尿液中四氢大麻酚代谢物检测方案(固相萃取仪)

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莱伯帕兹#EM0002 撰稿人：3张海生审 核：马忠强 EmporeTM 膜式固相萃取柱萃取尿液中四氢大麻酚代谢物并以 GC-MS定量 摘要： 在(-)-11-nor-9-羧基-△-四氢大麻酚代谢物(THCCOOH)的气相色谱-质谱分析中，评估了 EmporeM固相萃取柱(4215SD-C18)的样品制备。固相萃取柱性能由测定的回收率决定。回收率范围在78.7-110.1%。标准曲线线性范围在 0.15ug/mL~3.0ug/mL时，相关系数R=0.9998。 关键词： 四氢大麻酚， THCCOOH， 外标法， GC-MS 前言： 美国CDS公司膜式固相萃取 (SPE)技术，以其有机溶剂消耗少、结果重现性高、样品制备的通量高、提取物更清洁，可减少 GC系统的污染以及自动化提取等优势[1]，广泛应用于药物检测领域，尤其成为临床和法医毒理学实验室中样品制备的首选技术[2，3]。本实验使用美国 CDS公司膜式固相萃取柱(EmporeM， 4215SD-C18)提取尿液中△-四氢大麻酚(THC，大麻)代谢物(-)11-nor-9-羧基-△-四氢大麻酚 (THCCOOH)，并以 GC-MS 分析定量。 1，实验过程 ( 地址：北京市顺义区安庆大街6 号 ) 网址： www. labparts.cn 电话：010-80486450-5036/5037 1.1仪器与试剂 所有试剂均为分析纯或更高。 THCCOOH(100.0±0.6 ug/mL) 和 MSTFA+1% TMCS 硅烷化试剂，均购自西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司； 人工尿液(PH： 5.7-500mL)，购自福州飞净生物科技有限公司； 乙酸乙酯(色谱纯)，购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司； 甲醇(色谱纯)，购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司； 正己烷(色谱纯)，购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司； EmporeM膜式固相萃取柱：4215SD-C18，购自美国 CDS公司；气质联用仪：7890B-5977B安捷伦气质联用仪， Agilent公司。 1.2工作液配制 THCCOOH 标准使用溶液： 0.1 ug/mL， 溶剂体系为甲醇； 1.3实验部分 1.3.1样品制备 取 12个15mL离心管，分别装入3mL尿液样品，再加入不同体积的 THCCOOH标准使用液(加标量分别为3ng、15ng、30ng、60ng、150ng、300ng)， 每个标点进行平行两次制备。然后加入300uL 氢氧化钾溶液(10mol/L)，在60℃水浴环境下水解 15min取出后冷却至室温，再以冰醋酸调节 pH 值到4.0~4.5。 EmporeM固相萃取柱(C18，7mm/3mL)预先用150uL甲醇进行活化，之后进行上样(在重力作用下使样品自然流下)，上样结束后用750pL甲醇-水溶液夜((50：50)淋洗萃取柱，在690mmHg真空状态下干燥 5min，最后用 800uL 正己烷-乙酸乙酯溶液(75：25)进行洗脱。 1.3.2净化与浓缩 洗脱液经40℃氮吹至干，然后加入100pL衍生试剂(MSTFA+1%TMCS)，在60℃C水浴条件下衍生 20min， 转移至样品瓶待GC-MS分析。 1.3.3标准曲线配制 取6个20mL样品瓶，分别加入不同体积织THCCOOH标准使用溶液，加入THCCOOH 的质量分别为 3ng、15ng、30ng、60ng、150ng、300ng，参照与加标样品制备同等浓缩、衍生条件进行前处理，待GC-MS分析。 1.3.4 GC-MS分析 进样口温度：290℃；进样模式：不分流进样；流速：1.0mL/min； 柱温：100℃保持 1min， 然后以 30℃/min 的速度升至300℃，保持 5min。 表1 THCCOOH 定量、定性离子 化合物 定量、定性离子 保留时间 (min) THCCOOH 371/473/488 12.158 2，实验结果(外标法) 实验发现：标准曲线第一个点 (3ng)信噪比较低，难以准确积分。标准曲线第五个点(150ng)结果明显偏低，为实验操作衍生化失误引进误差。 图1标准曲线校准点重叠色谱图 图2标准曲线 3，结果与讨论 本次实验展示了一种使用(CDS-EmporeM 固相萃取柱(215SD-C18)，对尿液中四氢大麻酚代谢物 (THCCOOH) 进行富集提取的简单有效方法。实验中，尿液加标样品经水解、固相萃取净化、浓缩以及衍生等前处理步骤后，经GC-MS 分析得到不同浓度下四氢大麻酚代谢物 (THCCOOH)的加标回收率，回收率范围在78.7-110.1%，结果较好。标准曲线浓度范围在 0.15u g/mL~3.0ug/mL 时，相关系数R'=0.9998，具有较好线性。实验表明， CDS-EmporeM固相萃取柱(215SD-C18)适用于尿液中四氢大麻酚代谢物 (THCCOOH)的萃取净化。该方法具有操作简便，线性范围宽，稳定性高等优点，并在尿液量少，分析物浓度较低时显示出优异的回收率。 4，参考文献 1，-Jasbir Singh and Linda Johnson， Solid-Phase Extraction of THC Metabolite fromUrine using the Empore Disk Cartridge Priorto Analysis by GC-MS， Journal of AnalyticalToxicology，Vol. 21， September 1997。 2.R.H. Liu and B.A. Goldberger. Handbookof Workplace Drug Testing. AACC Press，Washington， DC， 1995. 3，A.H.B. Wu， N. Liu， Y.-J. Cho， K.G. Johnson，and S.S. Wong. Extraction and simultaneouselution aandGderivatiztionn Coff11-nor-9-carrbboxy-▲-tetrahydrocannabinol usingToxi-Lab SPEC prior to GC/MS analysis ofurine， J. Anal. Toxicol. 17：215-17(1993) Counts vs. 采集时间(min) 图3不同浓度加标样品重叠色谱图 表2加标回收率结果 序号 加标量 回收率 % 均值% ng 1 2 1 15 82.2 96.4 89.3 2 30 101.8 109.4 105.6 3 60 89.2 78.7 83.9 4 150 93.1 101.3 97.2 5 300 91.4 110.1 100.7 注：因3ng标点信噪比偏低，在此不做数据统计 北京莱伯帕兹检测科技有限公司 北京莱伯帕兹检测科技有限公司 摘要：在(-)-11-nor-9-羧基-△9-四氢大麻酚代谢物(THCCOOH)的气相色谱-质谱分析中，评估了EmporeTM固相萃取柱（4215SD-C18）的样品制备。固相萃取柱性能由测定的回收率决定。回收率范围在78.7-110.1%。标准曲线线性范围在0.15μg/mL~3.0μg/mL时，相关系数R2=0.9998。 关键词：四氢大麻酚，THCCOOH，外标法，GC-MS  前言：美国CDS公司膜式固相萃取 (SPE)技术，以其有机溶剂消耗少、结果重现性高、样品制备的通量高、提取物更清洁，可减少 GC 系统的污染以及自动化提取等优势[1]，广泛应用于药物检测领域，尤其成为临床和法医毒理学实验室中样品制备的技术[2,3]。本实验使用美国CDS公司膜式固相萃取柱（EmporeTM，4215SD-C18）提取尿液中△9-四氢大麻酚（THC，大麻）代谢物（-）11-nor-9-羧基-△9-四氢大麻酚 (THCCOOH)，并以GC-MS分析定量。