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【转帖】植物RNA提取的利器

果果

2010/11/29

生命科学仪器综合讨论

有许多植物就是由于未能有效地分离纯化其组织中的RNA，而阻碍了其分子生物学方面研究的进展。这些植物组织中，或富含酚类化合物，或富含多糖，或含有某些尚无法确定的次级代谢产物，或RNase的活性较高。在完整的细胞内这些物质在空间上与核酸是分离的，但当组织被研磨，细胞破碎后，这些物质就会与RNA相互作用。酚类化合物被氧化后会与RNA不可逆地结合，导致RNA活性丧失及在用苯酚、氯仿抽提时RNA的丢失，或形成不溶性复合物；而多糖会形成难溶的胶状物，与RNA共沉淀下来；萜类化合物和RNase会分别造成RNA的化学降解和酶解。对于这些植物材料，用常规的RNA提取方法（如胍法、苯酚法和十六烷基三甲基溴化胺法等）难以提取出其RNA。

纵观国际上RNA提取的试剂盒，如常见的Trizol，以及一些知名名牌的RNA提取试剂盒均很难从多糖多酚的植物中提取高质量的RNA，酚类物质的含量会随着植物的生长而增加。因而从幼嫩的植物材料中更容易提取RNA。此外，针叶类植物的针叶中多酚的含量比在落叶植物的叶子中要高得多。在植物材料匀浆时，酚类物质会释放出来，氧化后使匀浆液变为褐色，并随氧化程度的增加而加深，这一现象被称为褐化效应。被氧化的酚类化合物（如醌类）能与RNA稳定地结合，从而影响RNA的分离纯化；多糖的污染是提取植物RNA时常遇到的另一个棘手的问题。植物组织中往往富含多糖，而多糖的许多理化性质与RNA很相似，因此很难将它们分开。在去除多糖的同时RNA也被裹携走了，造成RNA产量的减少；而在沉淀RNA时，也产生多糖的凝胶状沉淀，这种含有多糖的RNA沉淀难溶于水，或溶解后产生粘稠状的溶液。由于多糖可以抑制许多酶的活性，因此污染了多糖的RNA样品无法用于进一步的分子生物学研究。

Trizol主要成份是异硫氰酸胍和苯酚，没有特殊去除多糖和多酚的试剂，所以对于大多数多糖多酚的植物无法成功提取，即使添加了如2-巯基乙醇、二硫苏糖醇（DTT）或半胱氨酸之类的防止酚氧化的试剂也很难提取。RNeasy Plant Mini Kit主要裂解液是盐酸胍或则异硫氰酸胍，有些公司进行改进之后添加了诸如PVP40等结合多酚的试剂，亦无法取得让人满意的结果。

百泰克公司在RNA提取方面积累了丰富的实践经验，开发出通用植物总RNA快速提取试剂盒，在试验的一百多例多糖多酚植物中，无一例外的提取出来高质量的RNA，其中包括棉花、苹果、葡萄、草莓、香蕉、龙眼、荔枝、番茄果实、茄子、松针、杨树、拟南芥种子、菠萝蜜、马蹄金、早熟禾、高羊茅、云杉、松树、紫椴、花楸、白桦、山毛榉、海棠花、槭槭、紫罗兰、毛爪草、丁香、月季、天竺葵、仙客来、菊花、牵牛花、紫松果、彩叶草、一品红、夹竹桃、垂叶榕等。

分
该帖子已被版主-zhang8826857加3积分，加2经验;加分理由:鼓励发帖交流哦^_^

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zhang8826857

第1楼2011/09/30

最后一段咋感觉像广告哩？呵呵。这个“通用植物总RNA快速提取试剂盒”有多少人用过呢？用过的人评价好不好？

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