留时间 半高峰宽 容量 理论 分离度 拖尾lminl minl 因子 塔板 因子 1 三聚氰胺 13.041 0.19985 0.0000 23589 0.000 0.975 5.4.5三聚氰胺标准溶液 (40ug/mL)谱图及结果 [min] 图83三聚氰胺标准溶液(40ug/mL)谱图 ( 地址：四川省成都市成华区成致路50号3栋2单元3楼 ) 审核：：金迁 ( 日期：2 0 21.7.22. ) 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 minl [uAU] uAU*s 1 E聚氰胺 13.253 244929.7 3226132.7 244929.7 3226132.7 系统评价表 柱长：250mm 死时间： 峰序 组分名 保留时间 半高峰宽 容量 理论 分离度 拖尾min min| 因子 塔板 因子 1 三聚氰胺 13.253 0.20436 0.0000 23297 0.000 0.951 5.4.6三聚氰胺标准溶液 (80ug/mL) 谱图及结果 [min1 图9三聚氰胺标准溶液(80ug/mL)谱图 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 minl uAU| uAU*s] 1 三聚氰胺 13.260 465209.4 6400829.8 465209.4 6400829.8 系统评价表 峰序 组分名 保留时间 半高峰宽 容量 理论 分离度 拖尾min |minl 因子 塔板 因子 1 三聚氰胺 13.260 0.21400 0.0000 21271 0.000 0.900 5.4.7三聚氰胺标准曲线方程及相关系数 ( 审核： ： 金迁 ) ( 日期：2 0 21.7.22. ) 校正因子： f0=0.0751865， fl=1.24739E-005 相关系数： r^2=0.99997 5.5检出限 5.5.1三聚氰胺标准溶液(0.4ug/mL)七针重复性谱图 图10 三聚氰胺标准溶液i(0.4ug/mL)七针重复性谱图 5.5.2三聚氰胺检出限结果 地址：四川省成都市成华区成致路50号3栋2单元3楼 邮编： 610052 审核：金迁 日期：2021.7.22. 以取样2.0g计，本方法的检出限、定量限如下表所示： 组分名 含量[ug/mL] 含量 [ug/mL] 含量 [ug/mL] 含量 [ug/mL] 含量[ug/mL] 含量[ug/mL] 含量[ug/mL] 检出限 [mg/kg] 定量限mg/kg] 三聚氰胺 0.4692 0.4753 0.4753 0.4762 0.4794 0.4752 0.4759 0.025 0.25 5.6奶粉样品中三聚氰胺谱图及回收率结果 5.6.1奶粉试样空白 [min] 图11 奶粉试样空白谱图 分析结果表 峰序 组分名 min min [uAU] [uAU] uAU*s uAU*s [ug/g] [ug/g] 1 三聚氰胺 13.033 840.6 11197.8 0.5372 总计： 840.6 11197.8 0.5372 5.6.2奶粉样品谱图及结果 ( 邮编： 610052 ) 分析员：刘海侠赵倩审核：：金迁电话：15657600027日期：2021.7.22. [min] 图12奶粉样品谱图 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 含量 1 minl [uAU] uAU*s」 [ug/g] 三聚氰胺 13.100 15070.5 196533.0 6.3168 总计： 15070.5 196533.0 6.3168 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 含量min| luAU| uAU*s [ug/g] 1 三聚氰胺 13.102 15114.6 197412.9 6.3442 注：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值为0.0274，为算术平均值6.3455的0.43%，符合不得超过算术平均值10%的要求。 5.6.3奶粉样品加标三聚氰胺(10mg/kg)谱图及回收率结果 图13 奶粉样品中加标三聚氰胺安(10mg/kg)谱图 地址：四川省成都市成华区成致路50号3栋2单元3楼 邮编： 610052 分析员：刘海侠赵倩审核：：：金迁 日期：2021.7.22. 