采用高效液相色谱-串联质谱法分析陈皮中30种禁用农药

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前言中药是我国宝贵的文化遗产，在医学领域发挥着越来越重要的作用。随着需求量的不断增长，人工种植中药材越来越多，随之而来的农药残留不仅危害人体健康，也是制约中药走向国际市场的瓶颈，因此加强中药材中农药残留的监测具有重要意义。《中华人民共和国药典》（2020版）（简称ChP2020）四部通则中规定了33种禁用农药，其中30种采用高效液相色谱-串联质谱法测定。按照化学结构，其可被分为有机磷类、有机氯类和氨基甲酸酯类。有机磷类农药是一种含磷的广谱性杀虫剂，甲胺磷、甲拌磷、水胺硫磷等均为常见的有机磷类农药，具有不稳定、易分解、残留期短的性质，大多数有机磷类农药都有剧毒。有机氯类农药是一种广谱性杀虫剂，常见的有六六六、滴滴涕，该类农药的特点是稳定性好、不易降解，且会通过生物链富集在动植物体内，危害人类健康及环境安全。氨基甲酸酯类农药是在有机磷酸酯类之后发展起来的合成农药，是一类具有高效、易分解、残留期短特点的广谱性农药，应用于作物杀虫、杀螨、除草等，克百威、涕灭威是常用的氨基甲酸酯类农药，此类农药在空气和阳光下易分解，土壤中的半衰期较短，毒性较有机磷酸酯类低。本文参考《中国药典》（2020版）四部通则中 《药材及饮片（植物类）中禁用农药多残留测定法 高效液相色谱-串联质谱法》，使用超高效液相色谱质谱联用仪进行陈皮中30种禁用农药分析，通过定量限、精密度和准确度等指标评估仪器性能，证明LC-TQ 5200满足中药材中农药残留检测的需要。实验部分试剂、材料超纯水:屈臣氏纯净水        乙腈: 色谱级甲酸: LC-MS级甲酸铵：色谱级dSPE萃取包：6g MgSO4，1.5g NaOACdSPE净化管：900mg MgSO4，300mg PSA300mg C18，90mg GCB，300mg Si标准物质溶液（乙腈）：不同浓度的30种禁用农药混标。仪器和设备液相色谱质谱联用仪：LC-TQ 5200（禾信）注射泵：LSP01-2A（LongerPump）；涡旋振荡仪：XH-B（江苏天翎）；超声波清洗器：JP-010T（深圳洁盟）；移液器：Eppendorf （艾本德）；分析天平：d=0.1mg（Sartorius）试剂配制1. 混合标准物质工作溶液：移取适量30种禁用农药混标，用乙腈配制成合适浓度的混合标准物质工作溶液，密封，0~4℃保存。样品前处理取供试品粉末3g，精密称定，置50mL聚苯乙烯具塞离心管中，精密加入乙腈15mL，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡（500次/分）5分钟，加入dSPE萃取包，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡（500次/分）3分钟，于冰浴中冷却10分钟，离心（每分钟4000转）5分钟，取上清液9mL，置预先装有净化材料的dSPE净化管中，涡旋使充分混匀，置振荡器上剧烈振荡（500次/分）5分钟使净化完全，离心（每分钟4000转）5分钟，精密吸取上清液5mL，置氮吹仪上于40℃水浴浓缩至约0.4mL，加乙腈稀释至1.0mL，涡旋混匀，过滤，取过滤液，供上机检测。仪器条件                 表1. 仪器方法参数模块参数值色谱色谱柱Waters ACQUITY UPLC HSS T3（100×2.1mm,1.8μm）柱温35℃流动相A相：0.1%甲酸⽔溶液（含5mM甲酸铵）B相：乙腈-0.1%甲酸水溶液（5mM甲酸铵）（95:5）流速0.3 mL/min进样量5 μL洗脱梯度洗脱,梯度洗脱条件见表2采集时间15 min质谱离子源ESI+检测模式多反应监测（MRM）碰撞气0.35 mL/min气帘气3 L/min雾化气280 kPa干燥气8 L/min 喷雾电压5500 V干燥气温度500 ℃表2. 梯度洗脱条件时间(min)流动相A(%)流动相B(%)070301703010010012010012.57030157030结果与讨论                          1、标准谱图和物质信息30种目标物总离子流图见图1。具体浓度可见表4中的S9。空白基质总离子流图见图2，30种目标物的MRM色谱图见图3。30种目标物的定性、定量离子对以及具体质谱参数见表3。图1  30种禁用农药标准溶液总离子流图图2 空白基质总离子流图 图3 30种禁用农药陈皮加标样品（S9）的MRM色谱图表3. 30种目标物的定性、定量离子对和保留时间、碰撞能量条件序号⽬标物CASRT(min)定量离⼦对定性离⼦对DP(V)EP(V)CE(V)CXP(V)1甲胺磷10265-92-60.976141.9/94141.9/943519301141.9/12535192512苯线磷22224-92-67.015304/216.9304/216.92529351304/233.930215013苯线磷砜31972-44-84.676336/187.8336/187.84540152336/265.935302014苯线磷亚砜31972-43-73.576320/171320/1718031401320/29280212515地虫硫磷944-22-98.939247/109247/1092526402247/136.930173516治螟磷3689-24-58.962323/170.9323/170.94036251323/11540192517克百威1563-66-24.976222/165222/1652527201222/122.8251725183-羟基克百威16655-82-62.226238/180.9238/180.92021201238/162.925143019胺苯磺隆97780-06-85.297411/196411/1961039251411/167.8102435110甲磺隆74223-64-64.68382/166.8382/166.81525203382/198.8152720211氯磺隆64902-72-35.036358/140.9358/140.920274611358/166.82027461312硫线磷95465-99-98.82271/97271/971044251271/158.9202060113氯唑磷42509-80-88.226314/120314/120252151314/162203520114甲拌磷298-02-29.097