LCMS测定中药千里光内源性毒素阿多尼弗林碱

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采用岛津LCMS-2050单四极杆质谱仪，参考2020版《中国药典》建立了测定千里光中阿多尼弗林碱的含量。该方法线性关系良好，相关系数r大于0.999，精密度、准确度均符合标准，可以为千里光中阿多尼弗林碱杂质含量测定提供参考。SSL-CA23-123Excellence in Science Excellence in ScienceLCMS-043 LCMS 测定中药千里光内源性毒素阿多尼弗 林碱 LCMS-043 摘要：本文参考2020版《中国药典》千里光检查项阿多尼弗林碱的相关条件 ，采用岛津单四极杆质谱仪 LCMS-2050 对千里光中阿多尼弗林碱进行测定。实验结果显示：在本色谱质谱系统下，空白溶液不干扰含量 测 定，方法专属性较好；校正因子溶液重复进样6次，目标峰阿多 尼 弗林碱和内标野百合碱色谱 峰 保留时间和 峰 面积的 RSD 分别为0.10%、0.07%和1.06%、0.90%，重复性好、仪器精密度良好；采用内标法定量，方 法准确度高，可为千里光中阿多尼弗林碱含量 测 定提供参考 。 关键词：单 四极杆质谱 阿多尼弗林碱 千里光 技术特点： 心使用 LCMS-2050测定千里光中 阿 多尼弗林碱的含量，丰富单四极杆质谱应用范围。 心参考2020版《中国药典》，符合标准要求。 中 草药 千 里光为菊科千里光属，具有清热解毒、明目、利湿作用，用于治疗痈肿疮毒、感冒发热、目 赤肿痛、泄泻痢疾、皮肤湿疹。阿多尼弗林碱是千里 光 中 的吡咯里西啶类生物碱(pyrrolizidine alkaloids，PAs)， 是该属植物的特征性成分之一。阿多尼弗林碱具 有强烈的肝 毒 性，直接靶器官为肝脏，在体内通过代 谢活化而致毒，可引起肝细胞出血性坏死等症状。近 年来引起了国际社会的广泛关注，国外有因服用了含 欧洲千里光植物的药茶而致死的报道。 了规定。但由于千里光属植物中 PAs 含量相对较低，且该类化合物结构上无生色团，紫外响应弱，故采用液 相色谱 -质谱联用法测定千里光中的的阿多尼弗林碱含 量，对千里光安全用药进行质量控制 ，以保障用药安全。2020版《中国药典》对 千 里光药材品种检查项下 要求使用液相色谱 -单四极杆质谱进行阿多尼弗林碱测 定，要求千里光药材中含量不得超过0.004%(40ug/g)。本实验使用岛津 LCMS -2050 建立了单四极杆质谱测定 千里光中阿多尼弗林碱的含量。 由于 PAs 的毒性，许多国家和地区对其限量作出 实验部分 1.1仪器 岛津超高效液相色谱 -单四极杆质谱联用仪 LCMS-2050。具体配置为： 系统控制器 ：SCL-40脱 气 机 DGU-405输液泵 LC-40D XR (LPGE)自动进样器 SIL-40C XR 柱温 品 箱 CTO-40C质 谱 仪：LCMS-2050 单四极杆质谱仪 色谱工作站：LabSolutions Ver. 5.114 1.2分析条件 色谱柱 Shim-pack GIST C18 (100 mm×2.1mm l .D.，2 um)；P/N： 227-32001-03；岛津(上 海)实验器材有限公司 流 流动相 日： A 相-0.5%甲酸溶液，B相-乙 腈 进样体积： 2uL 流 速 速： 0.4 mL/min 柱 温 40℃ 洗脱方式： 等度洗脱， A： B=93： 7 质谱条件 离 子源 尺： DUIS (ESI +APCI) 脱溶剂温 度 ： 450℃雾 干 加 化气 ：2.0 L/min 接 口 电压 ： -2kV 燥气 热气 司：：5.0L/min Qarray 电压 -50V ： 7.0L/min 扫描模式： SIM 366、326(+) DL 温度： 250℃ 样品前处理 供试品溶液：取千里光粉末(过三号筛)约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.5%甲酸溶液 50 mL，称定重量，超声处理(功率250W，频率 40 kHz) 40分钟，放冷，再称定重量，用 0.5%甲酸溶液补 足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2mL， 置5mL量瓶中，精密加入内标溶液1mL， 加0.5%甲酸 溶液至刻度，摇匀，吸取2uL，注入液相色谱-质谱联用仪，测 定，即得。 内标溶液：取野百合 碱 对照品适量 ，精密称定，加0.5%甲酸溶液制成每 1mL 含0.2 ug的溶液。 对照品溶液：取 阿 多尼弗林碱对照品适量，置5mL量瓶中，精密加入内标溶液1mL，加0.5%甲酸溶液至 刻度，稀释成分别含阿多尼弗林碱 0.01、0.02、0.04、0.06、0.08 ug/mL，含内标野百合碱 0.04 ug/mL的对照 品溶液。其中 0.04 ug/mL 又照品溶液为药典中规定的校正因子浓度。 结果与讨论 3.1专属性 溶剂空白样品与校正因子溶液 SIM 重 叠谱图显示，目标峰保留时间处未见明显干扰，方法专属性好。 图2 专 属 性 色谱图 3.2线性 将配制的0.01、0.02、0.04、0.06、0.08 ug/mL (分别含内标野百合碱 0.04 ug/mL) 的校准曲线溶液，按 1.2中的分析条件进行测定，以浓度比为横坐标，峰面积比为纵坐标，内标法制作校准曲线，阿多尼弗林碱校准 曲线方程、相关系数见图3。所得校准曲线线性关系良好，相关系数大于0.999，准确度在96.7%-100.9%之间。 图3 阿多尼弗林碱校 准 曲线 3.3精密度 校正因子溶液连续6次进样，进行精密度测试。校正因子溶液中阿多尼弗林碱和内标野百合碱的保留时间 和 峰 面积的 RSD 分别为 0.10%、0.07%和1.06%、0.90%，仪器精密度良好。 表1 重复性测 试 保 留时间及峰面积RSD 值 名称 化合物 保留时间 RSD% 峰面积 RSD% 校正因子溶液 阿多尼弗林碱 0.10 1.06 野百合碱 0.07 0.90 对供试品溶液进行上机分析，采用内标法计算供试品含量，定量结果为检出阿多尼弗林碱为 0.0021%，低 于限度要求。向供试品样品中加入标准品溶液进行回收率 试 验，使加标浓度为 0.01 ug/mL (0.0021%)、0.02ug/mL (0.0006) 和 0.04 ug/mL (0.0013)，其回收率在90%到105%之间 。 图4 供试品 溶 液色谱图 表2千 里光 供试品加标回 收 率结果 化合物 加标浓度(%) 回收率(%) 阿多尼弗林碱 0.0021 90 0.0006 105 0.0013 102.5 结论 采用岛津 LCMS-2050 单四极杆质谱仪，参考2020版《中国药典》建立 了测 定千里光中阿多尼弗林碱的含量。该方法线性关系良好，相关系数r大于0.999，精密度、准确度均符合标准，可以为千里光中阿多尼弗林碱杂质 含量测定提供参考。 岛津应用云