解决方案 | 枸杞中农药残留量的测定

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摘要近年来国家出台系列相关政策支持传统中医的创新和发展，将中医药发展列入国家发展战略，中医药将对社会发展做出更大贡献。在2016年印发的《中医药发展战略规划纲要（2016—2030年）》中提出，到2020年，实现人人基本享有中医药服务，中医药产业成为国民经济重要支柱之一；到2030年，中医药服务领域实现全覆盖，中医药健康服务能力显著增强，对社会经济发展作出更大贡献，传统中医的创新发展将迎来高光时刻。而作为中医药中重要的组成部分——中药也成为了人们关注的焦点，中药中农药的残留量的检测和限定也成为了中药使用过程中的一个重要环节。作为我们日常常见及广泛使用的中药中的一类，枸杞子中农药残留的检测也成为使用和食用枸杞子的一个必要环节。近年来，随着国内外对农药残留相关标准的日益完善、监管力度的不断加强、责任主体安全意识的持续提高，农药残留检测技术得到快速发展，莱伯泰科可以提供智能化、一体化的农残前处理解决方案。本文参考《GB 23200.11-2016 食品安全国家标准 桑枝、金银花、枸杞子和荷叶中413种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-质谱法》提供枸杞子中部分农药残留的测定方案。1、仪器设备及试剂耗材1.1仪器设备SPE1000全自动固相萃取系统，莱伯泰科MVP全自动高通量真空平行浓缩仪，莱伯泰科液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)  AB4500全自动均质仪MH-400，莱伯泰科MiniLab 3000全自动液体处理平台，莱伯泰科M64高通量平行浓缩仪，莱伯泰科1.2标准品19种农药混标农残标准储备液：100μg/mL19种农药混标农残标准工作液：取100μL的标准储备液于10mL的容量瓶中，用乙腈定容，得到浓度为1μg/mL的标准工作液。2、实验过程2.1提取称取样品枸杞子1.0g（精确至0.01g），置于50mL离心管中，加入5mL水，15mL乙腈，15000r/min均质提取1min，加入2g氯化钠，再均质提取1min，取上清液于40mL带尾管浓缩杯中，在离心管中加入15mL乙腈，重复均质提取1min，8000r/min离心5min,取全部上清液与之前的上清液合并。于温度40℃，转数200r/min，梯度压力500mbar/1min-300mbar/2min-220mbar/5min-200mbar/5min-180mbar/15min条件下减压真空浓缩至1~2mL，用4mL乙腈-甲苯（3+1）冲洗浓缩杯壁，并重复1次，待净化。加标样品，于称样完成时加入1μg/mL的标准工作液100μL，提取步骤同上。2.2 SPE净化在TPH柱中加入2cm高无水硫酸钠，按照图1所示进行SPE1000方法编辑，加载并运行方法，完成2.1中所有样品的萃取净化。收集洗脱液于60mL收集瓶中，于温度40℃、转数180r/min、梯度压力500mbr/1min-300mbar/2min-200mbar/3min-180mbar/10min-150mbar/10min-100mabr/30min条件下减压真空浓缩近干，并于温度40℃、压力3psi条件下经M64氮吹至干，加入1mL乙腈，混匀。0.22μm滤膜过滤，液相色谱-串联质谱测定。图1  固相萃取方法2.3液相色谱-串联质谱条件A）色谱柱：C18，柱长100mm，内径2.1mm，粒径2.7μmB）流动相：0.1%甲酸水：乙腈，梯度见表1.C）柱温：40℃D）进样量：10μLE）离子源：ESIF）扫描方式：正离子扫描G）检测方式：多反应监测H）离子喷雾电压：5500表一液相梯度表2.4标准曲线配置标准曲线使用MiniLab 3000 全自动液体处理平台配置，具体步骤见图2。