【原创】奶粉中雌、孕激素检测全套方案

Eda

2010/08/17

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厂商论坛

三聚氰胺的阴影尚未散去，奶粉行业又掀起轩然大波，一则“某品牌奶粉疑致女婴性早熟”的新闻报道引起了社会各界的高度关注。我国对于奶粉中雌激素含量的检测规定了不得检出的限量，但相关具体的检测方案尚没有公布。
迪马科技作为助您保障人类食品、环境、药品安全的实验合作伙伴，根据国家及农业部公布的相关标准《GB/T 21981-2008 动物源食品中激素多残留检测方法液相色谱-质谱质谱法》和《农业部1031号公告-1-2008 动物源性食品中11种激素残留检测液相色谱－串联质谱法》，推出以下关于奶粉中雌激素检测的全面解决方案，希望对您准确检测雌、孕激素含量有所帮助，具体如下：

标准品：

英文名	中文名	货号	规格	CAS
Estriol	雌三醇	C13213200	0.1g	50-27-1
17-beta-Estradiol	17β-雌二醇	C13213100	0.25g	50-28-2
β-Estradiol 17-acetate	17β-雌二醇乙酸酯	C13213110	0.1g	1743-60-8
ESTRADIOL-3,4-13C2	雌二醇-3.4-13C2	CLM-803-1.2	1.2ml
17α-Ethinylestradiol	17α-炔雌醇	C13245100	0.25g	57-63-6
Estrone	雌酮	C13213230	0.1g	53-16-7
Estrone-2,4-d2	雌酮-2.4-d2	D-5005/0.05	0.05g
Diethylstilbestrol	己烯雌酚	C12607000	0.1g	56-53-1
Diethyl-1,1,1’,1-d4-stilbestrol-3,3’,5,5’-d4	己烯雌酚-d4	D-2849/0.05	0.05g
Hexestrol	己烷雌酚	C14202800	0.1g	84-16-2
Hexestrol-d4	己烷雌酚-d4	H295303-1MG	1mg
Dienestrol	双烯雌酚	C12598000	0.1g	84-17-3
Altrenogest	四烯雌酮	C10144000	0.1g	850-52-2
Desogestrel	去氧孕烯,地索高诺酮	32809-25MG	25MG
Estrone-D4	雌酮-D4	489204-100MG	2.5mg	53866-34-5
β-Estradiol 3-benzoate	β-雌二醇安息香酸酯	C13213120	0.1g	50-50-0
β-Estradiol 3-methyl ether solution	β-雌二醇3-甲醚	32749-2ML	2ML	1035-77-4
Equilin	马烯雌酮	C13193050	50mg	474-86-2
Melengestrol acetate	美仑孕酮乙酸酯	C14861700	0.1g	2919-66-6
Mestranol	美雌醇	C14915000	0.1g	72-33-3
Dienestrol	己二烯雌酚	C12598000	0.1g	84-17-3

其他相关产品：

英文名称	中文名称	货号	规格
β-Glucuronidase/aryl sulfatase 2ml	β-葡萄糖醛酸苷酶	1.04114.0002	2ML
Sulfatase from Helix pomatia	芳基硫酸酯酶，≥10,000 units/g	S9626-5KU	5KU
BSTFA+TMCS, 99:1	衍生化试剂 BSTFA+TMCS, 99:1	33148-20X1ML	20X1ML
N-Methyl-N-trimethylsilyltrifluoroacetamide activated I	衍生化试剂, N-甲基-N-(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺	50992-5ML-F	5ML
Acetonitrile HPLC, 4L	乙腈,HPLC	50101	4L
Methanol HPLC, 4L	甲醇,HPLC	50102	4L
n-Hexane HPLC, 4L	正己烷,HPLC	50115	4L
Dichloromethane HPLC, 4L	二氯甲烷,HPLC	50117	4L
Methyl tert-butyl ether HPLC, 4L	甲基叔丁基醚,HPLC	50123	4L
Acetic acid HPLC, 50ml	乙酸,HPLC	50132	50ML
ProElut CARB 500mg/6mL 30/pkg	石墨化碳黑固相萃取柱	65405	30/PKG
ProElut NH2 500mg/6mL 30/pkg	氨基固相萃取柱	63305	30/PKG
ProElut C18 500mg/3mL 50/pkg	C18固相萃取柱	63104	30/PKG
ProElut PLS 500mg/6mL 30/pkg	PLS固相萃取柱	68005	30/PKG
ProElut CARB/PSA 500mg/500mg/6mL 30/pkg	CARB/PSA 复合柱	64205	30/PKG
ProElut CARB/NH2 500mg/500mg/6mL 30/pkg	CARB/NH2 复合柱	64105	30/PKG
Diamonsil C18(2) 5u 150 x 4.6mm	钻石C18液相柱	99601	1EA
Leapsil C18 2.7u 100 x 2.1mm	飞跃UPLC/HPLC柱	86005	1EA
DM-5MS 30m x 0.25mm x 0.25um	DM-5MS毛细柱	8221	1EA

