【第三届原创参赛】指纹图谱技术监控升仙升脉口服液生产过程

yhc2004

2010/12/25

私聊

中药/天然药检测

利用指纹图谱技术监控参仙升脉口服液的生产过程
［摘要］：通过建立参仙升脉口服液生产过程中各个中间体的指纹图谱，并加以对比，找出工艺中的敏感步骤，从而在生产中对敏感步骤加以严格控制，使得各批产品质量稳定，疗效可靠。

［关键词］：参仙升脉口服液指纹图谱质量控制

参仙升脉口服液由红参，淫羊藿、补骨脂（盐炙）、枸杞子、麻黄、细辛、丹参、水蛭八味中药组成，具有温补心肾、活血化瘀的功效。目前我公司对参仙升脉口服液的质量控制主要以其中的人参皂苷R_g1为其指标成分，实践表明，单个或几个指标成分难以反映产品的全面质量。本文试图采用HPLC指纹图谱技术对口服液进行全面的质量控制，取得了较好的效果。

1 仪器和试剂

LC-10AT岛津高效液相色谱仪，SPD-10AVP紫外检测器。色谱柱：Kromasil100-C18 25×4.9㎜。乙腈（色谱纯），磷酸（分析纯），甲醇（色谱纯）乙醇（分析纯）。

2.方法

2.1 参仙升脉口服液的来源与处理

参仙升脉口服液中间体1（091001批），500ml，未用活性碳处理，未灭菌（口服液车间提供）

参仙升脉口服液中间体2（091001批），500ml，活性炭处理，未灭菌（口服液车间提供）

参仙升脉口服液中间体3（091001批），500ml ，活性炭处理，已灭菌（口服液车间提供）

2.2 由于参仙升脉口服液组方复杂，成分较多，色谱峰交相重叠，特选择以下不同的流动相以及不同的检测波长，以筛选出较好的指纹图谱。

2.2.1本试验采用乙腈—水（20：80）、甲醇—水（20：80）、乙腈—0.3%磷酸溶液三种流动相进高校液相，以选出一种较好的流动相。

表1 不同流动相的分离度比较

流动相	分离效果
乙腈—水（20：80）	各峰分离效果不好，分离度低
甲醇—水（20：80）	各峰分离效果不好，分离度比较低
乙腈—0.3%磷酸溶液	各峰分离效果较好，分离度较高

试验结果表明采用乙腈—0.3%磷酸溶液流动相分离较好，梯度洗脱程序如下

	A相（0.3%磷酸溶液）	B相（乙腈）
0 min	90%	10%
16min	80%	20%
35min	55%	45%
60min	25%	75%

2.2.2本试验检测波长分别采用203nm、230nm、250nm、270nm，以找出一个最优的检测波长。

波长（nm）	吸收度
203	吸收度低，峰面积小
230	吸收度低，峰面积小
250	吸收度较低，峰面积较小
270	吸收度较好，峰面积较大

试验结果表明，检测波长设为270nm，吸收度较好，峰面积较大。本试验采用270nm作为检测波长。

指纹图谱如图1。

图1参仙升脉口服液成品指纹图谱

3测定方法：

将供试品用滤纸过滤，精密量取续虑液2ml，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径约0.8cm，长15cm，柱上端加中性氧化铝0.5g，用水50ml预洗）以水50ml洗脱，弃去水液，再用10%乙醇洗脱，弃去洗脱液，续用70%乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用20%乙腈溶解，转移至10ml量瓶内，定容至刻度。用0.45ul微孔滤膜过滤后进样，进样量5ul。

4测得各中间体图谱如下：

[-----A----] 图2 [--B--] [---C---]

[-----A----] 图3 [--B--] [---C---]

[-----A----] 图4 [--B--] [---C---]

图2（参仙升脉口服液中间体1）未用活性碳处理，未灭菌

图3（参仙升脉口服液中间体2）活性碳处理，未灭菌

图4（参仙升脉口服液中间体3）活性碳处理，灭菌

5结果：

将上述指纹图谱分为三个特征区（A、B、C）对比发现，图2，图3的A区B区峰面积比发生了变化，图3图4图形变化不明显（图4分离度稍差）。由此可知，用活性炭脱色吸附的过程对各成分有明显的影响，此过程属于敏感步骤，实际生产中应对活性碳的用量，吸附的作用时间加以严格的控制。而灭菌的过程则不属于敏感的步骤。但是，灭菌到底在多大时间长度，多大温度幅度上对各成分无影响尚不可知。

6讨论

6.1为了保证各批产品质量的一致性，除了对生产过程中的敏感步骤加以严格的控制，还要保证所用药材来源相同，即同一产地，同一采收季节，同一炮制方法。

6.2采用HPLC指纹图谱技术监控参仙升脉口服液的生产过程，能全面，直观地反映产品中各主要化学成分的变化。根据这种变化，有针对地对生产工艺中敏感的步骤进行严格的控制，可使生产更加科学、合理，为产品的质量的一致性提供了保证，增加了产品的科技含量。

参考文献

[1] 刘建娣，梁琼麟，罗国安等. 刺五加注射液指纹图谱的建立及其在质量控制中的应用[J]. 中成药，2006，28（1）：3-4.