【第三届原创参赛】泽泻药材的含量测定研究

泽泻为泽泻科植物泽泻 Alisma orientalis(Sam．)Juzep．的干茎。性味甘、寒,归肾、膀胱经。用于小便不利，水肿胀满，泄泻尿少，痰饮眩晕，热淋涩痛，高血脂^[1]。

泽泻所含的化学成分比较复杂，主要含三萜类，倍半萜类，二萜类等成分。泽泻醇 A(alisol A)及其乙酸酯、泽泻醇 B(Alisol B)及其乙酸酯、泽泻醇 C单乙酸酯(Alisol C 23-acetate)为首次从泽泻中分离得到的三萜类化合物。此后，各国学者又从不同产地、不同加工方法的泽泻饮片中分离得到了30多个三萜类化合物，其结构多为原萜烷型(Protostane)四环三萜。如24-乙酰泽泻醇A极其衍生物，23-乙酰泽泻醇B及其衍生物，乙酰泽泻醇E，泽泻醇F，泽泻醇H，泽泻醇G等。从生物途径归纳，三萜类都是由23-泽泻醇B衍生而来。泽泻倍半萜类成分主要是愈创木烷型，最早由Oshima从中分离到的是Alismo1和泽泻二醇(Alismoxide)。后又分离陆续出泽泻醇萜A，泽泻醇萜B，泽泻醇萜C，泽泻醇萜E，泽泻醇萜F等^[2]。泽泻还含有β-谷甾醇（β-sitosterol）、β-谷甾醇-6′-O-硬酸脂、硬脂酸、甘油醇-1-硬酸脂、三十烷^[3]、胆碱^[4]、植物凝聚素^[5]、泽泻多糖PH^[6]、PIIIF^[7]、生物碱，黄酮大黄素，淀粉，蛋白质，氨基酸，等成分^[8]。

现代泽泻药用有生泽泻、盐泽泻、麸炙泽泻三个主要品种。生泽泻：除去杂质，稍浸，润透，切厚片，干燥^[9]。盐泽泻：取泽泻片，加适量盐水拌匀闷透，置锅内，以文火加热、炒至微黄色时，取出放凉。每100kg泽泻用盐2kg^[10]。麸炙泽泻先将锅烧热，撒入麦麸待冒烟时，投入泽泻片不断翻炒。炒至药物呈黄色时取出，筛去麦麸放凉。每100kg泽泻用麦麸10～l5kg^[9]。樟帮麸炒泽泻：先将锅内烧热，撒入麸皮，待冒烟时，加入泽泻片，不断的翻动，炒至药物表面呈金黄色取出，筛去麸皮，放凉。每泽泻100公斤，用麦麸10公斤^[10]。泽泻性味甘，寒。归肾、膀胱经。具有利小便，清湿热的功能。用于小便不利，水肿涨满，泄泻尿少，痰饮眩晕，热淋涩痛，及高血脂等症。泽泻生品以利水渗湿为主，用于小便不利，水肿，泄泻、淋浊，湿热黄疸，湿热带下，痰饮等症。盐炙后能够引药下行，增强滋阴，泻热，利尿的作用，并利尿而不伤阴。用于小便淋涩，遗精淋漓，腰部重痛等症。麸炒后寒性缓和，以渗湿和脾，降浊以生清为主。用于脾湿泄泻，久泻等症^[11]。

