〓猪哥哥〓
第8楼2009/12/22
六、柱子评价
1、本次实验共选了四个厂家,五种型号的色谱柱进行比较,长度不同,填料种类和粒度也不同。由于样品浓度比较低,样品种类单一,所以实验结果并不能全面代表色谱柱的性能,只是作为一个参考而已。样品来源于化学药(左旋氨氯地平),色谱条件为国家药品监督管理局制订的,浓度是作为有关物质检查对照品的浓度。由于样品目前只做了化学药,对于中药的分离效果还尚待比较,以后会继续补上分离中药的色谱图。
2、从实验数据说明,不同色谱柱,同一样品,谱图的差异也较大,峰型差异导致积分方式发生改变,峰面积会稍有不同。同时影响保留时间因素较多,除了极性,还有其他因素,所以主峰的保留时间不同,样品出峰顺序可能会略有改变。
3、由100%有机相冲洗色谱柱的比较数据发现,各色谱柱平衡均较快,基线亦较平,只是在基线平衡之前图谱不同。极限AQ色谱柱出现了原来遇到的一个问题,就是会有峰出现,从谱图上看应该是气泡。(按照月旭工程师的理解,应该是色谱柱头尾处的气泡进入了检测器),气泡消失后,基线平衡。其他的色谱柱没有峰出现,只是在平衡前基线有漂移,漂移大小不一。平衡之后,基线均稳定。从柱压上看,迪马Diamonsil C18 (2)和艾杰尔Promosil C18较接近,压力较小,XB和AQ,因为粒度非常小,所以压力较大,属于正常现象。甲醇和乙腈冲洗统一色谱柱压力相差较大,如AQ色谱柱相差15bar,安捷伦Eclipse XDB C18 压力和迪马、艾杰尔差不多。
4、5%甲醇冲洗色谱柱,不同色谱柱差异较大。压力以安捷伦的最低,为110bar,迪马和艾杰尔相差不大,为130bar左右,3um基线色谱柱达到了170bar上下,平衡后,压力非常稳定。但是AQ在冲洗的过程中发现了一个问题,换到5%的甲醇后,当达到平衡一会,出来比较多色谱峰,而且峰型较大。不知道是不是由于贮存色谱柱的溶剂产生的,还需要官方解答。(流动相没有问题,其他色谱柱正常),其他色谱柱一切正常。
5、采用流动相走基线的时候,不同色谱柱均表现了不同的特点。安捷伦的没有做对比。艾杰尔色谱柱、迪马色谱柱和极限色谱住均出现了较大,较多的峰,以极限XB最多。相似之处是在一组大峰之后,有一个相对较小的色谱峰,保留时间长的色谱峰出峰之后,基线开始恢复平衡,由于不同色谱柱均出现了那个小色谱峰,原因可能在于流动相的问题。XB色谱柱出峰最多,峰高也是最大的。具体原因还不是很清楚,与其他三根柱子相比,特点更突出。
6、对于样品的测定。由于柱长和填料类型、粒度不一,所以保留时间、分离度相差较大。极限色谱柱由于是3um,150mm长,所以出峰时间最快,为2.9分钟左右,其他色谱柱为250mm,时间再4.2min左右。同时走出来峰型最好的有基线AQ-C18和迪马Diamonsil C18 (2),对称因子分别为:1.01和0.97。随后是极限XB色谱柱,对称因子为0.8。从以上可以发现,极限色谱柱对样品有较好的峰型,但是由于柱长较短,出峰太快,分离度还尚未达到要求,所以测定此样品含量,选用的是迪马250mm的色谱柱。
对于中药的分离,还需要进一步的比较。总体来说,极限色谱住3um是一个不错的选择,尤其是峰型不好的时候,可以试试。