第2楼2005/12/04
这个问题涉及范围很大。简单地说首先要对你的分析对象的物理化学性质要有了解,越详细越好。如果找不到那起码应该知道他们的分子结构式等信息,以便根据其结构来大体判断其化学性质(主要指其极性,酸碱性,溶解性,是否易解离等)。实在找不到,那只有从头试了。 有了这些大体的性质后你就可以做出初步的判断:体系(正/反相),柱子(C18,C8,CN等),缓冲溶液,pH范围等。以下针对你说得两点给出我的建议。
可用作缓冲溶液的通常是磷酸钾钠铵盐,pH一般用磷酸来调节,如果你的检测波长高于230nm, 醋酸也可考虑。缓冲液浓度一般在10~30mM, 最高可以到100mM, 但最好别超过50mM。掌握的原则为能不用就不用,非用不可则从10mM先试,如果对分离或峰形改善有利,则可考虑增大浓度,直至满足实验要求为止。三乙胺(TEA),三氟乙酸(TFA)等主要用于改善分离度以及改善峰形用。其用量以0.1%~1%为宜。原则同上。另外,TEA还可以与磷酸等配合做缓冲液同时又起改善分离和峰形之用。对于使用TEA,TFA同样要求你的检测波长高于230nm,否则最好别用。
当然,以上所说的这些都要根据要求和样品的复杂程度结合试验结果作调整。