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第1楼2011/11/30
建立降糖类中成药及保健品中非法添加化学药品的快速检测方法。方法 以HPLC 法进行初步筛选。结果 筛选出的样品经DAD光谱图确认是否为非法添加的样品。结论该方法准确、快速、灵敏度高, 能对降糖类中成药及保健品非法添加化学药品进行快速筛选。
关键词 HPLC; 快速筛选; 降糖类中成药及保健品; 非法添加; 化学药品
近年来,随着人们生活饮食的不规律,糖尿病发病呈逐年上升趋势。一些本来没有降糖作用的保健品非法加入了西药降糖类成分,所以这些保健品具备了很好的降糖作用。一些不良商家利用这点,大肆宣讲,蒙蔽广大人民群众。目前市场上添加的西药成分是格列本脲、格列奇特、盐酸比格列酮、格列吡嗪、盐酸苯乙双胍等。患者在不知情的情况下长期使用, 会引起肝肾功能严重损害、低血糖反应、血细胞减少等不良反应[ 1] 。本文利用HPLC法检测了市场上几种降糖类保健品,有无添加了违禁成分。
1 仪器与试剂
Dionex-3000高效液相色谱仪,配有DAD检测器;MiIIipore Simpak 超纯水器(美国M illipore公司); Mettler Toledo AG245 电子天平( 瑞士M ettler公司); KQ-250超声波清洗器( 江苏昆山超声仪器);乙腈、甲醇为色谱纯试剂;其他试剂均为分析纯(上海国药集团化学试剂有限公司) ; 格列吡嗪( 含量99.4% )、格列喹酮、格列本脲、格列齐特、格列美脲对照品均购于中国药品生物制品检定所.
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第2楼2011/11/30
2 方法与结果
2.1 色谱条件安捷伦C18(250×4.6mm,5m);柱温:30℃;检测器:DAD;检测波长:235nm ;流速:1.0ml/min;以甲醇为流动相A,以0.01mol/L的乙酸铵溶液为B,按下表进行梯度洗脱:
时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%)
0 55 45
10 60 40
30 70 30
40 90 10
60 55 45
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液的制备 密称取格列本脲、格列吡嗪、格列喹酮、格列美脲、瑞格列尔、盐酸吡格列酮、格列齐特对照品,加甲醇制成混合对照品溶液
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品0.5g,置50ml量瓶中,加三氯甲烷20ml,超声处理10min,滤过(滤渣备用),取滤液5ml,蒸干,残渣加甲醇5ml使溶解,用0.45m的微孔滤膜滤过,滤液作为供试品,即得。
2.2.3系统适应性实验:取混合对照溶液进样, 记录色谱图。
2.2.46批样品的测定 取供试品溶液10微升进样, 结合色谱保留时间、紫外光谱信息, 可以证实上述样品中没有非法添加
了降糖类西药成分。结果见图。
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第3楼2011/11/30
3 讨论
3.1 检测波长的选择是通过二极管阵列检测器在200至400nm 的范围内对样品进行光谱扫描, 提取7成分不同波长处的三维光谱图进行对比分析而确定的。它们在220至240 nm 有较强吸收且吸收光谱曲线较平滑, 235nm同时是溶剂峰干扰最小处, 故选择235 nm 作为测定波长[2]。此波长能使7种成分都有较灵敏且近似的响应值, 溶剂峰的干扰也最小。
3.2 由于7种降糖化合物的极性差异较大, 等度洗脱条件下难以实现同时分离。而采用梯度洗脱的方法, 在优化的梯度洗脱条件下, 40min内即完成了7种降糖化合物的分离检测。
3.3 对于检测的样品,虽然保留时间与对照品较为一致,但二者的DAD光谱图不同,可以看出没有添加非法违禁西药降糖类物质。
参考文献:
[1]徐浩. 临床用药须知[ M].天津:天津电子出版社,2005:1179
[2]吴卫涛.高效液相色谱法同时鉴定保健品中非法添加的6种降糖药成分[J]现代中西医结合杂志,2009,18(22):2703