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ELISA实验是我们大家最常见的实验,也是比较容易出问题的实验,可能你一不小心,你的整个实验便是无功能重来那!所以有些细节若是做不好会出现实验异常,或者效果不佳,接下来远慕生物分析一下原因。 一、白板异常:显色步骤结束后,酶标板所有孔均无颜色。阳性对照不显色。 1. 试剂已过效期,或不同试剂盒组分混用(解决方式:检查试剂的组分及批号,确认未过期以及所有组分均属对应的试剂盒。不同试剂盒或不同批号的试剂不能混用)。 2. 错加、漏加试剂底物、显色剂 A或B(解决方式:严格按说明书的步骤操作,加完试剂后可观察一下液面高度是否一致,以减少漏加现象)。 3. 洗板及加样过程中,酶标受污染失活失去催化显色剂显色的能力(解决方式:确认盛酶标的容器不含酶抑制剂如叠氮钠等,确认配制洗液的容器已洗干净)。 4. 终止液误作洗涤液稀释或当底物缓冲液配制(解决方式:每次配制时都应看清标签标明物质)。5. 蒸馏水有问题(解决方式:确认配制洗液的纯化水达到要求且未污染,与好蒸馏水比较)。·显色弱、灵敏度低:实验结束后,包括阳性对照、质控在内的所有板孔颜色均较淡。 二、阴阳性对照正常,但质控、参考品或个别弱阳性标本未能检出。 1. 未达要求的孵育温度及孵育时间可检出强阳性标本,但质控或弱阳性标本受 温度变化影响较大而被未检出(解决方式:质控品或标本避免反复冻融。标本在一周内使用的,可存于 2-8℃,如需长期保存,应置于-20℃以下保存。质控品应小量分装,并置于-20℃以下保存)。 2. 质控品或标本高温放置过久,或被反复冻融致待测物滴度下降,而未能检出(解决方式:重新设定酶标仪的参数,特别是检查滤光片是否匹配)。 3. 仪器设定不正确,滤光片不匹配(解决方式:重新设定酶标仪的参数,特别是检查滤光片是否匹配)。 三、实验结束后,阴阳性对照正常,质控正常,但临床标本感觉显色较弱 1. 待测标本中可能不含强阳性标本,故结果可能是正常的(解决方式:如有怀疑,可复检)。 2. 标本加入叠氮钠作为防腐剂(解决方式:酶免实验中的标本禁用叠氮钠作为防腐剂,可选用 proclin、硫柳汞等其他防腐剂)。
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上海远慕生物科技有限公司为您提供《ELISA实验出现异常原因分析解答》,该方案主要用于其他中ELISA试剂盒检测,参考标准《暂无》,《ELISA实验出现异常原因分析解答》用到的仪器有犬单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)ELISA检测试剂盒、仓鼠巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)ELISA试剂盒。
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