麻仁润肠丸中木香内酯的提取和含量测定方法的建立

feixiang168

2014/08/29

私聊

中药/天然药检测

麻仁润肠丸中木香内酯的提取和含量测定方法的建立

麻仁润肠丸收载于2010年版中国药典，为黄褐色的大蜜丸；气微香，味苦、微甘。成份有火麻仁、炒苦杏仁、大黄、木香、陈皮、白芍。辅料为赋形剂蜂蜜。功能主治为润肠通便，用于肠胃积热，胸腹胀满，大便秘结。药典中仅对麻仁润肠丸中大黄中的成分大黄素和大黄酚的含量做了标准要求，为了进一步保证药品质量，完善检测指标，我们探索并建立了麻仁润肠丸中木香内酯成分的提取和含量测定。

目的：建立HPLC法测定麻仁润肠丸中木香内酯含量的方法。方法：采用岛津Wondasil C18色谱柱（4.6mm×200mm，5μm）。流动相：甲醇:乙腈：水（50:10:40），柱温38℃，流速1.0 mL/min，检测波长224nm。结果：木香内酯在31.56μg·mL^-1～1010μg·mL^-1呈良好的线性关系（r = 0.9996），平均回收率为100.9%，RSD =1.6%，麻仁润肠丸药材中木香内酯的含量为7.733mg g^-1。结论：本法灵敏，准确，重现性好，可作为麻仁润肠丸中木香内酯的含量测定方法。

材料与方法

1 材料

1.1 仪器

Agilent 1100 高效液相色谱仪，紫外检测器，安捷伦化学工作站。梅特勒-托利多电子分析天平（1/10万，德国）。超声波清洗器（昆山）。紫外可见分光光度计(850,美国PE)。

1.2 试剂

木香内酯标准品（中国药品生物制品鉴定所提供），木香对照药材（中国药品生物制品鉴定所提供），麻仁润肠丸（实验室自制及其他四个厂家）。

甲醇、乙腈为色谱纯，所用水为去离子水，其他试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 实验部分

2.1.1色谱条件

Agilent 1100 高效液相色谱仪，岛津Wondasil C18（4.6mm×200 mm， 5μm）色谱柱，紫外检测器。流动相：甲醇:乙腈：水（50:10:40）。流速：1.0mL/min。柱温：38℃。进样量：20μL。检测波长224nm。

2.1.2对照品溶液的制备

称取木香内酯对照品10.00mg，甲醇溶解，定容至10.00mL，得1.00mg·mL^-1的木香内酯对照品溶液，备用。

2.1.3样品溶液的制备

麻仁润肠丸粉碎捣烂，取药沫5g，精密称定，置于250mL具塞锥型瓶中，加50 mL甲醇浸泡12h，超声提取35min，抽滤，残渣再同法提取两次，抽滤，合并滤液，减压浓缩甲醇定容至5.00mL，进样前用0.45μm滤膜滤过，即得。

2.1.4线性关系考察

精密吸取木香内酯对照品溶液，按1:2，1:4，1:8，1:16，1:32，1:64，1:128倍比稀释，加上原液，按2.1.1项下色谱条件依法进样，测定峰面积。以峰面积为纵坐标，木香内酯的浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程。

2.1.5含量测定

精密称定麻仁润肠丸药沫，按2.1.3项下制备样品溶液，以2.1.1项下色谱条件测定，记录色谱图，用回归方程求出药丸中木香内酯的含量。

2.2方法学考察

2.2.1色谱系统适用性

在2.1.1项下色谱条件检测木香内酯对照品及麻仁润肠丸药沫，记录色谱图。

2.2.2精密度实验

用木香内酯对照品溶液重复进样5次，每次进样量为20μL。记录色谱图，计算木香内酯的峰面积RSD值。

2.2.3重复性实验

取实验室自制的麻仁润肠丸粉末3份，分别按2.1.3项下方法制备样品液并进样测定。记录色谱图，计算木香内酯的峰面积RSD值。

2.2.4稳定性实验

取实验室自制麻仁润肠丸粉末，制备样品液，分别于提取后0、8、16、32、48h进样，记录并计算木香内酯的峰面积RSD值。

2.2.5回收率实验

将样品溶液稀释2倍，取20μL注入高效液相色谱仪，测定并计算含量。取3份上述溶液，每份0.5mL，向其中分别加入0.050 mL， 0.075 mL ，0.10 mL木香内酯对照品，以甲醇补足，配制1.0mL的系列溶液，进行测定，计算回收率。

结果

3.1线性考察

回归方程为A=3635C + 55.1，r = 0.9996。结果表明，木香内酯的浓度在31.56μg·mL^-1～1010μg·mL^-1与峰面积有良好的线性关系。见图1。

3.2.1色谱适用性

根据色谱图得，木香内酯的保留时间为15.88min，其理论塔板数不低于2000，分离度为2.5。见图2。

3.2.2精密度

如附表1所示，木香内酯峰面积的RSD=1.4%，表明该方法有较好的精密度。

3.2.2重复性

经计算木香内酯峰面积的RSD =0.2%。说明本法的重复性较好，无系统误差。见表2。

3.2.2稳定性

由色谱图可计算得木香内酯的峰面积RSD =2.3%。说明木香内酯在48h内稳定。见表3。

3.2.4回收率

2倍稀释的样品溶液中木香内酯含量为70.24μg·mL^-1。见附表4，由回收率结果可知，本方法无系统误差。

3.3 含量

木香内酯的平均含量为7.733 mg·g^-1。

附图

木香内酯标准曲线

麻仁润肠丸中木香内酯分析图

木香内酯对照品图谱

附表

讨论

1 分别考察了以超声水提取、超声乙醇提取、50%乙醇水超声提取以及70%乙醇水超声提取四种制备样品液的方法，进样并检测，结果以50%乙醇水超声提取制备的样品液中木香内酯的含量最高。

2 实验中考察了梯度洗脱和等度洗脱，分别选用三个甲醇、乙腈、水梯度系统以及不同比例的甲醇-水等度系统，分别以224nm和280nm波长检测。结果于224nm检测，以甲醇、乙腈水等度系统洗脱时获得的图谱最理想。

3 线性关系考察中，1:64倍液和1:128倍液未检测出，说明本试验中的木香内酯检测限较高，可能由于本试验的提取方法还不够好，有待于进一步的研究和改进。