【第三届原创参赛】六味地黄丸山茱萸含量可测定方法的摸索

yhc2004

2010/11/20

私聊

中药/天然药检测

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六味地黄丸由熟地黄、山茱萸、山药、泽泻、牡丹皮、茯苓6味中药组成。方中用熟地黄滋阴补肾、填精生髓，为方中君药。山茱萸滋养肝肾，并能涩精；山药补脾益气而固精，二者同为臣药。三味药相配，共同发挥补益肝、脾、肾的作用。效力全面，且以补肾阴为主，补其不足，可治“本”。泽泻泄肾利湿，并可防止熟地黄过于滋腻；丹皮能够清泄肝火，同时可以制约山茱萸的收敛作用；茯苓淡渗脾湿，帮助山药健运脾胃，这三味药为泻药，泻湿浊，平其偏盛，为佐药，是治“标”。

本文对吸附剂中性氧化铝干法、湿法装柱的柱效进行对比分析，确定山茱萸含量测定项的装柱方法。优化了山茱萸含量测定的方法，使测定结果更加可靠。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

电子天平（FA-1004）、高效液相色谱仪（安捷伦1200型）

1.2 试剂

马钱苷对照品（中国药品生物制品检定所）、甲醇（色谱级）、中性氧化铝

2 试验方法

2.1 系统适用性试验：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以四氢呋喃-甲醇-乙腈-0.05%磷酸溶液（1：4：8：87）为流动相；柱温为40℃；检测波长为236nm。理论板数按马钱苷峰计算应不低于4000。

2.2 对照品溶液的制备：

取马钱苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成1ml含20μg的溶液，即得。

2.3 中性氧化铝的装柱：

中性氧化铝装柱由干法和湿法两种，见表1

表1

柱号

装柱

干

法

装

柱

称取中性氧化铝4g，缓缓均匀的倒入玻璃柱内（柱下端加适量脱脂棉），中间应不间断，使成一细流，慢慢加入管内。必要时轻轻敲打玻璃柱使填装均匀，柱上端加少量脱脂棉。再打开下端活塞，慢慢加入40%甲醇适量，使氧化铝湿润。待用。

湿

法

装

柱

称取中性氧化铝4g，加入适量40%甲醇，搅匀，缓缓地连续不断的倒入玻璃柱内（柱下端加适量脱脂棉），同时应将管下端活塞打开，避免柱内产生气泡，影响柱效，使洗脱剂慢慢流出。中性氧化铝慢慢沉于管的下端，待加完中性氧化铝后，继续加洗脱剂，直到吸附剂不再变动为止，柱子上端加少许脱脂棉。待用。

2.4 供试品溶液的制备：

（做平行试验3份）取本品适量，研细，取约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，加中性氧化铝柱（100~200目，4g，内径为1cm）上，用40%甲醇50ml洗脱，收集流出液及洗脱液，蒸干，残渣用50%甲醇溶解，并转移至10ml量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.5 含量测定：

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，记录色谱峰面积，计算，即得。结果见表2。

表2

湿法装柱	0.16mg/g	0.16mg/g	0.17mg/g
干法装柱	0.12mg/g	0.12mg/g	0.13mg/g