苦杏仁中苦杏仁苷的含量测定 高效液相色谱法

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一、 摘要本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定苦杏仁中苦杏仁苷的含量。色谱条件：色谱柱为C18 色谱柱（4.6×250mm，5μm），流速为1.0mL/min，柱温为25℃，进样量为10μL，检测波长为207nm。实验结果：苦杏仁苷的理论塔板数为9572；苦杏仁苷标准溶液连续进样7针，保留时间的RSD为0.130%，峰面积的RSD为0.709%；苦杏仁苷在测定浓度范围内具有良好的线性关系（R2=0.9997）；苦杏仁苷的仪器检出限为0.271μg/mL，仪器定量限为0.904μg/mL，满足《中国药典（2020年版）》中使用高效液相色谱法测定苦杏仁中苦杏仁苷含量的要求。二、 背景苦杏仁为蔷薇科植物山杏、西伯利亚杏、东北杏或杏的干燥成熟种子。夏季采收成熟果实，除去果肉和核壳，取出种子，晒干。苦杏仁的功能有降气止咳平喘，润肠通便，主治咳嗽气喘，胸满痰多，肠燥便秘。文档编号：LC-K2025-01-220312 苦杏仁中苦杏仁苷的含量测定高效液相色谱法 一、摘要 本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定苦杏仁中苦杏仁苷的含量。色谱条件：色谱 柱为C18色谱柱（4.6×250mm，5μm），流速为1.0mL/min，柱温为25℃，进样量为 10μL，检测波长为207nm。实验结果：苦杏仁苷的理论塔板数为9572；苦杏仁苷标准溶 液连续进样7针，保留时间的RSD为0.130%，峰面积的RSD为0.709%；苦杏仁苷在测 定浓度范围内具有良好的线性关系（R2=0.9997）；苦杏仁苷的仪器检出限为0.271μg/mL，仪器定量限为0.904μg/mL，满足《中国药典（2020年版）》中使用高效液相色谱法测定 苦杏仁中苦杏仁苷含量的要求。 二、背景 苦杏仁为蔷薇科植物山杏、西伯利亚杏、东北杏或杏的干燥成熟种子。夏季采收成熟果 实，除去果肉和核壳，取出种子，晒干。 苦杏仁的功能有降气止咳平喘，润肠通便，主治咳嗽气喘，胸满痰多，肠燥便秘。 三、实验过程 1范围 适用于苦杏仁中苦杏仁苷含量的测定。 2原理 *本报告仅供委托方进行科研、产品研发之目的使用。 *本报告有关的检测数据、结果不具有向委托方之外的任何主体、社会公众的证明、验证作用。 苦杏仁样品中的苦杏仁苷经甲醇超声提取后，采用HPLC反相色谱柱分离，使用紫外 检测器检测，外标法定量。 3试剂与材料 3.1水：符合GB/T6682的一级水； 3.2乙腈：色谱纯； 3.3磷酸：色谱纯； 3.4甲醇：色谱纯； 3.5甲醇溶液（50%）：吸取500mL的甲醇于1000mL的容量瓶中，用水稀释至刻度； 3.6苦杏仁苷标准品：CAS号：29883-15-6，纯度为98.6%；3.7苦杏仁苷标准储备液：称取适量的苦杏仁苷标准品（3.6）于10mL容量瓶中，用甲醇 溶解并稀释配成浓度为1.090mg/mL的标准储备液； 3.8苦杏仁苷标准工作液：分别吸取适量的苦杏仁苷标准储备液（3.7）至10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度依次为5.350μg/mL、10.700μg/mL、21.400μg/mL、42.800μg/mL、53.500μg/mL和64.200µg/mL的系列标准工作溶液； 3.9微孔滤膜：0.22µm，有机相。 4仪器与设备 4.1高效液相色谱仪：K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温 箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器、Wookinglab色谱工作站； 4.2分析天平：精确到0.0001g； *本报告仅供委托方进行科研、产品研发之目的使用。 *本报告有关的检测数据、结果不具有向委托方之外的任何主体、社会公众的证明、验证作用。 4.3涡旋振荡器； 4.4超声波清洗机； 4.5具塞锥形瓶：100mL； 4.6定量滤纸； 4.7容量瓶：10mL、50mL、1000mL，棕色带刻度。 5测定步骤 5.1样品处理 取苦杏仁约0.25g，精密称定，置于具塞锥形瓶（4.5）中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率50kHz）30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足 减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5mL，置于50mL容量瓶中，加甲醇溶液（3.5）稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 5.2色谱条件 a）色谱柱：C18色谱柱，4.6×250mm，5μm或者相当的色谱柱； b）流动相：乙腈：0.1%磷酸溶液=8:92； c）柱温：25℃； d）进样量：10μL； e）流速：1.0mL/min； f）检测器及波长：紫外检测器，检测波长为207nm。 6结果 *本报告仅供委托方进行科研、产品研发之目的使用。 *本报告有关的检测数据、结果不具有向委托方之外的任何主体、社会公众的证明、验证作用。 6.1重复性测试 按照上述色谱条件（5.2）进行采集，苦杏仁苷标准溶液（浓度为42.800µg/mL）的色 谱图如图1所示，积分结果如表1所示。 