顶空-GCMSMS法测定原料药中环氧氯丙烷含量

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本文使用岛津三重四极杆气质联用仪GCMS-TQ8050 NX结合AOC-6000顶空进样方式，建立了原料药中环氧氯丙烷残留量的定量分析方法。实验结果表明，在2~200 μg/L浓度范围内，环氧氯丙烷线性相关系数R为0.9996，线性关系良好。制备浓度为2 μg/L的环氧氯丙烷对照品溶液6瓶，连续进样6次，目标物峰面积RSD为4.29%，精密度良好。加标回收实验中，加标浓度0.1 μg/g，环氧氯丙烷平均回收率为95.1%。实验结果表明：该方法采用顶空进样，质谱采集模式为MRM，能够有效去除样品中化学干扰，样品前处理操作简单，方法灵敏度高、结果准确，可用于测定原料药中环氧氯丙烷残留量。SSL-CA23-233 Excellence in ScienceGCMSMS-275 顶空 -GCMSMS 法测定原料药中环氧氯丙烷 含量 GCMSMS-275 摘要：本文利用岛津公司三重四极杆气质联用仪 GCMS-TQ8050 NX结合顶空进样方式，建立了原料药中遗传毒 性杂质环氧氯丙烷残留量的测定方法。在 2~200 ug/L 浓度范围内，环氧氯丙烷线性相关系数为 0.9996， 线性关系 良好， 2 ug/L 环氧氯丙烷对照品溶液连续进样6针，峰面积RSD 为 4.29%。加标回收率实验中，加标浓度0.1ug/g，平均加标回收率为95.1%。实验结果表明：该方法样品前处理简单，灵敏度高，结果准确，能够有效地监测原料 药中环氧氯丙烷残留量。 关键词：三重四极杆气质联用仪原料药 遗传毒性杂质 环氧氯丙烷 技术特点： 心采用顶空进样，结合 GC-MS/MS MRM 采集模式，有效地抑制了样品的化学干扰。 心灵敏度高， 2 ug/L浓度下，环氧氯丙烷信噪比为30。 环氧氯丙烷 (Epichlorohydrin， ECH) 作为药物 合成的重要原料和中间体应用非常广泛，主要用于合 成降血脂类药物，β-肾上腺素受体阻断剂，减肥药，麻醉剂，抗肿瘤药物等。环氧氯丙烷的环氧结构为警 示结构，是潜在基因毒性杂质，动物实验也证明其有 潜在致癌作用，会增加罹患癌症的风险，应当避免长 期接触，国际癌症研究机构(IARC) 将环氧氯丙烷归 为2A类致癌物(很可能的人类致癌因素)。 根据人用药品技术要求国际协调理事会(ICH)发 布的 ICHM7《评估和控制药物中DNA反应性(致突 变)杂质以限制潜在的致癌风险》，结合药物的最大 日剂量以及环氧氯丙烷的可接受限度以毒理学关注阈 值 (threshold of toxicological concern，TTC) 1.5 ug/day计算，该药物中环氧氯丙烷的控制限度为 0.2 ug/g。 本文利用三重四极杆气质联用仪 GCMS-TQ8050NX 结合 AOC-6000顶空进样方式，建立了原料药中环 氧氯丙烷残留量的定量分析方法，测定原料药中痕量 环氧氯丙烷含量。该方法操作简单，灵敏度高，结果 准确，适合于原料药中环氧氯丙烷残留量的检测，并 满足该物质的限量要求。 AOC-6000 自动进样器 GCMS-TQ8050 NX 三重四极杆气相色谱质谱联用仪 1.2顶空分析条件 恒温炉温度： 90℃ 样品瓶恒温时间： 30 min 进样针温度： 120℃ 进 样 量量：1mL 1.3 GCMS分析条件 色 谱 柱：：SH-I-624Sil MS， 30 m×0.25mmID×1.4um 柱温程序：80℃ (0 min)_20℃ /min_240℃ (3 min) 进样口温度：220℃离化方式：EI 流速控制方式：：恒线速度方式离源温度：200°℃柱 流 量量：1.2 mL/min色谱质谱接口温度：250°℃进样方式：分流进样检测器电压：调谐电压+0.7 kV 分 流 比：5：1采集 模 式： MRM， 离子对信息见表1 样品前处理 准确称取 0.5 g API 样品置于20 mL 顶空瓶中 向顶空瓶内准确加入5 mL N，N-二甲基甲酷胺水 (50/50，v/v) 混合溶液 压盖密封后，上机分析 图11样品制备流程 ■结果与讨论 3.1环氧氯丙烷标准溶液谱图 环氧氯丙烷对照品谱图和化合物信息分别见图2和表1。 