鸡蛋中三聚氰胺的检测

maggiesea

2012/11/05

私聊

厂商论坛

（Cleanert PCX, P/N: CX0603）

1 材料和方法

1.1 主要仪器和试剂
色谱柱（Venusil ASB C8，4.6*250mm，5μm，艾杰尔科技），混合型阳离子交换固相萃取柱（Cleanert PCX，60mg/3mL，艾杰尔科技），12位固相萃取装置（艾杰尔科技），高效液相色谱仪；高速离心机；超声波震荡仪；涡旋混合器；分析天平（万分之一）；溶剂过滤器（带0.45μm有机、水系过滤膜和真空泵）；乙腈（HPLC级）；三聚氰胺标准品（≥99.0%）；柠檬酸（分析纯）；庚烷磺酸钠（色谱级）；水（二次蒸馏水以上）。
1.2 色谱条件：
色谱柱：Venusil ASB C8，4.6*250mm，5μm；
流动相：乙腈∶10mM/L柠檬酸+10mM/L庚烷磺酸钠缓冲液=7∶93（pH=3.0）
检测波长：240nm；流速：1mL/min；进样20μL。

2 实验部分

2.1 三聚氰胺标准溶液配制：
称取三聚氰胺标样10.0mg，加流动相溶解定容至100mL，即得浓度为100mg/L的三聚氰胺标样溶液。将浓度为100mg/L的三聚氰胺标准溶液分别用水稀释成浓度为1mg/L 、5mg/L 、10mg/L 、15mg/L 、20mg/L的标准品溶液，用0.45μm滤膜过滤后进液相色谱检测。
2.2 1%三氯乙酸溶液溶液的配制
称取三氯乙酸1.00g，加水溶解定容至1000mL即得。
2.3 5%氨化甲醇的配制
准确量取5mL氨水和95mL甲醇，混匀后备用。
2.4 5%醋酸铅溶液的配制
称取5.0g醋酸铅，加水溶解定容至100mL即得。
2.5 混合型阳离子交换固相萃取柱（Cleanert PCX 60mg/3mL）的活化
取Cleanert PCX 固相萃取柱，以3mL甲醇，3mL水依次过柱活化，弃去流出液，备用。
2.6 加标样本处理
将鸡蛋打开搅匀，分别称取1.00g鸡蛋样本置于10mL具塞离心管中，分别加入100mg/L三聚氰胺标样溶液10μl、20μl、100μl，分别得到添加浓度为1.0mg/kg、2.0mg/kg、10.0mg/kg的样本。
往装有上述样本的具塞离心管中分别加入10mL 1%三氯乙酸溶液，2mL 5%醋酸铅溶液，摇匀，超声20分钟，8000rpm离心10分钟，全部上清液转入活化好的混合型阳离子交换固相萃取柱（Cleanert PCX，60mg/3mL），依次使用3mL水，3mL甲醇淋洗，抽干，弃去淋洗液。最后用5mL 5%的氨化甲醇洗脱（V/V），接收洗脱液，50℃氮气吹干，用1mL流动相定容，0.45μm滤膜过滤后进液相色谱检测。
另取空白鸡蛋样本1.00g，不添加三聚氰胺照上述方法处理，作为空白对照样品。

3 实验结果：
3.1 峰型与分离度
分别取鸡蛋空白样品和鸡蛋添加10ppm的样品进样，结果见图1.

图1 鸡蛋空白样品和鸡蛋添加10ppm的样品图谱

由图1可见，用该方法处理，三聚氰胺峰型对称尖锐，且与杂质分离良好
3.2 精密度
分别移取浓度为1.0mg/L、5.0mg/L的三聚氰胺标准溶液，分别连续进样6次，结果如表1所示。

表1 保留时间与峰面积的稳定性数据

浓度mg/mL	指标	1#	2#	3#	4#	5#	6#	平均值	RSD%
1.0	保留时间（min）	18.830	18.829	18.829	18.838	18.840	18.834	18.833	0.026
1.0	峰面积	89	81	84	88	84	80	84	4.286
5.0	保留时间（min）	18.949	18.952	18.947	18.949	18.950	18.946	18.949	0.011
5.0	峰面积	423	440	438	439	437	438	436	1.461

由表1结果可见，本方法具有很好的精密度和重现性。
3.3 标准校正曲线

表2 标准校正曲线实验数据

浓度 mg/kg	峰面积第1次进样	峰面积第2次进样	峰面积均值
1.0	89	79	84
5.0	423	440	431
10.0	832	844	838
15.0	1265	1299	1282
20.0	1689	1823	1756

根据以上数据计算线性方程为：y = 87.43x - 13.67， R² = 0.999 ，相关曲线见图2。

图2 浓度与峰面积的回归曲线

结果显示，该方法在1~20mg/kg范围内线性关系良好。
3.4 添加回收率

表3 添加浓度与回收率数据

添加浓度 (mg/kg)	峰面积	计算含量	回收率（%）
1.0	19.9	1.158892	115.89
1.0	21.0	1.214532	121.45
2.0	41.7	2.261587	113.08
2.0	40.8	2.216062	110.80
10.0	188.8	9.702247	97.02
10.0	219.6	11.26018	112.60