图1苦杏仁苷标准溶液的色谱图 表1苦杏仁苷标准溶液色谱图积分结果 目标物 保留时间 峰面积 峰高 理论塔板数 分离度 对称/拖尾因子 （min） （mAU.s） (mAU) 苦杏仁苷 29.867 379.181 8.283 9572 - 0.91 由表1中数据可知，苦杏仁苷的理论塔板数为9572，拖尾因子为0.91，满足《中国药 典（2020年版）》中规定的理论塔板数按苦杏仁苷峰计算应不低于7000的要求。 将苦杏仁苷标准溶液连续进样7针，叠加的色谱图如图2所示，结果见表2。 *本报告仅供委托方进行科研、产品研发之目的使用。 *本报告有关的检测数据、结果不具有向委托方之外的任何主体、社会公众的证明、验证作用。 图2苦杏仁苷标准溶液连续进样7针叠加的色谱图 表2苦杏仁苷标准溶液连续进样7针重复性数据统计 目标物 1 2 3 4 5 6 7 平均值 RSD% 苦杏仁苷 保留时间 29.867 29.833 29.877 29.825 29.772 29.845 29.787 29.829 0.130 峰面积 379.181 374.510 373.782 373.347 378.221 379.834 377.037 376.559 0.709 由表2中数据可知，苦杏仁苷标准溶液连续进样7针，保留时间的RSD为0.130%，峰面积的RSD为0.709%，具有良好的定性定量重复性。 6.2仪器灵敏度测试 灵敏度测试的谱图如图3所示，计算结果见表3。 *本报告仅供委托方进行科研、产品研发之目的使用。 *本报告有关的检测数据、结果不具有向委托方之外的任何主体、社会公众的证明、验证作用。 图3仪器灵敏度的色谱图 表3仪器灵敏度测试数据 目标物 浓度 峰高 噪声 S/N LOD LOQ (μg/mL) (mAU) (mAU) (μg/mL) (μg/mL) 苦杏仁苷 5.350 1.183 0.020 59.2 0.271 0.904 由表3中数据可知，苦杏仁苷的仪器检出限为0.271µg/mL，仪器定量限为0.904µg/mL。 6.3含量测定 6.3.1校准曲线 将配制好的苦杏仁苷标准工作液（3.8）在HPLC上进行测定，以浓度为横坐标，以峰 面积为纵坐标，绘制校准曲线，线性方程及相关系数见图4，叠加色谱图见图5。苦杏仁苷 在测定浓度范围内，曲线的确定系数R2达到0.9997，线性关系良好。 *本报告仅供委托方进行科研、产品研发之目的使用。 *本报告有关的检测数据、结果不具有向委托方之外的任何主体、社会公众的证明、验证作用。 图4苦杏仁苷标准溶液的校准曲线 图5苦杏仁苷标准溶液浓度系列叠加色谱图 6.3.2样品含量测定 选择苦杏仁作为样品，按照5.1的流程对其进行处理。依据公式（1）进行计算，样品 的色谱图如图6所示。 式中:X----为苦杏仁样品中苦杏仁苷的含量,单位为百分数(%); C----为通过校准曲线计算的样品中苦杏仁苷的浓度,单位为微克每毫升(ng/mL); *本报告仅供委托方进行科研、产品研发之目的使用。 *本报告有关的检测数据、结果不具有向委托方之外的任何主体、社会公众的证明、验证作用。 V----为样品的定容体积,单位为毫升(mL); m---为样品的质量,单位为克(g); 100、10°----为单位换算系数。 图6苦杏仁样品的色谱图 依据公式（1）进行计算，此苦杏仁样品中苦杏仁苷的含量为3.9%。 四、结论 通过对苦杏仁苷的理论塔板数、重复性、灵敏度、线性的测定以及对苦杏仁样品的测试，实验结果表明：用Wooking K2025高效液相色谱仪测定苦杏仁苷，苦杏仁苷的理论塔板 数为9572，拖尾因子为0.91，满足《中国药典（2020年版）》中规定的理论塔板数按苦杏 仁苷峰计应不低于7000的要求；苦杏仁苷标准溶液连续进样7针，保留时间的RSD为 0.130%，峰面积的RSD为0.709%，具有良好的定性定量重复性；苦杏仁苷在测定浓度范 围内具有良好的线性关系（R2=0.9997）；苦杏仁苷的仪器检出限为0.271μg/mL，仪器定 量限为0.904μg/mL。因此，Wooking K2025高效液相色谱仪满足《中国药典（2020年版）》8 *本报告仅供委托方进行科研、产品研发之目的使用。 *本报告有关的检测数据、结果不具有向委托方之外的任何主体、社会公众的证明、验证作用。 中对苦杏仁中苦杏仁苷含量测定的要求。 *本报告仅供委托方进行科研、产品研发之目的使用。 *本报告有关的检测数据、结果不具有向委托方之外的任何主体、社会公众的证明、验证作用。 附1：仪器配置清单 序号 单元 K2025二元高压梯度系统 A) Pump Unit泵单元 1 62Mpa二元高压输液泵（内置溶剂托盘） 2 流动相瓶（肖特瓶，1L） 3 脱气机 4 四通道溶剂切换阀 5 自动在线清洗系统 B) Sample Injector进样器 1 自动进样器 2 样品瓶（2mL，含瓶盖） 3 脱气组件 4 100μL定量环C) Column Oven柱温箱 1 色谱柱恒温箱（室温以下10℃至85℃） 2 色谱柱：Kromasil 100-5-C18，4.6×250mm，5µm D) Detector检测器 1 紫外-可见光检测器 E) Workstation工作站 1 Wookinglab（中文版） *本报告仅供委托方进行科研、产品研发之目的使用。 *本报告有关的检测数据、结果不具有向委托方之外的任何主体、社会公众的证明、验证作用。 附2：悟空Wooking K2025高效液相色谱仪（可靠、精准、友好、合规） 报告人：李彩红 联系方式：17710332265 *本报告仅供委托方进行科研、产品研发之目的使用。 *本报告有关的检测数据、结果不具有向委托方之外的任何主体、社会公众的证明、验证作用。 *本报告仅供委托方进行科研、产品研发之目的使用。 *本报告有关的检测数据、结果不具有向委托方之外的任何主体、社会公众的证明、验证作用。