图2 环氧氯丙烷标准溶液谱图(0.2ug/mL) 表1环氧氯氯丙烷化合物信息 NO. 中文名称 英文名称 CAS 号 保留时间 (min) 定量离子对 (m/z) CE (V) 参考离子对 (m/z) CE (V) 1 环氧氯丙烷 Epichlorohydrin 106-89-8 2.913 57.0>31.0 8 62.0>27.0 8 3.2标准曲线和质量色谱图 以 N，N-二甲基甲酰胺-水(50：50，v/v) 混合溶液为溶剂，配置浓度为2、5、20、50、100、200 ug/L 环氧 氯丙烷系列对照品溶液，准确量取5mL各浓度对照品溶液移至已填加0.5g空白原料药样品的顶空瓶中，并压 盖密封，上机分析。以环氧氯丙烷浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，目标物标准曲线见图3。根 据2 ug/L 对照品溶液数据，以3倍信噪比 (peak to peak) 计算环氧氯丙烷的检出限，环氧氯丙烷(2ug/L)质量色谱图见图4，标准曲线线性相关系数以及检出限见表2。 图3 环氧氯丙烷标准曲线 图4 环氧氯丙烷质量色谱图(2ug/L) 表2环氧氯丙烷线性相关系数及检出限 序号 名称 相关系数(R) 检出限(ug/L) 1 环氧氯丙烷 0.9996 0.32 3.3重复性实验及检出限 制备6份浓度为2 ug/L环氧氯丙烷对照品溶液并连续进样，考察环氧氯丙烷峰面积重复性，环氧氯丙烷谱 图叠加图见图5，峰面积结果见表3。 Q57.00>31.00(+) 2.70e2 图5环氧氯丙烷谱图叠加图((2ug/L) 表33环氧氯丙烷重复性结果 序号 化合物名称 峰面积1 峰面积2 峰面积3 峰面积4 峰面积5 峰面积6 RSD((%) 1 环氧氯丙烷 876 893 807 822 852 809 4.29 3.4加标回收率 取目标物空白的原料药样品添加环氧氯丙烷标准溶液，加标浓度为0.1ug/g， 按前述样品处理流程平行处理 3份，上机分析。环氧氯丙烷平均回收率为95.1%，加标回收率详细结果见表4，加标环氧氯丙烷原料药样品谱 图见图6。 图6 加标环氧氯丙烷的样品谱图(加标浓度0.1ug/g) 表4环氧氯丙烷加标回收率结果 序号 名称 加标浓度(ug/g) 回收率(%) 平均回收率(%) 1 2 3 1 环氧氯丙烷 0.1 99.6 94.7 91.0 95.1 3.5实际样品测试结果 取某批次原料药样品，按照上述处理过程进行样品制备后上机分析。样品中未检出环氧氯丙烷，样品谱图见 图7。 图7 某原料药样品谱图 结论 本文使用岛津三重四极杆气质联用仪 GCMS-TQ8050 NX 结合 AOC-6000 顶空进样方式，建立了原料药中环 氧氯丙烷残留量的定量分析方法。实验结果表明，在2~200 ug/L 浓度范围内，环氧氯丙烷线性相关系数R为 0.9996，线性关系良好。制备浓度为 2 ug/L的环氧氯丙烷对照品溶液6瓶，连续进样6次，目标物峰面积 RSD 为4.29%，精密度良好。加标回收实验中，加标浓度0.1 ug/g， 环氧氯丙烷平均回收率为95.1%。实验结果表明：该方法采用顶空进样，质谱采集模式为MRM， 能够有效去除样品中化学干扰，样品前处理操作简单，方法灵敏 度高、结果准确，可用于测定原料药中环氧氯丙烷残留量。 岛津应用云