260.9/75260.9/7501715315甲拌磷亚砜2513545.251277/96.8277/96.83543301277/142.8102630116甲拌磷砜2513866.556293/170.9293/170.9253251293/114.9101515117蝇毒磷56-72-48.867362.9/227362.9/2274036351362.9/306.9402520118硫环磷947-02-43.101255.9/139.9255.9/139.93530451255.9/167.8252130119磷胺13171-21-63.751300/173.9300/173.91027351300/126.9401825220涕灭威116-06-33.826213/89213/89021251213/115.951540121涕灭威砜1646-88-41.376240/86240/863026351240/22330115122涕灭威亚砜1646-87-31.026207/131.9207/131.93520101207/89351010123久效磷6923-22-41.226224/126.9224/126.91520151224/192.915115124内吸磷126-75-0/298-03-36.057259.1/61.1259.1/61.12047352259.1/89.2202160225灭线磷13194-48-47.324243.1/96.8243.1/96.83039252243.1/130.9202825126特丁硫磷砜56070-16-77.435321/96.9321/96.91054151321/170.951370127特丁硫磷亚砜10548-10-46.366305/96.8305/96.83058202305/186.9201545228水胺硫磷24353-61-56.556312/269.9312/269.91520351312/235.952035129杀虫脒6164-98-31.701197/45.9197/45.94041501197/116.9454050130甲基异柳磷99675-03-38.836332/230.7332/230.7521151332/272.9571012、标准曲线平行取若干份3g陈皮样品，添加混合标准工作溶液，样品具体加标浓度见表4，经样品前处理后进行分析。30种目标物的线性相关系数R2结果见下表5，均大于0.990，满足标准的要求。表4. 30种目标物的加标浓度点编号中文名线性浓度点（μg/kg）S1S2S3S4S5S6S7S8S9S10S11S12S131 甲胺磷0.10 1.00 2.50 5.00 10.00 25.00 50.00 125.00 250.00 500.00 625.00 1000.00 1250.00 2 苯线磷0.04 0.40 1.00 2.00 4.00 10.00 20.00 50.00 100.00 200.00 250.00 400.00 500.00 3 苯线磷砜0.04 0.40 1.00 2.01 4.01 10.03 20.05 50.13 100.25 200.50 250.63 401.00 501.25 4 苯线磷亚砜0.04 0.40 1.00 2.00 3.99 9.98 19.95 49.88 99.75 199.50 249.38 399.00 498.75 5 地虫硫磷0.04 0.40 1.00 2.01 4.01 10.03 20.05 50.13 100.25 200.50 250.63 401.00 501.25 6 治螟磷0.04 0.40 1.00 2.00 3.99 9.98 19.95 49.88 99.75 199.50 249.38 399.00 498.75 7 克百威0.10 1.00 2.50 5.00 9.99 24.98 49.95 124.88 249.75 499.50 624.38 999.00 1248.75 8 3-羟基克百威0.10 1.00 2.50 5.00 10.00 25.00 50.00 125.00 250.00 500.00 625.00 1000.00 1250.00 9 胺苯磺隆0.10 1.00 2.50 5.00 9.99 24.98 49.95 124.88 249.75 499.50 624.38 999.00 1248.75 10 甲磺隆0.10 1.00 2.51 5.01 10.02 25.05 50.10 125.25 250.50 501.00 626.25 1002.00 1252.50 11 氯磺隆0.10 1.00 2.50 5.01 10.01 25.03 50.05 125.13 250.25 500.50 625.63 1001.00 1251.25 12 硫线磷0.04 0.40 1.01 2.02 4.03 10.08 20.15 50.38 100.75 201.50 251.88 403.00 503.75 13 氯唑磷0.02 0.20 0.50 1.01 2.01 5.03 10.05 25.13 50.25 100.50 125.63 201.00 251.25 14 甲拌磷0.04 0.40 1.01 2.02 4.03 10.08 20.15 50.38 100.75 201.50 251.88 403.00 503.75 15 甲拌磷亚砜0.04 0.40 1.01 2.02 4.03 10.08 20.15 50.38 100.75 201.50 251.88 403.00 503.75 16 甲拌磷砜0.04 0.40 1.01 2.02 4.03 10.08 20.15 50.38 100.75 201.50 251.88 403.00 503.75 17 蝇毒磷0.10 1.00 2.50 5.00 10.00 25.00 50.00 125.00 250.00 500.00 625.00 1000.00 1250.00 18 硫环磷0.06 0.60 1.50 3.01 6.01 15.03 30.05 75.13 150.25 300.50 375.63 601.00 751.25 19 磷胺0.10 1.00 2.50 5.00 10.00 25.00 50.00 125.00 250.00 500.00 625.00 1000.00 1250.00 20 涕灭威0.20 2.00 5.01 10.01 20.02 50.05 