分析方法：

1 反相SPE净化方法
1.1 提取
称取2.0 g奶粉(精确至0.01 g)，加入内标液(使用内标法时才需加入内标液)，加入16 ml 80%甲醇水溶液，振荡提取2 min或超声提取5 min。6000 rpm下离心5 min，取4 ml上清液，加入12 ml纯水，混匀得到样品稀释液，待净化。

1.2 SPE柱净化
ProElut PLS亲水亲脂平衡柱,150 mg/6 ml

活化、平衡：5 ml甲醇活化，5 ml水平衡；
上样：让样品稀释液通过PLS小柱，流出液弃去；
淋洗：5 ml 5%甲醇水溶液淋洗，淋洗液弃去；
洗脱：5 ml纯甲醇洗脱，收集洗脱液；
样品重组：40 ℃下将洗脱液氮气吹干，用1 ml 50%甲醇水溶液重新溶解残渣，微孔滤膜过滤后供仪器分析。

2 正相SPE净化方法
2.1 提取
称取2 g奶粉(精确至0.01 g)，加入内标液(使用内标法时才需加入内标液)，加入20 ml 80%甲醇水溶液，振荡提取2 min或超声提取5 min。6000 rpm下离心5 min，取10 ml上清液，与50 ml纯水混合得到样品稀释液，待净化。

2.2 SPE柱净化
ProElut CARB石墨化炭黑柱，500 mg/6 ml
ProElut NH2氨基柱，500 mg/6 ml

将样品稀释液通过经活化的ProElut CARB柱*，液体全部通过后将小柱抽干。然后将经活化的ProElut NH2柱*串接在ProElut CARB柱下方。10 ml二氯甲烷-甲醇溶液(7+3)洗脱并收集洗脱液，然后取下ProElut CARB柱，用2 ml二氯甲烷-甲醇溶液(7+3)洗脱ProElut NH2柱，合并洗脱液。然后氮气吹干洗脱液，再用1 ml 50%甲醇水溶液溶解残渣，微孔滤膜过滤后供仪器分析。

*ProElut CARB柱依次用6 ml二氯甲烷-甲醇溶液(7+3)、6 ml甲醇、6 ml水活化平衡；ProElut NH2柱活化平衡

3 仪器分析
3.1 雌激素分析条件
A HPLC条件：
色谱柱：Leapsil C18，100 x 2.1mm，2.7 μm
流动相：A，水；B，乙腈
梯度：略
流速：0.3 ml/min
柱温：40 ℃
进样体积：10 μl
B 质谱条件
电离源：ESI，负电离模式
电离源温度：100 ℃
毛细管电压：3 kV
脱溶剂气体温度：450 ℃
脱溶剂气体流量：0.2 l/min

3.2 孕激素分析条件
A HPLC条件
色谱柱：Leapsil C18，100 x 2.1mm，2.7 μm
流动相：A，0.1%甲酸水溶液；B，甲醇
梯度：略
流速：0.3 ml/min
柱温：40 ℃
进样体积：10 μl
B 质谱条件
电离源：ESI，正电离模式
毛细管电压：3.5 kV
电离源温度：100 ℃
脱溶剂气体温度：450 ℃
脱溶剂气体流量：0.2 l/min