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求助:关于葡聚糖凝胶柱检查高分子聚合物

凝胶色谱(GPC)

  • 使用的是大连依力特的sephadex-G10葡聚糖凝胶柱(新色谱柱),用流动相B纯化水进样蓝色葡聚糖1mg/ml,200ul,峰形总是很差,柱效达不到500,但是用流动相A磷酸盐缓冲液pH7.0,蓝色葡聚糖的峰形就很好,柱效也能有1000多。想请问一下:是纯水的问题还是色谱柱的问题呢?纯化水是经过milli-Q仪器过滤的。在流动相B纯化水条件下,进样阿莫西林对照品,色谱峰严重拖尾,峰形基本呈三角形。第一次做青霉素类的高分子聚合物试验,没有经验,还请各位高手多多提点,谢谢!
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  • 小不董

    第1楼2012/09/27

    应助达人

    使用水相的GPC是一定要加缓冲盐,因为样品在水相中,很可能受到离子干扰,和柱子中的填料之间也容易有化学键的作用,而我们GPC是需要将这些化学键去除,只保留体积排阻效应,这样才能达到GPC的效果, 正确得到分子量分布的结果。
    你可以参考下大连依力特的sephadex-G10葡聚糖凝胶柱的说明书和他的经典应用介绍,他是使用什么缓冲盐及其浓度,再根据你样品,选择合适盐来消除离子效应。还就是看样品是否具有酸碱性,是否需要调节pH。

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  • lindaraul

    第2楼2012/09/27

    谢谢您的解答,我现在是做的青霉素类高分子聚合物的检查,药典方法里面就是规定了用纯水做流动相测定对照品溶液,所以现在没办法往里面加缓冲盐。已经按照说明书的介绍,用0.2M NaOH&0.2M NaCl活化了色谱柱,用水做流动相的时候,峰形还是不好。不知道是不是我在哪个细节部分没有处理好。

    小不董(doxw0323) 发表:使用水相的GPC是一定要加缓冲盐,因为样品在水相中,很可能受到离子干扰,和柱子中的填料之间也容易有化学键的作用,而我们GPC是需要将这些化学键去除,只保留体积排阻效应,这样才能达到GPC的效果, 正确得到分子量分布的结果。
    你可以参考下大连依力特的sephadex-G10葡聚糖凝胶柱的说明书和他的经典应用介绍,他是使用什么缓冲盐及其浓度,再根据你样品,选择合适盐来消除离子效应。还就是看样品是否具有酸碱性,是否需要调节pH。

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  • 小不董

    第3楼2012/09/27

    应助达人

    为啥用0.2M NaOH&0.2M NaCl活化了色谱柱?很高的浓度哟,pH也很大,他的说明书是这样写的?耐的pH值那么高?用NaCl对不锈钢管路也不好呀。

    lindaraul(lindaraul) 发表:谢谢您的解答,我现在是做的青霉素类高分子聚合物的检查,药典方法里面就是规定了用纯水做流动相测定对照品溶液,所以现在没办法往里面加缓冲盐。已经按照说明书的介绍,用0.2M NaOH&0.2M NaCl活化了色谱柱,用水做流动相的时候,峰形还是不好。不知道是不是我在哪个细节部分没有处理好。

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  • lindaraul

    第4楼2012/09/27

    说明书中是有提到用氢氧化钠的氯化钠,我也是怕pH太高,所以降低了浓度。

    小不董(doxw0323) 发表:为啥用0.2M NaOH&0.2M NaCl活化了色谱柱?很高的浓度哟,pH也很大,他的说明书是这样写的?耐的pH值那么高?用NaCl对不锈钢管路也不好呀。

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  • histone1

    第5楼2012/09/28

    能不能把药典的方法贴上来看看啊?

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  • chdan

    第6楼2013/04/23

    我们公司也是用的依利特的凝胶柱做的,用的内径是14mm,分离度,理论塔板数也可以达到,就是青霉素对照液的峰型很丑。内径是10mm的达不到药典上的要求。。

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  • guoshuang520

    第7楼2014/04/02

    收购废旧色谱柱 qq324399498

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  • 小不董

    第8楼2014/04/25

    应助达人

    什么旧的都要?

    guoshuang520(guoshuang520) 发表:收购废旧色谱柱 qq324399498

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  • Insm_142cae7d

    第9楼2022/01/08

    进样量换成100试试

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