100.10 250.25 500.50 1001.00 1251.25 2002.00 2502.50 21 涕灭威砜0.20 2.00 5.00 10.00 20.00 50.00 100.00 250.00 500.00 1000.00 1250.00 2000.00 2500.00 22 涕灭威亚砜0.20 2.00 5.00 10.00 19.99 49.98 99.95 249.88 499.75 999.50 1249.38 1999.00 2498.75 23 久效磷0.06 0.60 1.50 3.00 5.99 14.98 29.95 74.88 149.75 299.50 374.38 599.00 748.75 24 内吸磷0.02 0.20 0.51 1.01 2.02 5.05 10.10 25.25 50.50 101.00 126.25 202.00 252.50 25 灭线磷0.04 0.40 1.00 2.00 4.00 10.00 20.00 50.00 100.00 200.00 250.00 400.00 500.00 26 特丁硫磷砜0.04 0.40 1.01 2.01 4.02 10.05 20.10 50.25 100.50 201.00 251.25 402.00 502.50 27 特丁硫磷亚砜0.04 0.40 1.01 2.02 4.03 10.08 20.15 50.38 100.75 201.50 251.88 403.00 503.75 28 水胺硫磷0.10 1.00 2.51 5.01 10.02 25.05 50.10 125.25 250.50 501.00 626.25 1002.00 1252.50 29 杀虫脒0.04 0.40 1.00 2.00 4.00 10.00 20.00 50.00 100.00 200.00 250.00 400.00 500.00 30 甲基异柳磷0.04 0.40 1.00 2.01 4.01 10.03 20.05 50.13 100.25 200.50 250.63 401.00 501.25 （a）  (b) (c) 图4 3种目标物标准曲线图：（a）苯线磷，(b) 地虫硫磷，(c) 克百威表5.  30种目标物的标准曲线线性相关系数序号化合物线性方程线性相关系数R2线性范围（μg/kg）1甲胺磷y = 24187x + 1799240.99162.5-2502苯线磷y = 34622x + 234990.99960.4-503苯线磷砜y = 26805x + 602320.99680.4-1004苯线磷亚砜y = 47723x + 1660060.99710.4-1005地虫硫磷y = 27633x + 463720.99970.4-1006治螟磷y = 48680x + 806380.99980.4-1007克百威y = 71420x + 3628270.99761-25083-羟基克百威y = 21348x + 815390.99851-2509胺苯磺隆y = 1798.5x + 1665.10.99992.5-125010甲磺隆y = 868.97x + 6158.20.99715-125011氯磺隆y = 65.35x + 149.040.993350-125012硫线磷y = 152281x + 4092770.9960.4-10013氯唑磷y = 149978x + 1075680.9990.2-5014甲拌磷y = 2694.8x + 512390.99674-40015甲拌磷亚砜y = 47443x + 1230640.99841-10016甲拌磷砜y = 1811.9x + 394980.99784-50017蝇毒磷y = 4715.5x + 267080.99932.5-25018硫环磷y = 264314x + 4607080.99490.06-7519磷胺y = 162749x + 6307730.99240.1-12520涕灭威y = 2954.9x + 125230.99952-50021涕灭威砜y = 42862x + 3543490.99342-25022涕灭威亚砜y = 2536.3x + 7322.30.99985-50023久效磷y = 86683x + 2450350.9980.6-15024内吸磷y = 1695.6x + 127120.99752-25025灭线磷y = 107923x + 2993050.99810.4-10026特丁硫磷砜y = 3541.7x + 561250.99732-50027特丁硫磷亚砜y = 7221.2x - 5479.80.99792-50028水胺硫磷y = 550.23x + 205460.99174-50029杀虫脒y = 90074x + 769900.99951-10030甲基异柳磷y = 48.666x + 297.090.995620-5003、陈皮样品加标回收实验3.1 精密度取3g陈皮样品，对30种目标物分别进行三个浓度（部分加标浓度点为S3，S6，S8；部分为S8，S10，S12）加标实验，每个样品测量6次，对精密度进行评估，结果详见下表6。在低中高三个加标浓度水平下陈皮样品中30种禁用农药的相对标准偏差RSD分别为2.68%~19.20%、1.81%~19.27%和1.05%~18.28%。精密度RSD水平满足实验室内分析检测要求。表6.  30种目标物陈皮样品加标精密度序号化合物加标浓度点S3(S8)S6(S10)S8(S12)1甲胺磷8.81%1.81%4.26%2苯线磷9.43%3.20%3.04%3苯线磷砜13.24%7.42%5.47%4苯线磷亚砜9.63%4.90%6.99%5地虫硫磷2.68%5.91%3.53%6治螟磷10.71%4.73%6.38%7克百威3.68%3.52%4.11%83-羟基克百威4.07%5.48%5.32%9胺苯磺隆4.61%3.02%4.83%10甲磺隆5.24%4.42%9.31%11氯磺隆6.84%10.87%4.54%12硫线磷2.68%5.91%3.53%13氯唑磷4.29%5.14%2.87%14甲拌磷14.51%14.66%7.33%15甲拌磷亚砜4.97%4.62%2.85%16甲拌磷砜7.94%12.33%7.24%17蝇毒磷3.78%4.64%4.38%18硫环磷5.12%4.04%3.62%19磷胺8.54%8.07%1.92%20涕灭威11.64%3.84%2.34%21涕灭威砜7.75%8.89%3.12%22涕灭威亚砜9.07%15.04%3.48%23久效磷3.99%3.33%3.87%24内吸磷3.83%4.92%7.32%25灭线磷4.22%3.18%2.79%26特丁硫磷砜12.37%18.20%13.21%27特丁硫磷亚砜9.76%5.79%18.28%28水胺硫磷5.63%10.02%8.25%29杀虫脒8.83%7.88%1.05%30甲基异柳磷19.20%19.27%12.55%3.2 准确度对3g陈皮样品加标低中高三个浓度（部分加标浓度点为S3，S6，S8；部分为S8，S10，S12）的回收率进行评估，结果详见下表7。