酚试剂分光光度法测定空气中的甲醛含量

有谁做过阿，过来帮帮我了，校准曲线的斜率大致是多少啊？计算因子是很关键的啦，我是刚开始做没经验，实验条件也不是很好，所以希望大家能给点意见了

我没做过这个，不过一次偶尔看过这个方法，传上来你看看吧，不知道对你有没有帮助：
一、4-氨基-3-联氨-5-疏基-1，2，4-三氮杂茂（简称AHMT）法定量：
1 应用范围

同薄层色谱法

2 原理

化妆品中甲醛与4-氨基-3-联氨-5-巯基-1，2，4-三氮杂茂在碱性条件下缩合，然后经高碘酸钾氧化成个巯基-5-三氮杂茂[4，3，b]四氮杂苯的紫红色化合物，其色泽深浅与甲醛含量成正比。

3试剂

3.1 AHMT溶液：称取4-氨基-3-联氨-5-疏基-1，2，4-三氮杂茂0.5g溶于100ml 0.5mo1／L盐酸中。此溶液置于棕色瓶中保存。

3.2 高碘酸钾溶液：称取0.75gKIO4，加100ml0.2mo1／L氢氧化钾置于水浴上加热溶解。

3.3 5mol／L Na0H溶液，AR。

3.4 甲醛标准贮备溶液：与（一）薄层色谱定性法同。

3.5甲醛标准溶液：与（一）薄层色谱定性法同。

4分析步骤

4.1样品预处理

与（一）薄层色谱定性法同。

4.2 测定

分别取2.0ml待测溶液置于具塞比色管中，加入2ml 5mo1／L的NaOH溶液，2ml AHMT溶液，轻轻颠倒混匀三次后(1)，于室温下放置20min。然后加入2m1高碘酸钾溶液，轻轻振摇（避免激烈摇动，以免产生气泡）混匀(2)，于550nm处测定待测溶液的吸光度。根据标准曲线求出待测溶液中甲醛的浓度。

4.3标准曲线的绘制：分别取甲醛标准液0.50、1.00，1.50、2.00ml置于比色管中，加水补足至2m1。以下按样品溶液分析方法操作。根据各标准溶液中甲醛的浓度与吸光度的对应关系绘制标准曲线。

注解：

（1）在加AHMT溶液后应轻轻颠倒混匀，否则会影响下一步缩合反应，使结果产生误差。

（2）若样品溶液中含有大量的碱土金属，样品在显色时可能产生混浊，加少量EDTA即可消除影响。

二、薄层色谱法(TLC)：
1 适用范围

本方法适用于化妆品中六氯酚，双二氯酚硫醚、二氯酚和三溴水杨酞替苯胺的定性。

2 原理

样品经预处理后，样液中的卤代酚用的薄层色谱法进行分离、呈色，然后与标准斑点比较，进行定性。

3 试剂

3.1 乙醇：分析纯。

3.2 己烷：分析纯。

3.3 丙酮：分析纯。

3.4 无水硫酸钠：分析纯。

3. 5硫酸（lmol／L）。

3.6 六氯酚标准溶液(1)：准确称取用苯重结晶的六氯酚50.0mg，加丙酮溶解后移入50ml容量瓶中并定容至刻度，避光保存。此溶液1ml含1.0mg六氯酚。

3.7 双二氯酚硫醚(2)：准确称取用苯重结晶的双二氯酚硫醚50.omg，用丙酮溶解，移入50ml容量瓶中并定容至刻度，避光保存。此溶液lml含1.0mg二氯酚硫醚。

3.8双氯酚标准溶液(3)：准确称取用甲苯重结晶的双氯酚50.0mg，用丙酮溶解，移入50ml容量瓶中，定容至刻度。此溶液1.0ml含1.0mg二氯酚，避光保存。

3.9三溴水杨酞替苯胺(4)：准确称取用丙酮重结晶的三溴水杨酞替苯胺50.0mg，用丙酮溶解，移入50ml容量瓶中并定容至刻度。此溶液1.0ml含1.0mg三溴水杨酞替苯胺，避光保存。

3.10 乙醇一己烷（1+9）。

3.ll离子交换纤维素(5)：将DEAE（二乙基氨基乙醇）纤维素，（交换量约0.9meg／g），浸泡于50倍量的0.lmol/L的盐酸中，用玻璃漏斗过滤，用20倍量的丙酮，30倍量的0.lmo1／L氢氧化钠溶液淋洗至OH-型后，用水洗成中性，再用20倍量的丙酮淋洗，弃去丙酮。空气中干燥。保存在乙醇十己烷（l＋9）溶液中。

