文献检索任务八十六（86.1-86.10）

应助达人

86.10 DFP在大鼠体内的药代动力学研究

作者：巩泉泉（山东大学）

摘要：【目的】
　　 去铁酮(deferiprone,DFP)是一种化学合成金属螯合剂，化学名称为1，2-二甲基-3-羟基-4-吡啶酮。去铁酮在临床常用于治疗铁负荷过多的地中海贫血患者，是目前唯一可以用于口服的金属螯合剂，对铁和铝有较强的螯合作用。低、中、高三种不同浓度的去铁酮药代动力学、组织分布与血浆蛋白结合率研究国内外均未见报道。本实验通过建立一种简单、快速、准确的测定大鼠血浆及组织中DFP的高效液相色谱-紫外检测法，用于DFP在大鼠体内的药代动力学、组织分布与血浆蛋白结合率研究，为进一步临床药代学研究和合理用药提供理论依据。
　　 【方法】
　　 1、DFP在大鼠体内的药代动力学实验
　　 1.1实验动物处理
　　 取Wistar大鼠15只，随机分为3组：低剂量组、中剂量组、高剂量组。实验前平衡3天，饥饿12h后以灌胃方式分别给DFP。在给药后不同时间点于颈静脉窦处取血0.25ml，肝素抗凝，制成血浆，血浆经处理后取20μl进样测定。
　　 1.2色谱条件
　　 色谱柱：Diamonsil®钻石C18（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱；流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液（0.05mol·L-1磷酸氢二钠、5mmol·L-l庚烷磺酸钠和2 mmol·L-1EDTA，磷酸调pH=3.0）=8:92（v/v）；流速：1.0 ml·min-1；检测波长：278nm；检测温度：室温；进样量：20μl。
　　 2DFP在大鼠体内组织分布实验
　　 2.1实验动物处理
　　 将20只大鼠随机分为4组（空白组；10min组；60min组；360min组），每组5只。饥饿12h后，空白组给1ml生理盐水，其余各组灌胃给DFP。各组于不同时间点断头处死，取其各组织。用生理盐水将组织样品冲洗干净，滤纸吸干，加入生理盐水制成20％的组织匀浆，离心后，上清液经处理后取20μl进样。
　　 2.2色谱条件
　　 色谱柱：Diamonsil®钻石Cl8（250 minx4.6 mm，5μm）色谱柱；流动相：乙腈.磷酸盐缓冲液（0.05 mol·L-1磷酸氢二钠、5mmol·L-1庚烷磺酸钠和2 mmol·L-1EDTA，磷酸调pH=3.0）=8:92或10:90（v/v）；流速：1.0 ml·min1l；检测波长：278nm；检测温度：室温；进样量：20μl。
　　 3DFP的大鼠血浆蛋白结合率实验
　　 3.1实验动物处理
　　 取健康雄性Wistar大鼠10只，处死，取血，肝素抗凝，制成血浆。透析内液和透析外液经处理后进样20μl。
　　 3.2色谱条件
　　 同“2.2色谱条件”。
　　 3.3透析袋对药物的吸附实验
　　 于透析袋内加入1ml空白透析液，放入含有10ml DFP溶液的广口瓶中，盖紧塞子，37℃生化培养箱中放置4h至其平衡，然后测定透析袋外的药物浓度，计算透析膜对药物的吸附率。
　　 3.4平衡时间的考察和血浆蛋白结合率的测定
　　 于透析袋中加入1 ml空白血浆，置广口瓶中悬浮于10ml不同浓度的DFP透析液中，放置于37℃的生化培养箱中。于一定时间点，测定透析袋内、外的DFP浓度，计算DFP的血浆蛋白结合率。
　　 4数据处理与分析
　　 DAS2.0药代动力学智能分析软件计算药代动力学参数和房室模型；SPSS13.0版统计学分析软件进行统计描述和t检验。
　　 【结果】
　　 1DFP在大鼠体内药代动力学实验结果
　　 1.1方法学研究结果
　　 取DFP对照品溶液经光谱扫描，本实验选用278nm为检测波长。DFP在本实验条件的保留时间为10.8min，在1～120mg·L-1范围内线性良好(r=0.9999)，低、中、高三种浓度绝对回收率均大于98.71％，相对回收率在99.04％～100.6％，日内变异RSD均小于0.74％，日间变异RSD均小于1.16％，于4℃存放1周和-20℃存放1个月后RSD均小于1.72％，稳定性较好。