在低中高三个加标浓度水平下陈皮样品中30种禁用农药的回收率分别为74.3%~108.8%、77.0%~107.7%和77.1%~110.4%，回收率结果满足实验室内分析检测要求。表7.  30种目标物陈皮样品加标回收率序号化合物加标浓度点S3(S8)S6(S10)S8(S12)1甲胺磷97.6%107.4%91.1%2苯线磷97.6%77.0%88.0%3苯线磷砜95.0%78.7%87.2%4苯线磷亚砜105.5%87.2%93.8%5地虫硫磷104.9%100.4%96.0%6治螟磷104.5%88.5%89.4%7克百威95.6%107.6%110.4%83-羟基克百威100.7%90.0%91.3%9胺苯磺隆91.5%103.3%91.2%10甲磺隆74.3%107.2%85.1%11氯磺隆108.8%87.2%96.4%12硫线磷104.9%100.4%96.0%13氯唑磷99.1%79.8%81.2%14甲拌磷93.5%94.0%89.5%15甲拌磷亚砜103.0%95.3%106.3%16甲拌磷砜91.5%98.9%96.9%17蝇毒磷89.8%100.2%103.8%18硫环磷105.6%107.3%87.8%19磷胺99.7%104.1%89.0%20涕灭威81.8%96.8%94.0%21涕灭威砜93.6%107.7%91.3%22涕灭威亚砜89.6%105.5%104.8%23久效磷91.3%104.0%93.3%24内吸磷100.2%83.4%81.3%25灭线磷105.4%104.2%105.6%26特丁硫磷砜83.4%91.3%98.1%27特丁硫磷亚砜95.2%78.0%88.9%28水胺硫磷77.7%94.0%97.1%29杀虫脒88.5%104.5%77.1%30甲基异柳磷100.0%77.3%103.1%3.3 定量限比较了采用LC-TQ 5200实测的方法定量限与标准方法定量限。从下表8可知，实测方法定量限范围为0.00006 mg/kg ~0.05 mg/kg，所有目标物定量限均满足《中国药典》（2020版）四部通则0212的药材和饮片检定通则中禁用农药标准要求。表8. 30种目标物方法定量限与标准限值信息表序号化合物方法定量限（mg/kg）标准方法定量限（mg/kg）1甲胺磷0.00250.052苯线磷0.00040.023苯线磷砜0.00040.024苯线磷亚砜0.00040.025地虫硫磷0.00040.026治螟磷0.00040.027克百威0.0010.0583-羟基克百威0.0010.059胺苯磺隆0.00250.0510甲磺隆0.0050.0511氯磺隆0.050.0512硫线磷0.00040.0213氯唑磷0.00020.0114甲拌磷0.0040.0215甲拌磷亚砜0.0010.0216甲拌磷砜0.0040.0217蝇毒磷0.00250.0518硫环磷0.000060.0319磷胺0.00010.0520涕灭威0.0020.121涕灭威砜0.0020.122涕灭威亚砜0.0050.123久效磷0.00060.0324内吸磷0.0020.0225灭线磷0.00040.0226特丁硫磷砜0.0020.0227特丁硫磷亚砜0.0020.0228水胺硫磷0.0040.0529杀虫脒0.0010.0230甲基异柳磷0.020.02结论本文依据《中国药典》（2020版）四部通则中 《药材及饮片（植物类）中禁用农药多残留测定法 高效液相色谱-串联质谱法》，采用禾信LC-TQ 5200分析了陈皮中30种禁用农药。实验结果表明：30种禁用农药的线性相关系数R2均大于0.990，符合标准要求；陈皮样品加标精密度RSD在1.05%~19.27%范围，精密度RSD水平满足实验室内分析检测要求；陈皮样品加标回收率在74.3%~110.4%范围，回收率结果满足实验室内分析检测要求。目标物方法定量限在0.00006 mg/kg ~0.05 mg/kg范围内，显著优于《中国药典》（2020版）四部通则中要求的0.01~0.1 mg/kg。上述结果表明禾信LC-TQ 5200具有优异的重现性和检测灵敏度，满足标准要求。参考文献1. 《中国药典》（2020版）四部通则 药材及饮片（植物类）中禁用农药多残留测定法 高效液相色谱-串联质谱法禾信质谱 股票代码HEXIN MASS SPECTROMETRY688622 山 LAN 3M LC-TQ5200 ●//// 官方公众号 采用高效液相色谱 -串联质谱法分析 陈皮中 30种禁用农药 前言 中药是我国宝贵的文化遗产，在医学 领域发挥着越来越重要的作用。随着需求 量的不断增长，人工种植中药材越来越多，随之而来的农药残留不仅危害人体健康，也是制约中药走向国际市场的瓶颈，因此 加强中药材中农药残留的监测具有重要 意义。《中华人民共和国药典》（2020版）（简称 ChP2020）四部通则中规定了 33种禁用农药，其中 30种采用高效液相色 谱 -串联质谱法测定。按照化学结构，其可 被分为有机磷类、有机氯类和氨基甲酸酯 类。有机磷类农药是一种含磷的广谱性杀 虫剂，甲胺磷、甲拌磷、水胺硫磷等均为 常见的有机磷类农药，具有不稳定、易分 解、残留期短的性质，大多数有机磷类农 药都有剧毒。有机氯类农药是一种广谱性 杀虫剂，常见的有六六六、滴滴涕，该类 农药的特点是稳定性好、不易降解，且会 通过生物链富集在动植物体内，危害人类 健康及环境安全。氨基甲酸酯类农药是在 有机磷酸酯类之后发展起来的合成农药，是一类具有高效、易分解、残留期短特点 的广谱性农药，应用于作物杀虫、杀螨、除草等，克百威、涕灭威是常用的氨基甲 酸酯类农药，此类农药在空气和阳光下易 分解，土壤中的半衰期较短，毒性较有机 磷酸酯类低。 本文参考《中国药典》（2020版）四 部通则中《药材及饮片（植物类）中禁 用农药多残留测定法高效液相色谱 -串 联质谱法》，使用超高效液相色谱质谱联 用仪进行陈皮中 30种禁用农药分析，通 过定量限、精密度和准确度等指标评估仪 器性能，证明 LC-TQ 5200满足中药材中 农药残留检测的需要。 