3.12 硅胶：薄层用硅胶中加有荧光剂。

3.13碱性氧化铝。

3.14展开剂：石油醚+冰乙酸（89+12）

3.15显色剂。

3.15.1 浓氨水。

3.15.2 2％4-氨基安替比林溶液：称取2g4-氨基安替比林用乙醇溶解稀释至100ml。

3.15.3 8％铁氰化钾溶液（K3［Fe（CN）6]）。

3.15.4 2％三氯化铁溶液（FeCl3·6H20）：称取2g三氯化铁用乙醇溶解稀释至100ml。

3.15.5 2％铁氰化钾溶液。

3.16 盐酸+丙酮溶液：9.5ml盐酸加丙酮至100ml（临用前配制）。

4 仪器

4.1 层析柱：、内径10mm、高200mm的具塞玻璃管的下端熔接玻璃过滤器或塞有玻璃棉，

4.2 紫外灯，具有8W功率,254nm波长。

4.3离子交换柱(6)：将离子交换纤维素用乙醇+已烷（3.11）配成混悬液，：用湿式填充法缓慢倾入层析柱中，以防止产生气泡，填充高度80mm。

5 分析步骤

5.1样品预处理（7）（8）

称取含卤化酚0.5mg的样品（扑粉，除臭砂芯、香波约10g，膏霜约0.5g），置于100ml玻璃瓶中，连接好回流冷凝器：加50ml乙醇+已烷（1+9）溶液，2ml 1mol/L硫酸，于水浴上加热3min，冷却后用3号玻璃砂芯漏斗过滤，用乙醇+己烷（1+9）溶液5ml洗沉淀，滤液移入分液漏斗中静置分层。取己烷层用10ml水洗涤，无水硫酸钠脱水后以0.5ml/min的流速注入离子交换柱（10）。用50ml己烷洗涤。去除油脂等干扰物质，弃去淋洗液，依次用10ml丙酮、2ml丙酮+盐酸溶液（3.16），20ml丙酮洗脱（11）。溶出液在水溶上加热蒸去有机溶媒，加5ml乙醇，加热使盐酸挥发，重复此操作2次。残渣加2.0ml丙酮溶解，作为样品待测溶液。

5.2 制备薄层板

5.2.1硅胶薄层板：硅胶30g，加水约65ml，搅拌均匀，涂布成厚度0.25～0.3mm的薄层板，105～l10℃干燥30min，置干燥器中保存。

5.2.2含硝酸银的氧化铝薄层板：0.12g AgNO3，加少量水溶解，加30ml乙醇、20g氧化铝，调成浆状物，涂布厚度为0.25～O.3mm的薄层板，空气中干燥、于干燥器中避光保存。

5.3 点样

距薄层板底边2cm处将5～20μl待测溶液从左到右点样（12），两点间隔约1cm，薄员板.的右边点2μl标准溶液，空气中干燥。

5.4 展开

取适量展开剂（3.14）倾人展开槽中，将薄层板放入展开剂中，待溶剂上升约10cm，取出薄层板，空气中干燥。

5.5显色（13）

在薄层板上顺序喷雾显色剂3.15.1～3.15.3或3.15.4～3.15.5，六氯酚在显色剂3.15.1～3.15.3中为红色，在3.15.4～3.15.5中为蓝色斑点。二氯酚硫醚和三溴水杨酞替苯胺在3.15.1～3.15.5中为紫色,在3.15.4～3.15.5中呈现蓝色斑点。

用加荧光剂的硅胶薄层板测定时，各种卤代酚在紫外线照射下，在各自的Rf 值位置上以荧光为背景呈现出暗黑色的斑点。

注解：

（1）六氯[2，2′-Metbylenebis（3，4，6-trichlorophenol）]（C13H6Cl6O2，406.93）是无臭、白色结晶性粉末，易溶液于丙酮、苯、乙醇、乙醚、氯仿等有机溶媒，不溶于水。

六氯酚具有二个羟基，在碱性下其中一个羟基和碱反应生成酚盐，另一个羟基具有杀菌效果。对革兰氏阳性菌有特效；对革兰氏阴性菌抑菌效果弱；对耐氧菌、芽胞菌、霉菌及螺旋体无效，石炭酸系数是125。一般添加在肥皂、膏霜、婴儿扑粉、洗发粉、洗发香波、生发水等化妆品中。本品是光敏物质之一。

