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细胞凋亡通常称为细胞程序性死亡,是由基因控制的主动性细胞死亡过程。越来越多数据发现,细胞凋亡与多种疾病密切相关,如癌细胞具有连续增殖、抵抗细胞凋亡能力,利用流式细胞仪分析细胞凋亡可为肿瘤诊断,疗效评价和预后预测提供了重要的参考指标。然而很多实验的同学们,常会碰到上机检测时细胞死亡太多却检测不出凋亡,多次重复结果不一致等现象,接下来就一起看看如何把细胞凋亡的数据变的更加漂亮,准确!首先,明确一下细胞凋亡和坏死的区别细胞凋亡(apoptosis) 是一件主动性细胞死亡事件,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控,是细胞为更好地适应环境而主动争取的一种死亡过程。 具体表现为: 出芽形成凋亡小体、核小体间DNA的切割,凋亡小体被吞噬和消化等几个连续过程等。细胞坏死(necrosis) 则是一件被动的过程,是细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程,即病理条件下,自体损伤的一种现象。 具体表现为: 细胞胀大,胞膜破裂,细胞内容物外溢,核变化较慢,DNA降解不充分,会引起局部严重的炎症反应。流式检测细胞凋亡的原理Annexin V和PI双染法是流式检测细胞凋亡的经典方法 ,它是基于凋亡的早期细胞膜上的磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine, PS)从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面这一原理来实现的。凋亡早期 PS从细胞膜的内侧外翻:该方法简便、快速、准确区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞。因此,将Annexin V与PI联合使用时,便可用来鉴别活细胞,凋亡细胞及死亡细胞。数据分析Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒是用FITC标记的Annexin V作为探针,FITC最大激发波长为488 nm,最大发射波长525 nm,FITC的绿色荧光在FL1通道检测;PI-DNA复合物的最大激发波长为535 nm,最大发射波长为615 nm,PI的红色荧光在FL2或FL3通道检测。通过软件分析,绘制双色散点图,FITC为横坐标,PI为纵坐标。常见问题解答1. 如何避免出现假阳性结果?2. 为什么必须收集细胞上清?因为凋亡的细胞可能会脱壁,悬浮于培养基,所以必须收集上清再离心取沉淀,合并胰酶消化下来的细胞,不然检测出来的凋亡比例可能会减少。3. 为什么在染色后1h内就要上机检测?由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析;PI受时间的影响很大,因标记了PI后会加大细胞毒性,特别是检测早期凋亡时,如果时间延长除了会导致在流式细胞仪上的细胞分群差距加大外,误差会明显加大,所以建议在一个小时内检测。
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上海远慕生物科技有限公司为您提供《使用流式检测细胞凋亡过程》,该方案主要用于其他中检测细胞凋亡检测,参考标准《暂无》,《使用流式检测细胞凋亡过程》用到的仪器有HighFive昆虫细胞(保成活)。
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