每配一次样品和对照品溶液，峰就小一次，至消失

我觉得是不是对照品已经变坏了，因为你第一面积最大，第二次面积减小了，第三次直接就没峰了。

谢谢回复哈。这个应该不是，如果变坏了，那为什么第一次配的对照品溶液到第四次进样还是稳定呢。而且新配的样品溶液也不出峰了喃，不可能这么不稳定。对照品比较贵，都只有一支，连配了三次液，剩得也不多了，后头换溶样溶剂尝试，都只能称一点点直接到样品瓶，用移液器吸液溶解。

我能考虑到的都考虑到了，实在没办法了。
麻烦看到的亲帮我判断一下，看哪里还有什么问题，或是帮我问问周围的同行，看有没有遇到过这种问题，是怎么解决的。
现在以有限的经验，只能怀疑是不是硬件出问题，想换台机子，但别人在用。而且觉得硬件出问题的可能性真心不大。
搞得很沮丧，唉。

鉴于对照品比较贵重，楼主可以用标定过的原料来进行检测，
还有你说的对照品同一支，取超过一次以上，含量多少会有变化的，如果是含有结晶水的晶体颗粒就还好，如果是粉末状的对照品，就算价格再贵，含量的确会有变化的，
处理方法上面楼主做过加标的回收吗？不知道结果如何
还有灯的能量是否正常，能完全排除仪器问题吗

这只是算一个检品，我们没有原料，没办法做。呃，我想起来了，还有皂苷总提取物对照，可以配点试一试。

对照品冷冻保存，多次取，特别是皂苷，易吸潮，称量可能也会有误差，这个我也理解，但不至于浓度差异不大，第二次配的峰面积跟第一次配的就差数量级，第三次配的根本就没峰了。

加标回收虽然没做，但取制备的没出峰的样品溶液，加点第一次配的出峰正常的对照品溶液，能出峰的。

仪器硬件问题没排除，准备换台机子试试，但感觉可能性真的不大。

其实以前最怀疑的是溶样溶剂，但自从出峰小，合格的都测不合格了，就另配溶样溶剂，至少配了不下四次，连用无水乙醇配，甚至换甲醇都试过了，还是没峰。不出峰的对照品溶液也上紫外扫描了，在205nm出吸收峰很强的。

这个原因也排除了，就彻底找不到原因了。

之前用C8后面用C18，更换方法没有做过方法验证吗？而且就算同一个样品，不同日期进样，相差是必须的

应助达人

衰减不能这么快吧

我说的出的问题，都是用同一根C18柱出的问题，现在换了柱也是一样的。现在都不是配的同一对照品溶液前后几天进样出现响应值差异的问题，这都没有问题。是前后几天配的对照品和样品溶液，浓度很接近，但峰面积越来越小，最后就没峰了哦。说对照品不稳定吧，为什么之前配的对照品溶液正常出峰，之后配的新的反而没峰了喃？说溶剂有问题吧，前后连换试剂，新配了不下5次试过了，还是不出峰。
虽然我的表述可能不清楚，但麻烦各位还是看清楚了再回复，免得耽搁您的时间。