实验部分 试剂、材料 超纯水 :屈臣氏纯净水 乙腈 :色谱级 甲酸 : LC-MS 级 甲酸铵：色谱级 dSPE 萃取包：6g MgSO4，1.5g NaOAC dSPE 净化管：900mg MgSO4，300mg PSA300mg C18，90mg GCB ，300mg Si 标准物质溶液（乙腈）：不同浓度的 30种 禁用农药混标。 仪器和设备 液相色谱质谱联用仪：LC-TQ 5200（禾信）注射泵：LSP01-2A （LongerPump ）； 涡旋振荡仪：XH-B （江苏天翎）； 超声波清洗器：JP-010T （深圳洁盟）； 移液器：Eppendorf （艾本德）； 分析天平：d=0.1mg （Sartorius ） 试剂配制 1. 混合标准物质工作溶液： 移取适量 30种禁用农药混标，用乙腈 配制成合适浓度的混合标准物质工作溶液，密封，0~4℃保存。 样品前处理 取供试品粉末 3g ，精密称定，置 50mL 聚苯乙烯具塞离心管中，精密加入乙腈 15mL ，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡 （500次 /分）5分钟，加入 dSPE 萃取包，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡（500次 /分）3分钟，于冰浴中冷却 10分钟，离心 （每分钟 4000转）5分钟，取上清液 9mL ，置预先装有净化材料的 dSPE 净化管中，涡旋使充分混匀，置振荡器上剧烈振荡 （500次 /分）5分钟使净化完全，离心（每 分钟 4000转）5分钟，精密吸取上清液 5mL ，置氮吹仪上于 40℃水浴浓缩至约 0.4mL ，加乙腈稀释至 1.0mL ，涡旋混匀，过滤，取过滤液，供上机检测。 仪器条件 表 1. 仪器方法参数 模块 参数 值 色谱 色谱柱 Waters ACQUITY UPLC HSS T3（100×2.1mm,1.8μm） 柱温 35℃ 流动相 A相：0.1%甲酸⽔溶液（含 5mM甲酸铵） B相：乙腈-0.1%甲酸水溶液（5mM甲酸铵）（95:5） 流速 0.3 mL/min 进样量 5 μL 洗脱 梯度洗脱,梯度洗脱条件见表 2 采集时间 15 min 质谱 离子源 ESI+ 检测模式 多反应监测（MRM） 碰撞气 0.35 mL/min 气帘气 3 L/min 雾化气 280 kPa 8 L/min 喷雾电压 5500 V 干燥气温度 500 ℃ 表 2.梯度洗脱条件 时间(min) 流动相A(%) 流动相B(%) 0 70 30 1 70 30 10 0 100 12 0 100 12.5 70 30 15 70 30 结果与讨论 1、标准谱图和物质信息 30种目标物总离子流图见图 1。具体浓度可见表 4中的 S9。空白基质总离子流图见图 2，30种目标物的 MRM 色谱图见图 3。30种目标物的定性、定量离子对以及具体质谱参数见表 3。 图 1 30种禁用农药标准溶液总离子流图 图 2 空白基质总离子流图 图 3 30种禁用农药陈皮加标样品（S9）的 MRM 色谱图 表 3. 30种目标物的定性、定量离子对和保留时间、碰撞能量条件 序号 ⽬标物 CAS RT(min) 定量 定性 DP EP CE CXP 离⼦对 离⼦对 (V) (V) (V) (V) 1 甲胺磷 10265-92-6 0.976 141.9/94 141.9/94 35 19 30 1 141.9/125 35 19 25 1 2 苯线磷 22224-92-6 7.015 304/216.9 304/216.9 25 29 35 1 304/233.9 30 21 50 1 3 苯线磷砜 31972-44-8 4.676 336/187.8 336/187.8 45 40 15 2 336/265.9 35 30 20 1 4 苯线磷亚砜 31972-43-7 3.576 320/171 320/171 80 31 40 1 320/292 80 21 25 1 5 地虫硫磷 944-22-9 8.939 247/109 247/109 25 26 40 2 247/136.9 30 17 35 1 6 治螟磷 3689-24-5 8.962 323/170.9 323/170.9 40 36 25 1 323/115 40 19 25 1 7 克百威 1563-66-2 4.976 222/165 222/165 25 27 20 1 8 222/122.8 25 17 25 1 3-羟基克百 16655-82-6 2.226 238/180.9 238/180.9 20 21 20 1 威 238/162.9 25 14 30 1 411/196 10 39 25 1 9 胺苯磺隆 97780-06-8 5.297 411/196 411/167.8 10 24 35 1 10 甲磺隆 74223-64-6 4.68 382/166.8 382/166.8 15 25 20 3 382/198.8 15 27 20 2 11 氯磺隆 64902-72-3 5.036 358/140.9 358/140.9 20 27 46 11 358/166.8 20 27 46 13 12 硫线磷 95465-99-9 8.82 271/97 271/97 10 44 25 1 271/158.9 20 20 60 1 13 氯唑磷 42509-80-8 8.226 314/120 314/120 25 21 5 1 314/162 20 35 20 1 14 甲拌磷 298-02-2 9.097 260.9/75 260.9/75 0 17 15 3 15 甲拌磷亚砜 251354 5.251 277/96.8 277/96.8 35 43 30 1 277/142.8 10 26 30 1 16 甲拌磷砜 251386 6.556 293/170.9 293/170.9 25 32 5 1 293/114.9 10 15 15 1 17 蝇毒磷 56-72-4 8.867 362.9/227 362.9/227 40 36 35 1 362.9/306.9 40 25 20 1 255.9/139.9 35 30 45 1 18 硫环磷 947-02-4 3.101 255.9/139.9 255.9/167.8 25 21 30 1 第 6页共 13页 序号 ⽬标物 