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【分享】石蜡切片技术实验

  • 问无止境!
    2009/12/14
  • 私聊

常用设备综合讨论

  • 一、取材与固定
    1 准备工作:工具、药品、计划等
    2 动物的麻醉:氯仿麻醉
    3 解剖取材
    4 材料分割:保持样品的完整性与代表性,考虑切片方向,实心组织大小5*5*2mm,空心细长组织10mm长。
    5 固定:布温氏固定液固定24h。
    6 漂洗:70%乙醇换洗3次,每次20~60min。
    7 保存:70%乙醇0~4 ℃ 。

    二、脱水、渗透与包埋
    1 脱水:85%乙醇→95%乙醇→100%乙醇→100%乙醇,每步30min~60min
    2透明:1/2乙醇+1/2二甲苯→二甲苯→二甲苯,每步30min~60min
    3 渗透: 1/2二甲苯+ ½石蜡→石蜡→石蜡,每步20min~60min,温度62℃
    4 包埋:将材料放入盛有石蜡的纸盒中,摆好位置(要考虑下一步的修快与切片方向),在水中冷却5~10min.

    三、切片
    1 修块 用单面刀片在玻璃板上修快使达到以下要求:
    (1)一个蜡块含一个材料,蜡块呈正方形或长方形,材料位于蜡块正中央。
    (2)材料边缘与蜡块边缘平行,各面要平直,材料边缘与蜡块边缘的距离约3mm。
    2 固着 将修好块的蜡块用烧热的解剖刀固着在样品台上。
    3 切片 按以下顺序进行
    (1)将样品台固定在切片机样品臂上,使切面竖直;
    (2)调切片厚度5~10um;
    (3)将切片刀用纱布蘸少许二甲苯擦净后装到切片机上,调刀角15~20,将刀固定好;
    (4)调刀距 使样品与刀口尽可能靠近;
    (5)切片顺时针摇动切片机速度40-60r/min;
    (6)将切好的蜡带光面向下用毛笔放到台纸上





    贴片
    (1)清洗载波片;
    (2)加粘片剂,要求薄、匀;
    (3)放切片,光面向下;
    (4)加水于切片下面;
    (5)展片将载波片放于50℃的温台上至切片完全展平;
    (6)烤干吸掉多余水,继续放于温台上至水完全干燥;
    5 贴标签 临时标签,用铅笔写明组号、姓名。
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  • 问无止境!

    第1楼2009/12/14

    四、染色
    1 脱蜡 二甲苯(2)→二甲苯(1),每步510min;
    2 复水 1/2乙醇+1/2二甲苯→100%乙醇(2)→ 100%乙醇(1)→ 85%乙醇→ 70%乙醇→ 50%乙醇→ 30%乙醇→
    蒸馏水,每步2min;
    3 初染 代氏苏木精染色15min;
    4 分化 0.1%HCl脱色至变红→0.1%NaOH至变蓝;
    5 脱水 蒸馏水(3-5s)→ 30%乙醇→ 50%乙醇→70%乙醇→ 85%乙醇,每步2min;
    6 复染 0.5%伊红(溶于95%乙醇)染色10~15min;
    7 脱水透明95%乙醇(1020s)→100%乙醇(1) →100%乙醇(2)→ 1/2乙醇+1/2二甲苯→二甲苯(1) →二甲苯(2)(≥3min),每步2~3min;
    8 封片 将材料周围擦干净(注意在擦的过程中材料上的二甲苯必须保证不能干,可随时补加),加1~2滴中性树胶,加盖玻片(需提前洗净擦干备用);
    9 贴标签 注明样品名称、染色方法、组号、姓名和日期;
    10 镜检 检查样品取材、切片及染色情况,熟悉样品为下次样品观察做好准备;
    11 干燥 平放于展片盘中,于37℃温箱中或自然干燥;
    12 预习 下次实验:样品的观察,需提前做好预习,并准备纸、铅笔。
    五、观察
    1 样品观察
    • 小白鼠脑;
    • 小白鼠心肌;
    • 小白鼠肝脏;
    • 小白鼠肾脏;
    • 小白鼠肺;
    • 小白鼠小肠;
    • 小白鼠肌肉;
    • 小白鼠精巢;
    • 小白鼠卵巢等。
    2 绘图
    • 任选一种样品将结构完整地绘于实验报告上。
    3 样品结构显微照片如下:

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  • titi

    第8楼2009/12/15

    这是楼主亲自做出的效果图吗?很赞啊~
    以前我只做过植物的石蜡切片~~动物的还真没有做过~~
    做动物标本的有什么格外注意的事项吗?



    此外如果是楼主自己做的切片建议您此文参加原创大赛哦~~~

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  • tingxi

    第9楼2009/12/15

    您做过植物切片吗?下图是我自己做的南瓜茎横切,扫描的照片,图片小了点。

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  • titi

    第10楼2009/12/15

    是啊~我做过的植物茎和叶切片~茎相对容易一些~叶做的时候有点小麻烦~
    不过您的图很漂亮啊~~~很赞~

    tingxi(tingxi) 发表:您做过植物切片吗?下图是我自己做的南瓜茎横切,扫描的照片,图片小了点。

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