　　 1.2药代动力学结果
　　 大鼠单次以灌胃方式给DFP后体内的药动学过程符合二室开放模型。低、中、高三种剂量的平均吸收半衰期为18.90、16.08、12.69min，其一级吸收速率Ka为0.05～0.17 min-1；低、中、高三种剂量的平均分布半衰期t1/2a分别为23.33、22.22、20.88min，其表观分布容积分别为0.70、0.62、0.41 L·kg-1；低、中、高三种剂量的清除率分别为0.017、0.021、0.016 L·min-1kg-1，平均消除半衰期t1/2β分别为53.32、50.87、46.34min；给低、中、高三种剂量DFP后，0-∞时间内药时曲线下面积分别为2380.1、3519.4、8788.7 mg·L-1.min。统计矩法所得低、中、高三种剂量的平均滞留时间MRT(0-1)分别为109.81、95.28、88.70min，血浆末端清除半衰期t1/2z分别为140.28、93.40、63.27min，达到最大血药浓度的时间分别为36.00、48.00、54.00min，最大血药浓度Cmax分别为21.60、37.13、83.25 mg·L-1，表观分布容积Vz分别为2.80、2.49、1.41 L·kg-t，清除率CLz分别为0.014、0.018、0.016 L·min-1·kg-1，得到的药时曲线下面积AUC(0-t)值分别为2276.96、3580.54、8933.31 mg·L-1·min。
　　 2DFP在大鼠体内组织分布实验结果
　　 2.1方法学研究结果
　　 DFP在小肠的色谱条件下保留时间为10.8 min，在其他组织的色谱条件下保留时间为7.8min。各组织中的DFP在一定浓度范围内线性关系良好(r>0.9995)，低、中、高三种浓度绝对回收率均大于86.0％，相对回收率在97.1％～109.6％，日内变异RSD均小于3.33％，日间变异RSD均小于4.98％，于4℃存放1周和-20℃存放1个月后RSD均小于5.49％，稳定性较好。
　　 2.2组织分布结果
　　 本实验给大鼠单次灌胃70mg·kg-1DFP，10min后在包括脑和睾丸的各组织中，均检测出有DFP分布。给药10min和60min后，胃中DFP的浓度为244.81mg·kg-1和58.86 mg·kg-l，远远高于同组小肠中DFP含量（P<0.001）。给药60min和360 min后在肝脏中DFP的平均含量为359.22 mg·kg-1和56.80 mg·kg-1，显著高于其他组织(P<0.001)。给药360min后，肾中DFP的含量为10.13 mg·kg-1，显著高于除肝脏外其他组织中DFP含量(P<0.005)。
　　 3DFP的大鼠血浆蛋白结合率实验结果
　　 3.1方法学研究结果
　　 DFP在透析内液的色谱条件下保留时间为10.8 min，在透析外液的色谱条件下保留时间为7.8 min。DFP在透析内、外液中一定浓度范围内线性关系良好（r>0.9998），低、中、高三种浓度绝对回收率均大于98.71％，相对回收率在99.04～101.27％，日内变异RSD均小于0.74％，日间变异RSD均小于1.15％，其于37℃存放8h后RSD均小于1.94％，短期稳定性较好，于4℃存放1周和-20℃存放1个月后RSD均小于1.72％，长期稳定性较好。
　　 3.2血浆蛋白结合率结果
　　 低、中、高三种浓度下，透析袋对DFP的平均吸附率分别为4.53％，3.66％和3.41％。在37℃条件下，DFP经2h达到透析平衡，其血浆蛋白结合率为4.25‰～5.31％，各浓度组间的血浆蛋白结合率比较差异无统计学意义（P>0.05）。
　　 【结论】
　　 1本实验建立的测定大鼠血浆、组织匀浆和透析液中DFP含量的高效液相色谱法具有快速、准确、灵敏，重复性好等优点，可用于DFP在大鼠体内的药代动力学研究、组织分布和血浆蛋白结合率的研究。
　　 2灌胃给药后，DFP在大鼠体内吸收快、分布广、消除快，其药代动力学过程符合二室模型特征。
　　 3灌胃给药后，DFP在大鼠体内分布广泛，各主要脏器组织均有分布。
　　 4DFP血浆蛋白结合率较低，属于低血浆蛋白结合药物，主要以游离形式存在而发挥药效。

谱图：