泽泻药材等级的传统划分以块茎个头大小判断,而现代研究泽泻质量的忧劣多以药材中泽泻醇A24-乙酸脂,泽泻醇B23-乙酸脂的含量作为评价标准。

一 仪器与试药

（一）仪器

Agilent 1100 Series 高效液相色谱系统

Agilent 1100 色谱工作站

UV检测器

DAD检测器

Hypersil ODS C₁₈色谱柱（4.6mm×200mm 大连依利特公司）

KQ318T超声手饰清洗器（昆山超声仪器厂）

80-2离心机（深圳沙关角国华仪器厂）

分析天平（梅特勒公司）。

（二）试药

泽泻药材：所有药材均樟树天齐堂提供。

对照品：泽泻醇B-23-乙酸酯（对照品）

化学试剂：乙腈为色谱纯；甲醇（分析纯，色谱纯）；水为双蒸水。

二、实验方法与结果

（一）检测波长的选择

取一定浓度的泽泻醇B-23-乙酸酯甲醇溶液20μl注入高效液相色谱仪中。从所获得的二极管阵列检测图谱里，在200nm～400nm范围内选择对照品的最大吸收波长值，结果表明泽泻醇B-23-乙酸酯的最大吸收波长值在208 nm处。因此，选择测定波长为208 nm。见下图一，图二。

图一 泽泻醇B23-乙酸脂3D效果图




图二 3D总体效果图

（二）色谱条件的建立

色谱柱：Hypersil ODS C₁₈柱（4.6mm×200mm，5μm）

流动相：乙腈﹕水=78﹕22

流速：1ml/min

检测波长：208 nm

柱温：25℃

在该色谱条件下，样品实现分离（R≥1.5，理论塔板数≥2500，对称因子在0.8～1.2之间）。

（三）供试液的制备研究

3.1提取溶剂的选择

取泽泻药材粉末（过80目筛）6份，每份约0.5g，精密称定，置离心试管中，其中3 份分别加入乙腈10ml，另三份分别加入甲醇10ml，浸渍15min，超声处理30min，离心10min（转速为3500r/min），分离上清液，剩余残渣如上法处理，分离上清液。合并上清液，置25ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。吸取20μl样品液进样，记录峰面积，计算含量。结果表明乙腈、甲醇提取效率相当，故选择甲醇为提取溶剂。结果见表3。

表3 不同溶剂对药材中泽泻醇B-23-乙酸酯的提取能力比较

3.2提取方法的选择

取泽泻药材粉末（过80目筛）6份，每份约0.5g，精密称定，其中3份置离心试管中，加入甲醇10ml，按二.（三）.1项下操作。另三份分别置平底烧瓶中，各加入20ml甲醇，精密称重，回流法提取3小时，放冷，补足损失重量，滤过，吸取续滤液15 ml，转移至25ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀。吸取20μl样品液进样，记录峰面积，计算含量。结果表明，超声提取法提取效果好。结果见表4。

表4 不同方法对药材中泽泻醇B-23-乙酸酯的提取能力比较

表5 超声时间对药材中泽泻醇B-23-乙酸酯提取的影响

表6 超声次数对药材中泽泻醇B-23-乙酸酯提取的影响

3.6含量测定方法学考察

3.6.1线性关系考察

精密称定泽泻醇B-23-乙酸酯对照品5.79mg，置50ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取5ml、3ml、2ml、1ml、0.5ml、0.2ml，分别置10ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制得系列对照品溶液。分别吸取上述对照品溶液10μl进样测定，记录峰面积，将测得的峰面积A对浓度C（mg/ml）进行线性回归，得回归方程为：

A=21447.37C+1.262 ；r=0.9999。见下图三。

实验表明，泽泻醇B-23-乙酸酯甲醇溶液在浓度为2.310～57.9μg/ml之间呈现良好的线性关系。

3.6.2精密度实验

取同一浓度的泽泻对照品溶液（0.01158 mg/ml），连续进样6次，每次进样20μl检测，记录峰面积。结果见表7。

表7 精密度实验结果

表8 重现性试验结果

表9 稳定性实验结果

表10 加样回收率实验结果

（四）样品的含量测定

取樟树天齐堂提供的泽泻样品10批，每份约0.5g，精密称定。按样品制备方法制得样品供试液，分别吸取10μl样品液进样，记录峰面积，计算含量。结果见表11。

表11 汇仁集团GAP基地的泽泻样品含量测定结果（n=2）

好好一篇文章怎么发的这么细碎