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BCA法测蛋白浓度时,样品不溶解时按照以下方法解决操作。 BCA 蛋白定量法是一种快速灵敏、稳定可靠的蛋白定量测定方法,其测定范围是10-2000ug/ml,是比Lowry 法更优越的专用于检测总蛋白质含量的产品。 BCA 蛋白定量测定方法:(96孔板) 1、配制BCA 工作液: 根据标准品和样品数量,按50 体积试剂A,1 体积试剂B 配制适量BCA 工作液,充分混匀。 2、将蛋白标准品按0, 1, 2, 4, 6,8, 10 微升加到96 孔板的蛋白标准品孔中,加灭菌双蒸水补足到10 微升;取10 微升待测样品加入96 孔板。每个测定要做2-3 个平行。 3、向带测样品孔和蛋白标准品孔中加入200 微升BCA工作液(即样品与工作液的体积比为1:20)混匀。 4、37℃温浴30min。冷取至室温。 5、酶标仪562nm 波长下测定吸光度。 6、制作标准曲线,从标准曲线中求出样品浓度。 BCA 蛋白定量测定操作注意事项: 1、反应颜色的深浅除了与样品的蛋白质浓度相关外,还与反应的温度有关。如果样品的浓度较高(>50μg/ml),反应温度一般采用37 度。如果样品蛋白质的浓度较低(<50μg),反应的温度为60℃,该温度下,色氨酸、酪氨酸和肽键得到充分氧化,大大提高检测灵敏度。 2、该方法检测的蛋白质浓度范围20μg-500μg/ml;当蛋白浓度<20ug/ml 时,推荐60℃温浴,并将蛋白液:工作液的比例调至1:8 进行测定(增强法)可以检测到5ug/ml。 试剂A 和B 在室温的稳定期至少1 年以上。标准蛋白液保存在-20℃,短期则4℃保存。
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上海远慕生物科技有限公司为您提供《BCA法测蛋白浓度样品》,该方案主要用于其他中蛋白浓度测定检测,参考标准《暂无》,《BCA法测蛋白浓度样品》用到的仪器有oxoid 胰蛋白胨使用说明书、pET-39b大肠杆菌蛋白表达载体,大肠系列质粒、 小鼠免疫球蛋白(Ig)ELISA试剂盒操作步骤。
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