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迪马AAA氨基酸柱这样测半胱氨酸可以吗？？

省部重点实验室

2012/03/13

先简单介绍——————做氨基酸检测
想了解详细资料，请自己到迪马科技官网自行下载

PITC柱前衍生法

18种天然氨基酸分析(异硫氰酸苯酯柱前衍生法)

——序列号: D024

1 适用范围

该方法适用于氨基酸注射液、动植物性食品和饲料中 Asp(天冬氨酸)、Glu(谷氨
酸)、Ser(丝氨酸)、Gly(甘氨酸)、His(组氨酸)、Arg(精氨酸)、Thr(苏氨酸)、Ala(丙
氨酸)、Pro(脯氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Val(缬氨酸)、Met(蛋氨酸)、Cys(胱氨酸)、
Ile(异亮氨酸)、Leu(亮氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、Trp(色氨酸)、 Lys(赖氨酸)等 18
种天然氨基酸的检测

2 溶液配制

氨基酸储备液：称取一定量氨基酸标准品，用 0.1 mol/L HCl水溶液溶解，胱氨酸为0.01 mol/L，酪氨酸为0.02 mol/L，其他氨基酸为 0.05 mol/L

氨基酸使用液：将储备液用0.1 mol/L HCl水溶液稀释，得到浓度为 0.002 mol/L 的氨基酸单标和混标
内标液：以正亮氨酸作为内标物。称取一定量正亮氨酸，溶于 0.1 mol/L HCl水溶液，得到 0.02 mol/L 的正亮氨酸内标液

异硫氰酸苯酯溶液：将 250 μl 异硫氰酸苯酯用乙腈乙腈定容至 10 ml，得到0.2 mol/L 异硫氰酸苯酯溶液

三乙胺溶液：将1.4 ml三乙胺用乙腈定容至 10 ml，得到1.0 mol/L 三乙胺溶液

标准溶液衍生化

量取 200 µl氨基酸混合标准溶液(每种组分浓度均为 0.002 mol/L)，置于 1.5 ml塑料离心管中，准确加入20 μl正亮氨酸内标溶液[2]、100 µl 1 mol/L三乙胺乙腈溶液和100 µl 0.2 mol/L 异硫氰酸苯酯乙腈溶液，混匀，室温反应 1 小时，然后加入正己烷 400 µl，旋紧盖子后剧烈振荡5~10 s，静置分层，取 200 µl下层溶液与 800 µl水混合[3]，0.22 µm 针式过滤器过滤，待分析。

注：
[1] 通过控制原始样品质量或稀释等方法，使样品溶液中的氨基酸总量不超过0.04 mol/L 或3.0 g/L(两者中取最小值)

[2] 只有采用内标法分析时，才需要加入正亮氨酸作为内标物

[3] 衍生得到的样品溶液中含有50%的乙腈，这与流动相溶剂体系存在较大差距，因而需要加水稀释，否则会引起峰前沿或分叉

迪马科技AAA氨基酸柱子

洗脱条件

分
该帖子已被版主-Eda加2积分，加2经验;加分理由:迪马奖励积分

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省部重点实验室

第1楼2012/03/13

迪马科技的氨基酸效果图
官方的
上面有胱氨酸
但是我们实验室检测样不做胱氨酸要做半管氨酸

0

省部重点实验室

第2楼2012/03/13

半胱氨酸的检测方法按照迪马官方的检测报告上的处理办法

半胱氨酸的检测效果图【因为是到最后实验结束后才想起来要做一下半胱氨酸的检测结果，所以柱子已经用得分析效果不是很好，几百个样品已经检测过了】

标准方程如下

0

happy爱米粒

第3楼2012/03/13

峰分离度和柱校都很棒，就是线性不太好，液相应该可以做到三个九的

0

省部重点实验室

第4楼2012/03/13

可是我的问题是
用这种方法可以检测半胱氨酸 (⊙_⊙)？

会不会在处理的时候半胱氨酸转变成胱氨酸

发生了氧化作用
木有才(xgy2005) 发表:峰分离度和柱校都很棒，就是线性不太好，液相应该可以做到三个九的

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happy爱米粒

第5楼2012/03/13

是否可以考虑预处理时加入抗氧化剂保护一下？
省部重点实验室(gl19860312) 发表:可是我的问题是
用这种方法可以检测半胱氨酸 (⊙_⊙)？

会不会在处理的时候半胱氨酸转变成胱氨酸

发生了氧化作用

0

省部重点实验室

第6楼2012/03/14

加入抗氧化剂是不是又属于引入了新的杂杂质了( ⊙ o ⊙ )啊！
木有才(xgy2005) 发表:是否可以考虑预处理时加入抗氧化剂保护一下？

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省部重点实验室

第7楼2012/03/14

这个问题还是邀请迪马的科技技术分析人员快来分析分析吧

苦恼中................

0

happy爱米粒

第8楼2012/03/14

这中杂质很好分离的，不会影响目标物
省部重点实验室(gl19860312) 发表:加入抗氧化剂是不是又属于引入了新的杂杂质了( ⊙ o ⊙ )啊！

0

省部重点实验室

第9楼2012/03/14

迪马科技的技术人员(⊙o⊙)？
还不出来解答一下？？

0

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