图2标准曲线配置步骤3、实验结果3.1标准曲线总离子色谱图图3 标准曲线色谱图3.2基质空白离子色谱图图4 基质空白色谱图3.3加标样品离子色谱图图5 加标样品色谱图3.4各目标物曲线线性图6 标准曲线图3.5 加标回收结果表2 加标回收率结果4.结果与讨论本方法使用SPE1000全自动固相萃取系统对枸杞子中甲拌磷、毒死蜱、克百威等19种农药进行萃取，经MVP减压浓缩后用液相色谱-串联质谱/质谱器进行检测，加标回收率范围在65.0%-104.7%，RSD为2.21%-9.54%，方法的加标回收率满足要求，适合枸杞子中甲拌磷、毒死蜱、克百威等农药残留的检测。此次实验使用了MH-400、MVP、SPE1000、M64及MiniLab3000整体解决方案，全过程高度自动化、批量化，减少实验中提取试剂的转移，提高实验效率、节省了实验人员的时间，仪器封闭及主动排废的功能减少了实验室和环境的污染，保护实验人员安全。参考标准GB 23200.11-2016 食品安全国家标准 桑枝、金银花、枸杞子和荷叶中413种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-质谱法关于莱伯泰科北京莱伯泰科仪器股份有限公司（股票代码：688056.SH）成立于2002年，是一家专业从事实验分析仪器的研发、生产和销售的科技型公司。公司自成立之初便专注于科学仪器设备的研发，立志为环境检测、食品安全、医疗卫生、疾病控制、材料研究、生命科学等众多基础科学及行业应用提供实用可靠的实验室设备和整体解决方案。公司发展至今已拥有各类专利及软件著作权100余项，顺利通过“高新技术企业”和“北京市企业技术中心”认定，属于国家级专精特新小巨人企业，连续多年被业内媒体评为中国仪器仪表行业“最具影响力企业”，并于2022年入选“2022北京制造业企业100强”和“2022北京高精尖企业100强”，是全球范围内能将多种类和多功能的样品前处理技术与全自动实验分析检测平台组合成全自动实验分析仪器系统的主要实验分析仪器供应商之一。公司拥有LabTech、CDS、Empore等行业知名品牌，在中国和美国设有研发和生产基地，并在中国内地主要城市、中国香港、美国马萨诸塞州和宾夕法尼亚州等地设有产品营销和服务中心。公司产品服务涵盖实验室分析仪器、样品前处理仪器、实验室设备、医疗设备、实验室耗材和实验室工程建设等，可为全球多种类型用户提供从实验室建设到样品分析的一站式解决方案。目前，公司产品已销往全球90多个国家，累计服务客户3万余家。如需了解莱伯泰科的更多详情，请访问http://www.labtechgroup.com/。解决方案|枸杞中农药残留量的测定 摘要 近年来国家出台系列相关政策支持传统中医的创新和发展，将中医药发展列入国家发展战略，中医药将对社会发展做出更大贡献。在2016年印发的《中医药发展战略规划纲要(20166一2030年)》中提出，到2020年，实现人人基本享有中医药服务，中医药产业成为国民经济重要支柱之一；到2030年，中医药服务领域实现全覆盖，中医药健康服务能力显著增强，对社会经济发展作出更大贡献，传统中医的创新发展将迎来高光时刻。而作为中医药中重要的组成部分—―中药也成为了人们关注的焦点，中药中农药的残留量的检测和限定也成为了中药使用过程中的一个重要环节。作为我们日常常见及广泛使用的中药中的一类，枸杞子中农药残留的检测也成为使用和食用枸杞子的一个必要环节。 近年来，随着国内外对农药残留相关标准的日益完善、监管力度的不断加强、责任主体安全意识的持续提高，农药残留检测技术得到快速发展，莱伯泰科可以提供智能化、、一体化的农残前处理解决方案。 本文参考《GB 23200.11-2016食品安全国家标准桑枝、金银花、枸杞子和荷叶中413种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-质谱法》提供枸杞子中部分农药残留的测定方案。 