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色谱柱的选择实例分析——生育酚的测定

  • happytiankong1
    2015/05/12
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厂商论坛

  • 生育酚分析

    生育酚共有α、β、γ、δ四种,分子结构包括苯并杂环、一个较长的碳链,其差别仅在苯环上甲基的数量和位置,其中α-生育酚具有三个甲基,β-、γ-生育酚具有两个甲基、互为同分异构体,而δ-生育酚有一个甲基极性较弱,属脂溶性物质,同时又能溶于甲醇/水,分子量小于500,所以选色谱柱时也许有两种选择:正相柱和反相柱。填料孔径则可锁定在100Å左右。
    在实际分析中,反相C18柱仅能分出三个峰(如图一):δ峰、γ和β共同出的峰、α峰。γ和β生育酚的差别仅在于苯环上甲基的位置不同,以“分配作用”为作用模式的C18对它们选择性基本没有差异,而所用的流动相为95%以上的甲醇水溶液(甲醇含量太低时,保留时间太长),这种溶剂体系对这两种生育酚的溶解性也基本没有差异,所以γ-和β-生育酚在反相模式下无法分离。

    正相的Silica柱和氨基柱则对化合物上的基团具有选择性,像γ-和β-生育酚结构上这样细小的差别就能被分辨,从而达到分离。


    在实际分析中,C18柱常常用于常规生育酚总量测定,因为总量测定时并不需要分开γ和β生育酚;而正相柱则常用于生育酚组成的测定。
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  • happytiankong1

    第1楼2015/05/12

    (1) 反相色谱柱可以对非极性、弱极性、中等极性以及部分强极性化合物进行分离,是应用最广的色谱柱;反相色谱柱以“分配作用”保留分析物,主要以分析物在两相中的溶解性进行选择,有时不能对同分异构体和结构类似物进行分离;
    (2) 部分解离性较弱的化合物,可通过向流动相加入酸、碱、盐的形式使分子以某种稳定并且保留性强的形式存在,然后用反相柱进行分析,这种分析方法包括“离子抑制色谱”和“离子对色谱”;
    (3) 在反相分析中,C18柱是首选色谱柱,如果保留太强,可换成C8进行分析,以节约分析时间;
    (4) PLRP是以聚苯乙烯-二乙烯基苯为填料的色谱柱,为反相柱,疏水性与C18相近,但不具有次级相互作用,分析碱性化合物时不会发生拖尾。
    (5) 包括Silica、氨基柱、氰基柱在内的正相色谱柱,分别通过硅羟基、胺基、氰基与分析物中的极性基团发生极性相互作用,从而实现对分析物的保留和分离,适用于极性化合物的分离,对许多同分异构体和结构类似物也能实现较好分离。

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  • happytiankong1

    第3楼2015/05/13

    是的,所以检测VE时,绝大部分还是使用HPLC检测

    千层峰(jxyan) 发表:VE气相也能测,,HPLC更方便。。

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  • 千层峰

    第4楼2015/05/13

    是的,HPLC仪器便宜,使用成本稍高,不过适用范围大

    happytiankong1(happytiankong1) 发表: 是的,所以检测VE时,绝大部分还是使用HPLC检测

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  • happytiankong1

    第5楼2015/05/13

    其实还是使用GC划算,更省钱,一根GC毛细柱,一般都可以用2-3年。用HPLC色谱柱就不好说了,用的不好的话,导致色谱柱污染,没多久就报废了~

    千层峰(jxyan) 发表:是的,HPLC仪器便宜,使用成本稍高,不过适用范围大

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  • 千层峰

    第6楼2015/05/13

    这个柱子寿命看怎么用。。毛细柱,,一个超高温保持30min也能废了啊。。GC-FID便宜,,GCMS就贵了。
    我一根5MS,,用了3年,,测样品过万个

    happytiankong1(happytiankong1) 发表: 其实还是使用GC划算,更省钱,一根GC毛细柱,一般都可以用2-3年。用HPLC色谱柱就不好说了,用的不好的话,导致色谱柱污染,没多久就报废了~

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  • 千层峰

    第7楼2015/05/13

    这个柱子寿命看怎么用。。毛细柱,,一个超高温保持30min也能废了啊。。GC-FID便宜,,GCMS就贵了。
    我一根5MS,,用了3年,,测样品过万个

    happytiankong1(happytiankong1) 发表: 其实还是使用GC划算,更省钱,一根GC毛细柱,一般都可以用2-3年。用HPLC色谱柱就不好说了,用的不好的话,导致色谱柱污染,没多久就报废了~

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  • happytiankong1

    第8楼2015/05/13

    色谱柱的维护保养非常重要~~

    千层峰(jxyan) 发表:这个柱子寿命看怎么用。。毛细柱,,一个超高温保持30min也能废了啊。。GC-FID便宜,,GCMS就贵了。
    我一根5MS,,用了3年,,测样品过万个

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  • 999youran

    第9楼2015/05/13

    这个是主力啊,没有色谱柱,再好的仪器也不行

    happytiankong1(happytiankong1) 发表: 色谱柱的维护保养非常重要~~

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  • happytiankong1

    第10楼2015/05/14

    是的,好马配好鞍一样,在强的仪器,如果色谱柱分离性能不行,也无济于事,仪器和色谱柱相辅相成~~

    999youran(999youran) 发表: 这个是主力啊,没有色谱柱,再好的仪器也不行

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