（2）双二氯酚硫[2，2′thiobis（4，6-dichlorlphenol）]（C12H6Cl4S，356.06）是无臭白色的结晶粉末,易溶于丙酮、乙醚，微溶于乙醇、氯仿，不溶于水。

用硝酸银+氧化铝薄层板时，放置在距紫外灯10cm以内照射30min，如有卤代酚可观察到灰～灰黑色斑点，比较样品溶液和标准溶液斑点的Rf值及色调，进行定性（12、13）。见表2-3-18。

表 2-3-18 各卤代酚的Rf 值和灵敏度
硅胶板（a）    含0.4%的氧化铝板
化合物名称    Rf 值    颜色和灵敏度(μg)    Rf 值    灵敏度(μg)(UV254nm)
        氨基比林法    三氯化铁法       
六氯酚    0.44    红(5)    蓝(3)    0.56    (1)
二氯酚    0.15    红(5)    蓝(3)    0.17    (1)
溴氯化酚    0.48    红紫(5)    蓝(1)    0.64    (1)
双二氯酚硫醚    0.43    紫(5)    蓝(3)    0.52    (1)
水杨酸    0.08    红(5)    蓝(5)    /    /
四溴甲酚    0.41    紫(5)    蓝(1)    0.46    (5)
三溴水扬酰替苯胺    0.43    紫(5)    蓝(5)    0.47    (5)
对酚磺酸锌    0    红(5)    蓝(5)    /    /
            蓝(3)       


注 ( ) 内为灵敏度, μg。

（a）展开剂：石油醚+醋酸（88+12）。

双二氯酚硫醚具有二个羟基，过量的碱只和一个羟基反应，所以在碱性下仍具有杀菌效果，对革兰氏阳性菌有效。主要添加在消毒肥皂中。本品也是光敏物质。

（3）双氯酚［2，2.Methylenebis （4-chlorophenol）］（C13H8Cl6O2，269.12）商品名称CompoundG4（SindarCorp）为白色粉末，稍有酚的臭味，溶于丙酮、乙醇，不溶于水。双氯酚是光敏物质。

（4）三溴水杨酰替苯胺（3，4′，5-Tribromosalicylicylanilide，C13H8O2NBr3，449.94）是白色细微粉末，有酚臭味，易溶于丙酮，微溶于甲醇、氯仿，不溶于水和苯。

（5）Br0wn 公司生产的DEAE纤维素，交换容量是0.89～9.2meq／g（Cl-型）。Serra公司生产的DEAE纤维素交换容量较小，约0.68meq／g，粒度也细。前者较适用。

（6）填充离子交换纤维素后，在层析管内插入直径1.5mm、长约250m的细玻璃捧，上下慢慢搅动，使纤维素悬浊，能有效地去除气泡。

（7）卤化酚在DEAE-纤维素层析柱和乙醇+己烷固-液相中进行分配，以除去油分等干扰。用丙酮+盐酸-丙酮溶液能定量地溶出六氯酚等杀菌剂。

（8）化妆品与特殊功能化妆品中六氯酚的使用量有很大差别。统一规定称样量是很困难的。膏霜类样品称取量大于lg时，前处理效果不理

不好意思，由于刚才那个表 2-3-18 各卤代酚的Rf 值和灵敏度
是在世台南弄了。所以，我把那个表又在Word文档里编辑了一下，以福建的形式传上来，你看看吧！~
表 2-3-18 各卤代酚的Rf 值和灵敏度

谢谢啦，发了这么多。
不过我用的是化学分析方法，不是色谱法。方法比较简单，但是结果却相差蛮大。很是苦恼。不知道有谁做过，能否发一组数据和对应的标准曲线，让我参考参考啊？盼相助！

用光度法做还是比较好做的，我就做过几次，结果还可以．

是吗？能给一组数据和对应的标准曲线吗？我想参考一下

曲线斜率在0.38左右,温度和放置时间都会影响实验结果

在0.35左右吧！我做的都在这个范围，温度和放置时间都会影响结果，我在做的时候，15min的斜率不好，放置20-25min的时候，还可以，可能是我们气温太低的缘故吧！！！！

我做过！线性是0.9999！试剂很贵！5g就500多块！而且很毒！还有一种其他方法啦！