CAS RT(min) 定量 定性 DP EP CE CXP 离⼦对 离⼦对 (V) (V) (V) (V) 19 磷胺 13171-21-6 3.751 300/173.9 300/173.9 300/126.9 10 40 27 18 35 25 1 2 20 涕灭威 116-06-3 3.826 213/89 213/89 0 21 25 1 213/115.9 5 15 40 1 21 涕灭威砜 1646-88-4 1.376 240/86 240/86 30 26 35 1 240/223 30 11 5 1 22 涕灭威亚砜 1646-87-3 1.026 207/131.9 207/131.9 35 20 10 1 207/89 35 10 10 1 23 久效磷 6923-22-4 1.226 224/126.9 224/126.9 15 20 15 1 224/192.9 15 11 5 1 24 内吸磷 126-75-0/298-03-3 6.057 259.1/61.1 259.1/61.1 259.1/89.2 20 20 47 21 35 60 2 2 25 灭线磷 13194-48-4 7.324 243.1/96.8 243.1/96.8 30 39 25 2 243.1/130.9 20 28 25 1 26 特丁硫磷砜 56070-16-7 7.435 321/96.9 321/96.9 10 54 15 1 321/170.9 5 13 70 1 27 特丁硫磷亚 10548-10-4 6.366 305/96.8 305/96.8 30 58 20 2 砜 305/186.9 20 15 45 2 28 水胺硫磷 24353-61-5 6.556 312/269.9 312/269.9 15 20 35 1 312/235.9 5 20 35 1 29 杀虫脒 6164-98-3 1.701 197/45.9 197/45.9 40 41 50 1 197/116.9 45 40 50 1 30 甲基异柳磷 99675-03-3 8.836 332/230.7 332/230.7 5 21 15 1 332/272.9 5 7 10 1 2、标准曲线 平行取若干份 3g 陈皮样品，添加混合标准工作溶液，样品具体加标浓度见表 4，经样 品前处理后进行分析。30种目标物的线性相关系数 R2结果见下表 5，均大于 0.990，满足 标准的要求。 表 4. 30种目标物的加标浓度点 编号 中文名 线性浓度点（μg/kg） S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 1 甲胺磷 0.10 1.00 2.50 5.00 10.00 25.00 50.00 125.00 250.00 500.00 625.00 1000.00 1250.00 2 苯线磷 0.04 0.40 1.00 2.00 4.00 10.00 20.00 50.00 100.00 200.00 250.00 400.00 500.00 3 苯线磷砜 0.04 0.40 1.00 2.01 4.01 10.03 20.05 50.13 100.25 200.50 250.63 401.00 501.25 4 苯线磷亚砜 0.04 0.40 1.00 2.00 3.99 9.98 19.95 49.88 99.75 199.50 249.38 399.00 498.75 5 地虫硫磷 0.04 0.40 1.00 2.01 4.01 10.03 20.05 50.13 100.25 200.50 250.63 401.00 501.25 6 治螟磷 0.04 0.40 1.00 2.00 3.99 9.98 19.95 49.88 99.75 199.50 249.38 399.00 498.75 7 克百威 0.10 1.00 2.50 5.00 9.99 24.98 49.95 124.88 249.75 499.50 624.38 999.00 1248.75 8 3-羟基克百威 0.10 1.00 2.50 5.00 10.00 25.00 50.00 125.00 250.00 500.00 625.00 1000.00 1250.00 9 胺苯磺隆 0.10 1.00 2.50 5.00 9.99 24.98 49.95 124.88 249.75 499.50 624.38 999.00 1248.75 10 甲磺隆 0.10 1.00 2.51 5.01 10.02 25.05 50.10 125.25 250.50 501.00 626.25 1002.00 1252.50 11 氯磺隆 0.10 1.00 2.50 5.01 10.01 25.03 50.05 125.13 250.25 500.50 625.63 1001.00 1251.25 12 硫线磷 0.04 0.40 1.01 2.02 4.03 10.08 20.15 50.38 100.75 201.50 251.88 403.00 503.75 13 氯唑磷 0.02 0.20 0.50 1.01 2.01 5.03 10.05 25.13 50.25 100.50 125.63 201.00 251.25 14 甲拌磷 0.04 0.40 1.01 2.02 4.03 10.08 20.15 50.38 100.75 201.50 251.88 403.00 503.75 15 甲拌磷亚砜 0.04 0.40 1.01 2.02 4.03 10.08 20.15 50.38 100.75 201.50 251.88 403.00 503.75 16 甲拌磷砜 0.04 0.40 1.01 2.02 4.03 10.08 20.15 50.38 100.75 201.50 251.88 403.00 503.75 17 蝇毒磷 0.10 1.00 2.50 5.00 10.00 25.00 50.00 125.00 250.00 500.00 625.00 1000.00 1250.00 18 硫环磷 0.06 0.60 1.50 3.01 6.01 15.03 30.05 75.13 150.25 300.50 375.63 601.00 751.25 19 磷胺 0.10 1.00 2.50 5.00 10.00 25.00 50.00 125.00 250.00 500.00 625.00 1000.00 1250.00 20 涕灭威 