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1、HRP标记抗体的方法 酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物,可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。 戊二醛二步法 原理 戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。 2、标记步骤 (1)称取HRP25mg溶于1.25%戊二醛溶液中,于室温静置过夜。 (2)反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱,用生理盐水洗脱。流速控制在1ml/1分钟,收集棕色流出液。如体积大于5ml,则以PEG浓缩至5ml。放置25ml小烧杯中,缓慢搅拌。 (3)将待标记的抗体12.5mg用生理盐水稀释至5ml,搅拌下逐滴加入酶溶液中。 (4)用1M PH9.5碳酸缓冲液0.25ml,继续搅拌3?小时。 (5)加0.2M赖氨酸0.25ml,混匀后,置室温2小时。 (6)在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵,置4℃1小时。 (7)3000rpm离心半小时,弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次,最后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中。 (8)将上述溶液装入透析袋中,对0.15M PH7.4的PB缓冲盐水透析,去除铵离子后(用萘氏试剂检测),10,000rpm离心30分钟去除沉淀,上清液即为酶结合物,分装后,冰冻保存。
关闭上海远慕生物科技有限公司为您提供《酶标记抗体的方法步骤》,该方案主要用于其他中标记抗体检测,参考标准《暂无》,《酶标记抗体的方法步骤》用到的仪器有HRP-山羊IgG、HRP-氯霉素。
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