【求助】发光试剂Ru-NHS标记蛋白问题

楼主想怎样标记，是用交联剂么？

文献中不需要再用交联剂了，

发光试剂Ru(bpy)₃²⁺-NHS是合成的，已经联上交联剂NHS酯了。直接可以标记蛋白上的NH₂
但标记过程中需要注意的细节不熟悉，比如标记体系蛋白质缓冲溶剂的浓度和PH，还有反应时间等等问题。
麻烦做过的高手讲一讲，欲学习学习。

先谢谢了！

这些关键的细节一般在文章中都不会给出，如果要做只能自己优化条件，然后上机考察，不知道有没有和你做一个方向的！

pH对蛋白的影响很大！这是个主要因素！

楼上的兄弟，请问你一个问题：

标记时，蛋白质所处的缓冲溶液PH是高于该蛋白的等电点合适呢？还是低于该等电点合适？或者调节等于该蛋白等电点呢？

你目前选用的vpH比等电点的高还是低？

帮你搜了篇 Pierce的 NHS酯化的荧光素 说明书
好好看 对你会很有帮助的
里面protocol 读懂了修改下应该 标记蛋白是很容易的
此外，在本版发了篇这个专题的贴子，有帮助的话 记得来顶 呵呵

Pierce NHS-Fluorescein.pdf

多谢几位的帮助，

我欲标记AFP(等电点为4.75)，欲用PH为7.8的PBS作为标记缓冲体系，是否可行。
看了viernes给的资料，很有帮助，再次感谢！

pH 7.8 应该可以
都是 近中性 没什么不行的

AFP 等电点虽然低一点
在细胞环境内 pH接近5 AFP的U型疏水内核也是部分解离暴露的
但是 它照样有生理活性
注意 离子强度不要太高倒是真的