1、仪器设备及试剂耗材 1.1仪器设备 SPE1000 全自动固相萃取系统，莱伯泰科 MVP 全自动高通量真空平行浓缩仪，莱伯泰科 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI) AB4500 全自动均质仪 MH-400，莱伯泰科 MiniLab 3000 全自动液体处理平台，莱伯泰科 M64 高通量平行浓缩仪，莱伯泰科 1.2标准品 19种农药混标农残标准储备液：100 g/mL 19种农药混标农残标准工作液：取100uL的标准储备液于 10mL的容量瓶中，用乙腈定容，得到浓度为1ug/mL 的标准工作液。 2、实验过程 2.1提取 称取样品枸杞子1.0g(精确至0.01g)， 置于 50mL离心管中，加入 5mL 水， 15mL乙脂，15000r/min均质提取 1min， 加入2g氯化钠， 再均质提取 1min， 取上清液于 40mL 带尾管浓缩杯中，在离心管中加入15mL乙腈，重复均质提取 1min， 8000r/min 离心 5min，取全部上清液与之前的上清液合并。于温度40℃，转数 200r/min，梯度压力500mbar/1min-300mbar/2min-220mbar/5min-200mbar/5min-180mbar/15min 条件下减压真空浓缩至1~2mL，用4mL乙腈-甲苯(3+1)冲洗浓缩杯壁，并重复1次，待净化。 加标样品，于称样完成时加入1ug/mL 的标准工作液100以L， 提取步骤同上。 2.2 SPE 净化 在 TPH 柱中加入2cm 高无水硫酸钠，按照图1所示进行 SPE1000 方法编辑，加载并运行方法，完成2.1中所有样品的萃取净化。 收集洗脱液于60mL收集瓶中，于温度40℃、转数 180r/min、梯度压力500mbr/1min-300mbar/2min-200mbar/3min-180mbar/10min-150mbar/10min-100mabr/30min条件下减压真空浓缩近干，并于温度40℃、压力 3psi 条件下经M64氮吹至干，加入1mL乙腈，混匀。0.22um滤膜过滤，液相色谱-串联质谱测定。 方法管理： 关闭 图1 固相萃取方法 2.3液相色谱-串联质谱条件 A)色谱柱： C18， 柱长100mm， 内径2.1mm， 粒径2.7以m B)流动相：0.1%甲酸水：乙腈，梯度见表1. C)柱温：40℃ D) 进样量：10pL E) 离子源： ESI F)扫描方式：正离子扫描 G)检测方式：多反应监测 H)离子喷雾电压：5500 表一液相梯度表 步骤 总时间 流速(mL/min) 流动相A 流动相B (0.1%甲酸水) 9% (乙腈) 9% 1 0.00 0.25 100.0 0.0 2 3.00 0.25 70.0 30.0 3 8.00 0.25 40.0 60.0 4 12.00 0.25 30.0 70.0 5 18.00 0.25 30.0 70.0 6 23.00 0.25 1.0 99.0 7 26.00 0.25 100.0 0.0 2.4标准曲线配置 标准曲线使用 MiniLab 3000 全自动液体处理平台配置，具体步骤见图2。 图2标准曲线配置步骤 3、实验结果 3.1标准曲线总离子色谱图 图3标准曲线色谱图 3.2基质空白离子色谱图 图4基质空白色谱图 3.3加标样品离子色谱图 图5加标样品色谱图 3.4各目标物曲线线性 图6标准曲线图 3.5加标回收结果 表2加标回收率结果 化合物 加标浓度 (ng/g) 加标回收率% 均值 % RSD % 1 2 3 4 5 6 甲拌磷 100 76.9 79.1 80.2 91.1 88.0 79.9 82.5 6.24 毒死蜱 100 75.9 95.4 77.2 93.3 87.3 87.6 86.1 8.54 克百威 100 83.8 84.5 88.1 87.8 88.7 85.4 86.4 2.21 乐果 100 75.2 78.3 84.8 79.6 76.1 78.2 78.7 3.95 倍硫磷 100 82.3 80.9 88.5 87.7 82.5 83.3 84.2 