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 含量 min [uAU] uAU*s [ug/g] 1 三聚氰胺 13.065 34589.5 488813.1 15.4315 分析结果表 1 三聚氰胺 13.060 34486.8 487441.9 15.3887 分析结果表 总计： 34584.1 488908.6 15.4345 奶粉中三聚氰胺(mg/kg) 试样空白(mg/kg) 加标量(mg/kg) 测定值 (mg/kg) 加标回收率/% 相对标准偏差% 加标回收率范围/% 5.81 0.54 10 15.43 90.8 0.25 90.4~90.8 15.39 90.4 15.43 90.8 注：添加浓度为10mg/kg，回收率在90.4~90.8%之间，相对标准偏差为0.25%，符合回收率在 80%-110%之间，相对标准偏差小于10%的要求。 5.7液体奶样品中三聚氰胺谱图及回收率结果 5.7.1液体奶试样空白 ( 邮编： 610052 ) 分析员：刘海侠赵倩审核：金迁电话：15657600027日期：2021.7.22. 00.511.5 22.533.54 4.5 55.566.577.588.59 9.51010.51111.51212.51313.51414.51515.51616.51717.518[min] 图14 液体奶试样空白谱图 分析结果表 5.7.2液体奶样品谱图及结果 图15液体奶样品谱图 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 含量 1 minl uAUl uAU*s [ug/g] 三聚氰胺 13.124 6295.6 80575.5 2.7007 总计： 6295.6 80575.5 2.7007 邮编： 610052 分析员：刘海侠赵倩审核：：金迁电话：15657600027日期：2021.7.22. 分析结果表 注： 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的测对差值为 0.0064，为算术平均值2.6912 的 0.24%，符合不得超过算术平均值10%的要求。 5.7.3液体奶样品加标三聚氰胺 (10mg/kg)谱图及回收率结果 图16液体奶样品中加标三聚氰胺 (10mg/kg)谱图 分析结果表 1 三聚氰胺 13.069 26961.1 359549.7 11.4004 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 含量 min uAU| luAU*s [ug/g] 1 三聚氰胺 13.064 26953.1 359063.4 11.3853 26953.1 359063.4 11.3853 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 含量 minl [uAU] uAU*s] [ug/g] 1 三聚氰胺 13.063 26998.6 359987.5 11.4141 总计： 26998.6 359987.5 11.4141 试样空白 加标量 测定值 加标回收 相对标 加标回收率范围 三聚氰胺 (mg/kg) mg/kg) (mg/kg) 率/% 准偏差% /% (mg/kg) 地址：四川省成都市成华区成致路50号3栋2单元3楼 邮编： 610052 分析员：刘海侠赵倩审核：金迁 日期：2021.7.22. 2.37 0.32 10 11.40 87.1 0.11 87.0~87.2 11.39 87.0 11.41 87.2 注：添加浓度为10mg/kg， 回收率在87.0~87.2%之间，相对标准偏差为0.11%，符合回收率在 80%-110%之间，相对标准偏差小于10%的要求。 六、实验结果 方法验证汇总表 化合物 检出限[mg/kg] 保留时间RSD(%) 峰面积RSD(%) 标准曲线相 关系数 样品中含量[mg/kg] 加标回收率(%) 定量限[mg/kg] 三聚氰胺 0.025 0.066 0.149 0.99997 5.81((奶粉) 90.4-90.8(奶粉) 0.25 2.37(液本奶) 87.0-87.2(液体奶) 由以上实验结果可知，本方法符合 GB/T 22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》的要求。 ( 邮编： 610052 ) 分析员：刘海侠赵倩审核：金迁电话：15657600027日期：2021.7.22. 邮编： 核：金迁电话： 电话： 注意：由于样品基质组分不同，所采用的仪器上机条件不同，目标组分三聚氰胺出峰时间不同。1.液体奶与奶粉样品：液体奶试样空白谱图液体奶样品谱图奶粉试样空白谱图奶粉样品谱图2.巧克力样品巧克力试样空白谱图巧克力样品谱图