基于HILIC模式的SCION（赛里安）LC6000高效液相色谱仪对稀少糖的测定

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前言：稀少糖是自然界中数量较少的糖，可以通过酶法生产。稀少糖通常用作低脂低卡食品中高热量糖的替代品。此外，稀少糖被认为可以减缓消化后血糖水平的升高，从而抑制内脏脂肪的积累。在商业食品中，这种稀少糖的使用越来越受欢迎。本文使用SCION LC6000高效液相色谱仪开发了一种亲水作用液相色谱（HILIC）技术对L-核糖、D-阿洛酮糖、木糖醇、D-塔格糖、D-阿洛糖和L-葡萄糖进行检测和完全分离的方法。HILIC是一种利用极性固定相和流动相（包含水和更少极性的溶剂，如乙腈）的一定比例的色谱技术。结论：本文使用SCION（赛里安）L6000高效液相色谱仪开发了一种使用亲水作用液相色谱的稀少糖分析方法，配置RI检测器，在方法开发中，流动相优化对于分离结果产生了不同的影响，通过调整溶剂比例展示了微小的流动相成分变化可以带来显著的分离改进，最终对于所有目标化合物均得到了优秀的线性和分离效果。TTechcomp A P P L ICATI O N NO TE 基于HILIC模式的SCION(赛里安)LC6000高效液相色谱仪对稀少糖的测定 前言 稀少糖是自然界中数量较少的糖，可以通过酶法 生 产。稀少糖 通常用作低脂低卡食品中高热量糖的替代品。此外，稀少糖被 认为可以减缓消化后血糖水平的升高，从而抑制内脏脂肪的 积累。在商业食品中，这种稀少糖的使用越来越受欢迎。本文 使用 SCION LC6000 高效液相色谱仪开发了一种亲水作用液 相色谱(HILIC)技术对L -核 糖、D-阿洛酮糖、木糖醇、D-塔格糖、D-阿洛糖和L -葡萄糖进行检测和完全分离的方法。HILIC是一 种利用极性固定相和流动相(包含水和更少极性的溶剂，如乙 腈)的一定比例的色谱技术。 Author： 天美仪拓实验室设备(上海)有限公司色谱市场部 Abs tr ac t 本应用介绍了 SCION LC6000 利用液相色谱法对稀少糖的分析，方 法 中 使用HI L ICpak VG-50分析柱。HI L ICpak VG-50系列是一款适用 糖类和亲水性化合物分析的聚合基质氨基柱，实 验 中通 过 优化流动 相组成，显示了流动相对稀少糖的分离效果影响。 仪 器 采用包含以下模块的SCION(赛里安)LC6000高效液相色谱 仪系统： ·集成六通道 真 空脱气的SCION L C6100四元泵 ·SCION LC6210 高精度、低残留自动进样器 · SCION LC6310立式 柱 温箱 ·SCION LC6460 Rl示差检测器 液 相 色 谱条 件 表1.方法参数 色谱柱： 流动相1： 流动相2： 流动相3： HILICpak VG-50 250mm×4.6mm×5um 水/乙腈20：80 水/乙腈 15：85 水/乙腈/甲醇 5：75：20 标准品以水：乙腈(1：1)为溶剂稀释，浓度范围为0.01%至 0.5%。优化了三种不同的流动相组成，结果显示流动相优化 对于稀少糖分离至关重要。 结果 流动相1(水/乙腈20：80)分析0.5%稀少糖校准标准时获得的 色谱图，见图1。如图1所示，当流动相设置为20：80的水/乙腈 时，木糖醇和D-塔格糖没有分离，如峰3和4所示。 图 1 0.5%稀少糖在(水/乙 腈20：80)体系中的色谱图 然后，使 用(水/乙腈15：85)分析 相 同 的 校准标准品(0.5%)。通过增 加 乙 腈 的浓度分离木糖醇和D-塔格糖，分析获得 的 色 谱 图见图 2。通过增加乙腈与水的比例，木糖醇和D-塔格糖的 分离仅略有改善，但并 未 完全分离所有六种稀少糖。 图20.5%稀少糖在(水/乙 腈15：85)体系 中 的色谱图 进一 步调整流动 相 ，加入甲醇溶剂。最终组成 为 水/乙腈和甲 醇，浓度分 别 为5：75：20%，分析获得的色谱 图 见 图3。 图30.5%稀少糖在(水/乙 腈/甲 醇5：75：20)体系中 色 谱图 标准曲线 流动相加入甲醇成功地分离了所有六个目标化合物，对每个 目标分析物制作 了 校准曲线，图4显 示了 稀少糖的校准曲线。除了D -阿 洛酮糖，所有其他目标化合物的线性度均为 0.9999，D-阿 洛酮糖的R2值为0.9998。 图4稀少 糖 标 准 曲线 为了检验该方法在真实样品中的可行性，使用相同的方法 (水/乙腈 /甲醇 5：75：20)体系，分析 了一 种商业化稀少糖的糖 浆，参考标准中还包括果糖和 半乳 糖。 将0.1g糖浆加入一个含有2.5mL超纯水的试管 中 。搅拌溶解 后加入2.5mL HPLC级别的乙腈。轻轻摇动后，将混合物通过 0.45um的膜过滤。然后将5uL的样品注入LC6000高效液相 色谱仪，分析获得的色谱图见图5。通过比较 上 面两个色谱 图，可以看出使用(水/乙腈/甲醇5：75：20)体系可以成功地分 离稀少糖。 图 5糖浆色谱 图 本文使用SCION(赛里安)L6000高效液 相 色谱仪开发了一种 使用亲水作用液相色谱的稀少糖分析方法，配置RI检测器，在 方法开发中，流动 相 优化对于分离结果产生了不同的影响 ，通 过调整溶剂比例展示了微小 的 流动相成分变化可以带来显著 的分离改进，最终对于所有目标化合物均得到 了 优秀的线性 和分离效果。 为满足客户多方面样品分析需求，天美公司可提供从消耗品到进样系统全方位解决方案，如液体自动进样器、顶空进样器、多功能进样器、热解析仪、吹扫捕集浓缩仪等。 个Techcomp 天美仪拓实验室设备(上海)有限公司 Techcomp Instrument Co.，Ltd 区 techcomp@techcomp.cn 天美集团总部 北京分公司 全国免费服务热线 香港新界葵涌永得利广场1座2606 北京市朝阳区北苑路58号航空科技大厦1号楼4层 400-810-7898 \852-27519488 <010-64010651 www.techcomp.cn techcomp@techcomp.com.hk 区 techcomp@techcomp.cn www.techcomp.com.hk 天美仪拓实验室设备(上海)有限公司 广州分公司 口点 上海市松江新桥民益路201号16幢 广州市海珠区南边路38号保利1918产业园自编20号楼A218 二 021-67687200 、020-32644011