0.20 2.00 5.01 10.01 20.02 50.05 100.10 250.25 500.50 1001.00 1251.25 2002.00 2502.50 21 涕灭威砜 0.20 2.00 5.00 10.00 20.00 50.00 100.00 250.00 500.00 1000.00 1250.00 2000.00 2500.00 22 涕灭威亚砜 0.20 2.00 5.00 10.00 19.99 49.98 99.95 249.88 499.75 999.50 1249.38 1999.00 2498.75 23 久效磷 0.06 0.60 1.50 3.00 5.99 14.98 29.95 74.88 149.75 299.50 374.38 599.00 748.75 24 内吸磷 0.02 0.20 0.51 1.01 2.02 5.05 10.10 25.25 50.50 101.00 126.25 202.00 252.50 25 灭线磷 0.04 0.40 1.00 2.00 4.00 10.00 20.00 50.00 100.00 200.00 250.00 400.00 500.00 26 特丁硫磷砜 0.04 0.40 1.01 2.01 4.02 10.05 20.10 50.25 100.50 201.00 251.25 402.00 502.50 27 特丁硫磷亚砜 0.04 0.40 1.01 2.02 4.03 10.08 20.15 50.38 100.75 201.50 251.88 403.00 503.75 28 水胺硫磷 0.10 1.00 2.51 5.01 10.02 25.05 50.10 125.25 250.50 501.00 626.25 1002.00 1252.50 29 杀虫脒 0.04 0.40 1.00 2.00 4.00 10.00 20.00 50.00 100.00 200.00 250.00 400.00 500.00 30 甲基异柳磷 0.04 0.40 1.00 2.01 4.01 10.03 20.05 50.13 100.25 200.50 250.63 401.00 501.25 （a ） (b) (c) 图 4 3种目标物标准曲线图：（a ）苯线磷，(b)地虫硫磷，(c)克百威 表 5. 30种目标物的标准曲线线性相关系数 序号 化合物 线性方程 线性相关系数R2 线性范围（μg/kg） 1 甲胺磷 y = 24187x + 179924 0.9916 2.5-250 2 苯线磷 y = 34622x + 23499 0.9996 0.4-50 3 苯线磷砜 y = 26805x + 60232 0.9968 0.4-100 4 苯线磷亚砜 y = 47723x + 166006 0.9971 0.4-100 5 地虫硫磷 y = 27633x + 46372 0.9997 0.4-100 6 治螟磷 y = 48680x + 80638 0.9998 0.4-100 7 克百威 y = 71420x + 362827 0.9976 1-250 8 3-羟基克百威 y = 21348x + 81539 0.9985 1-250 9 胺苯磺隆 y = 1798.5x + 1665.1 0.9999 2.5-1250 10 甲磺隆 y = 868.97x + 6158.2 0.9971 5-1250 11 氯磺隆 y = 65.35x + 149.04 0.9933 50-1250 12 硫线磷 y = 152281x + 409277 0.996 0.4-100 13 氯唑磷 y = 149978x + 107568 0.999 0.2-50 14 甲拌磷 y = 2694.8x + 51239 0.9967 4-400 15 甲拌磷亚砜 y = 47443x + 123064 0.9984 1-100 16 甲拌磷砜 y = 1811.9x + 39498 0.9978 4-500 17 蝇毒磷 y = 4715.5x + 26708 0.9993 2.5-250 18 硫环磷 y = 264314x + 460708 0.9949 0.06-75 19 磷胺 y = 162749x + 630773 0.9924 0.1-125 20 涕灭威 y = 2954.9x + 12523 0.9995 2-500 21 涕灭威砜 y = 42862x + 354349 0.9934 2-250 22 涕灭威亚砜 y = 2536.3x + 7322.3 0.9998 5-500 23 久效磷 y = 86683x + 245035 0.998 0.6-150 24 内吸磷 y = 1695.6x + 12712 0.9975 2-250 25 灭线磷 y = 107923x + 299305 0.9981 0.4-100 26 特丁硫磷砜 y = 3541.7x + 56125 0.9973 2-500 27 特丁硫磷亚砜 y = 7221.2x - 5479.8 0.9979 2-500 28 水胺硫磷 y = 550.23x + 20546 0.9917 4-500 29 杀虫脒 y = 90074x + 76990 0.9995 1-100 30 甲基异柳磷 y = 48.666x + 297.09 0.9956 20-500 3、陈皮样品加标回收实验 3.1精密度 取 3g 陈皮样品，对 30种目标物分别进行三个浓度（部分加标浓度点为 S3，S6，S8；部分为 S8，S10，S12）加标实验，每个样品测量 6次，对精密度进行评估，结果详见下表 6。在低中高三个加标浓度水平下陈皮样品中 30种禁用农药的相对标准偏差 RSD 分别为 2.68%~19.20%、1.81%~19.27%和 1.05%~18.28%。精密度 RSD 水平满足实验室内分析检测 要求。 表 6. 