3.41 莠去津 100 69.4 67.7 84.6 71.1 64.7 65.0 70.4 9.54 三唑酮 100 81.5 80.4 90.3 87.6 91.0 84.8 85.9 4.74 马拉硫磷 100 78.5 87.9 96.6 90.1 89.0 84.8 87.8 6.26 氧乐果 100 71.7 71.7 80.8 78.0 69.9 67.7 73.3 6.27 甲氰菊酯 100 88.8 93.4 93.1 97.2 92.5 78.0 90.5 6.74 甲萘威 100 77.5 72.8 82.9 76.9 85.8 70.4 77.7 6.84 辛硫磷 100 86.3 89.4 93.5 90.3 92.6 87.4 89.9 2.87 噻虫嗪 100 87.2 75.2 87.9 79.5 71.0 76.7 79.6 7.77 三唑磷 100 80.2 94.5 104.7 97.2 97.1 87.7 93.6 8.32 伏杀硫磷 100 87.2 97.7 87.7 95.8 90.6 96.3 92.5 4.58 米鲜胺 100 86.8 82.8 93.0 83.2 87.0 83.5 86.0 4.11 丙溴磷 100 74.1 85.8 83.1 83.0 94.1 85.8 84.3 6.97 涕灭威 100 75.9 70.6 75.8 73.0 72.7 71.6 73.3 2.71 杀螟硫磷 100 88.1 85.0 90.1 90.0 91.5 94.0 89.8 3.11 4.结果与讨论 本方法使用 SPE1000全自动固相萃取系统对枸杞子中甲拌磷、毒死蜱、克百威等19种农药进行萃取，经MVP 减压浓缩后用液相色谱-串联质谱/质谱器进行检测，加标回收率范围在65.0%-104.7%， RSD 为 2.21%-9.54%，方法的加标回收率满足要求，适合枸杞子中甲拌磷、毒死蜱、克百威等农药残留的检测。 此次实验使用了 MH-400、MVP、SPE1000、M64 及 MiniLab3000整体解决方案，全过程高度自动化、批量化，减少实验中提取试剂的转移，提高实验效率、节省了实验人员的时间，仪器封闭及主动排废的功能减少了实验室和环境的污染，保护实验人员安全。 参考标准 GB 23200.11-2016食品安全国家标准桑枝、金银花、枸杞子和荷叶中413种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-质谱法 关于莱伯泰科 北京莱伯泰科仪器股份有限公司(股票代码：688056.SH)成立于2002年，是一家专业从事实验分析仪器的研发、生产和销售的科技型公司。公司自成立之初便专注于科学仪器设备的研发，立志为环境检测、食品安全、医疗卫生、疾病控制、材料研究、生命科学等众多基础科学及行业应用提供实用可靠的实验室设备和整体解决方案。 公司发展至今已拥有各类专利及软件著作权100余项，顺利通过“高新技术企业”和“北京市企业技术中心”认定，属于国家级专精特新小巨人企业，连续多年被业内媒体评为中国仪器仪表行业“最具影响力企业”，并于2022年入选“2022北京制造业企业100强”和“2022北京高精尖企业100强”，是全球范围内能将多种类和多功能的样品前处理技术与全自动实验分析检测平台组合成全自动实验分析仪器系统的主要实验分析仪器供应商之一。 公司拥有 LabTech、CDS、Empore 等行业知名品牌，在中国和美国设有研发和生产基地，并在中国内地主要城市、中国香港、美国马萨诸塞州和宾夕法尼亚州等地设有产品营销和服务中心。公司产品服务涵盖实验室分析仪器、样品前处理仪器、实验室设备、医疗设备、实验室耗材和实验室工程建设等，可为全球多种类型用户提供从实验室建设到样品分析的一站式解决方案。目前，公司产品已销往全球90多个国家，累计服务客户3万余家。 如需了解莱伯泰科的更多详情，请访问 http：//www.labtechgroup.com/。 莱伯泰科