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RNA提取是很多科研实验中非常重要的前置环节,获得一个完整的RNA才能为下游各类实验奠定坚实的基础。为了确保RNA的完整性,从样品采集到提取RNA,我们会采取很多手段保护其不受降解。 以下是导致RNA降解的一些常见原因及其相应的解决方案: 新鲜细胞: 裂解液不足会导致裂解不充分,从而使部分RNA未被释放出来。为了确保RNA释放出来,应在裂解过程中加入足够的裂解液。 新鲜组织: 若组织中含有内源性核酸酶,则很难避免RNA酶的降解。建议采用的方法是在液氮条件下将组织研磨,并且,在匀浆时采用更多的裂解液。 冷冻样品: 如果样品未经液氮速冷直接转移到-70℃冰箱存放,会使RNA缓慢降解。为了避免这种情况,应在样品取材后迅速置于液氮中冷冻存放,然后转移到-70℃冰箱存放。 外源RNA酶的污染: 实验试剂、器械等实验用品应采用DEPC水灭菌处理,以消除外源RNA酶的污染。 内源RNA酶的污染: 抑制剂失效或者用量不够,以及实验样品过多或匀浆温度过高都可能导致内源RNA酶的污染。为了减少内源RNA酶的影响,可适当增加抑制剂的浓度,确保样品处理时处于适宜的温度。 长时间暴露于高温或光照环境下: RNA容易受到紫外线和高温的影响而发生降解,因此在实验过程中应避免样品暴露于高温或光照环境下。 提取过程中的反复冷冻解冻: 这种情况会破坏RNA结构,使其更容易受到酶的作用而降解。因此,在RNA提取过程中应尽量减少冷冻解冻次数,最好一次性完成整个提取过程。
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上海远慕生物科技有限公司为您提供《提取的RNA总是降解? 这样解决!》,该方案主要用于其他中RNA提取检测,参考标准《暂无》,《提取的RNA总是降解? 这样解决!》用到的仪器有核糖核酸(酵母)RNA, 63231-63-0、RNA酶抑制剂使用说明书。
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