30种目标物陈皮样品加标精密度 序号 化合物 加标浓度点 S3(S8) S6(S10) S8(S12) 1 甲胺磷 8.81% 1.81% 4.26% 2 苯线磷 9.43% 3.20% 3.04% 3 苯线磷砜 13.24% 7.42% 5.47% 4 苯线磷亚砜 9.63% 4.90% 6.99% 5 地虫硫磷 2.68% 5.91% 3.53% 6 治螟磷 10.71% 4.73% 6.38% 7 克百威 3.68% 3.52% 4.11% 8 3-羟基克百威 4.07% 5.48% 5.32% 9 胺苯磺隆 4.61% 3.02% 4.83% 10 甲磺隆 5.24% 4.42% 9.31% 11 氯磺隆 6.84% 10.87% 4.54% 12 硫线磷 2.68% 5.91% 3.53% 13 氯唑磷 4.29% 5.14% 2.87% 14 甲拌磷 14.51% 14.66% 7.33% 15 甲拌磷亚砜 4.97% 4.62% 2.85% 16 甲拌磷砜 7.94% 12.33% 7.24% 17 蝇毒磷 3.78% 4.64% 4.38% 18 硫环磷 5.12% 4.04% 3.62% 19 磷胺 8.54% 8.07% 1.92% 20 涕灭威 11.64% 3.84% 2.34% 21 涕灭威砜 7.75% 8.89% 3.12% 22 涕灭威亚砜 9.07% 15.04% 3.48% 23 久效磷 3.99% 3.33% 3.87% 24 内吸磷 3.83% 4.92% 7.32% 25 灭线磷 4.22% 3.18% 2.79% 26 特丁硫磷砜 12.37% 18.20% 13.21% 27 特丁硫磷亚砜 9.76% 5.79% 18.28% 28 水胺硫磷 5.63% 10.02% 8.25% 29 杀虫脒 8.83% 7.88% 1.05% 30 甲基异柳磷 19.20% 19.27% 12.55% 3.2准确度 对 3g 陈皮样品加标低中高三个浓度（部分加标浓度点为 S3，S6，S8；部分为 S8，S10， S12）的回收率进行评估，结果详见下表 7。在低中高三个加标浓度水平下陈皮样品中 30种 禁用农药的回收率分别为 74.3%~108.8%、77.0%~107.7%和 77.1%~110.4%，回收率结果满 足实验室内分析检测要求。 表 7. 30种目标物陈皮样品加标回收率 序号 化合物 加标浓度点 S3(S8) S6(S10) S8(S12) 1 甲胺磷 97.6% 107.4% 91.1% 2 苯线磷 97.6% 77.0% 88.0% 3 苯线磷砜 95.0% 78.7% 87.2% 4 苯线磷亚砜 105.5% 87.2% 93.8% 5 地虫硫磷 104.9% 100.4% 96.0% 6 治螟磷 104.5% 88.5% 89.4% 7 克百威 95.6% 107.6% 110.4% 8 3-羟基克百威 100.7% 90.0% 91.3% 9 胺苯磺隆 91.5% 103.3% 91.2% 10 甲磺隆 74.3% 107.2% 85.1% 11 氯磺隆 108.8% 87.2% 96.4% 12 硫线磷 104.9% 100.4% 96.0% 13 氯唑磷 99.1% 79.8% 81.2% 14 甲拌磷 93.5% 94.0% 89.5% 15 甲拌磷亚砜 103.0% 95.3% 106.3% 16 甲拌磷砜 91.5% 98.9% 96.9% 17 蝇毒磷 89.8% 100.2% 103.8% 18 硫环磷 105.6% 107.3% 87.8% 19 磷胺 99.7% 104.1% 89.0% 20 涕灭威 81.8% 96.8% 94.0% 21 涕灭威砜 93.6% 107.7% 91.3% 22 涕灭威亚砜 89.6% 105.5% 104.8% 23 久效磷 91.3% 104.0% 93.3% 24 内吸磷 100.2% 83.4% 81.3% 25 灭线磷 105.4% 104.2% 105.6% 26 特丁硫磷砜 83.4% 91.3% 98.1% 27 特丁硫磷亚砜 95.2% 78.0% 88.9% 28 水胺硫磷 77.7% 94.0% 97.1% 29 杀虫脒 88.5% 104.5% 77.1% 30 甲基异柳磷 100.0% 77.3% 103.1% 3.3定量限 比较了采用 LC-TQ 5200实测的方法定量限与标准方法定量限。从下表 8可知，实测 方法定量限范围为 0.00006 mg/kg ~0.05 mg/kg ，所有目标物定量限均满足《中国药典》（2020版）四部通则 0212的药材和饮片检定通则中禁用农药标准要求。 表 8. 30种目标物方法定量限与标准限值信息表 序号 化合物 方法定量限（mg/kg） 标准方法定量限（mg/kg） 1 甲胺磷 0.0025 0.05 2 苯线磷 0.0004 0.02 3 苯线磷砜 0.0004 0.02 4 苯线磷亚砜 0.0004 0.02 5 地虫硫磷 0.0004 0.02 6 治螟磷 0.0004 0.02 7 克百威 0.001 0.05 8 3-羟基克百威 0.001 0.05 9 胺苯磺隆 0.0025 0.05 10 甲磺隆 0.005 0.05 11 氯磺隆 0.05 0.05 12 硫线磷 0.0004 0.02 13 氯唑磷 0.0002 0.01 14 甲拌磷 0.004 0.02 15 甲拌磷亚砜 0.001 0.02 16 甲拌磷砜 0.004 0.02 17 蝇毒磷 0.0025 0.05 18 硫环磷 0.00006 0.03 19 磷胺 0.0001 0.05 20 涕灭威 0.002 0.1 21 涕灭威砜 0.002 0.1 22 涕灭威亚砜 0.005 0.1 23 久效磷 0.0006 0.03 24 内吸磷 0.002 0.02 25 灭线磷 0.0004 0.02 26 特丁硫磷砜 0.002 0.02 27 特丁硫磷亚砜 0.002 0.02 28 水胺硫磷 0.004 0.05 29 杀虫脒 0.001 0.02 30 甲基异柳磷 0.02 0.02 结论 本文依据《中国药典》（2020版）四部通则中 《药材及饮片（植物类）中 禁用农药多残留测定法高效液相色谱 -串联质谱法》，采用禾信 LC-TQ 5200分 析了陈皮中 30种禁用农药。实验结果表 明：30种禁用农药的线性相关系数 R2均 大于 0.990，符合标准要求；陈皮样品加 标精密度 RSD 在 1.05%~19.27%范围，精密度 RSD 水平满足实验室内分析检测 要求；陈皮样品加标回收率在 74.3%~110.4%范围，回收率结果满足实 验室内分析检测要求。目标物方法定量 限在 0.00006 mg/kg ~0.05 mg/kg 范围内，显著优于《中国药典》（2020版）四部 通则中要求的 0.01~0.1 mg/kg 。上述结果 表明禾信 LC-TQ 5200具有优异的重现 性和检测灵敏度，满足标准要求。 参考文献 1. 《中国药典》（2020版）四部通则药材及饮 片（植物类）中禁用农药多残留测定法高效液相 色谱 -串联质谱法