孔雀石绿——想要看清你真不容易

栀子花开

2015/07/30

私聊

兽药/抗生素检测

1孔雀石绿简介
孔雀石绿是人工合成的有机化合物。其生产是由1摩尔分子的苯甲醛和2摩尔分子的二甲苯胺在浓盐酸混和下，加热缩合成隐色素碱，在酸性条件下加过氧化铅使其氧化，并在碱性液中沉淀出色素碱。
孔雀石绿为翠绿色有光泽的结晶，属三苯甲烷类染料。化学名称为四甲基代二氨基三苯甲烷；分子式：C23H25CIN2。极易溶于水，水溶液呈蓝绿色。其在水生生物体中的主要代谢产物为无色孔雀石绿，无色孔雀石绿由于其不溶于水，残留毒性比孔雀石绿更强。

2孔雀石绿常见化合物
商品孔雀石绿染料，是将色素溶于热草酸溶液，冷却后得草酸盐的结晶，2C23H24N2•C2H2O4。或用盐酸中和后，加定量的氯化锌ZnCl2结晶出氯化锌复盐3C23H25N2Cl•2ZnCl2，成为绿色碱性染料。

3孔雀石绿禁用原因
孔雀石绿过去常被用于制陶业、纺织业、皮革业、食品颜色剂和细胞化学染色剂，1933年起其作为驱虫剂、杀虫剂、防腐剂在水产中使用，后曾被广泛用于预防与治疗各类水产动物的水霉病、鳃霉病和小瓜虫病。
从上世纪90年代开始，国内外学者陆续发现，孔雀石绿进入水生动物体内后，会快速代谢成脂溶性的无色孔雀石绿。孔雀石绿及其代谢产物无色孔雀石绿具有高毒素、高残留、高致癌和高致畸、致突变等副作用。孔雀石绿能引起鱼类的鳃和皮肤上皮细胞轻度炎症；使肾管腔有轻度扩张，肾小管壁细胞的胞核也扩大；更重要的是影响鱼肠中的酶，使酶的分泌量减少，从而影响鱼的摄食及生长。
鉴于孔雀石绿的危害性，许多国家都将孔雀石绿列为水产养殖禁用药物。其在养殖业中的使用未得到美国食品与药物管理局( FDA ) 的认可；根据欧盟法案2002 /675 /EC的规定，动物源性食品中孔雀石绿和无色孔雀石绿残留总量限制为2μg/kg；日本的肯定列表也明确规定在进口水产品中不得检出孔雀石绿残留；我国也于2002年5月将孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》中，禁止用于所有食品动物。

4孔雀石绿禁而不止的现状
由于没有低廉有效的替代品，孔雀石绿在水产养殖中的使用屡禁不止。尽管我国在2002年前就将孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》中，禁止用于食品动物。但是，到2005年6月，《河南商报》记者对湖北、河南等地的养鱼场和水产品批发市场进行了调查，辽宁《华商晨报》记者对辽宁的养殖场和鱼药商店的调查结果都表明：在水产品的养殖过程中，很多渔民仍然用它来预防鱼的水霉病、鳃霉病、小瓜虫病等；在运输过程中，为了使鳞受损的鱼延长生命，鱼贩也常使用孔雀石绿。至于卖孔雀石绿的鱼药商店，由于孔雀石绿市场的存在，仍然在买卖孔雀石绿。
2005年3月8日，重庆市水产技术推广站水产检疫队在渝中区西三街水产交易市场查获600多只含有致癌药物孔雀石绿的甲鱼。
2005年8月，香港有关部门一连两天在市面抽验29个淡水鱼样本进行测试，当中25个进口淡水鱼样本中，10个证实含有可能致癌的“孔雀石绿”。
2005年11月，继三款“珠江桥牌豆豉鲮鱼罐头”被查出含致癌物孔雀石绿后，香港食物环境卫生署公布的食物最新测试结果显示，“鹰金钱”牌金奖豆豉鲮鱼和甘竹牌豆豉鲮鱼等三个食物样本被查出含有致癌物“孔雀石绿”。
2006年11月17日，上海媒体率先报道了山东产多宝鱼药残超标情况。11月27日，农业部确认，山东省3家企业，在养殖过程中违规使用了氯霉素、孔雀石绿、硝基呋喃类等违禁兽药。
2006年，成都市水务局于11月28日、29日，先后在成都市青石桥水产市场、家乐福超市等市场和蒲江、崇州两地的养殖基地，抽取了10个桂花鱼样本(其中市场环节6个)送检。检测报告显示，3个样本检出禁用渔药霉氯素和孔雀石绿残留。
2006年11月底，香港地区食环署食物安全中心对15个桂花鱼样本进行化验，结果发现11个样本含有孔雀石绿。尽管如此有问题的样本含孔雀石绿分量并不多，多数属“低”或“相当低”水平，但香港食环署仍呼吁市民暂时停食桂花鱼。
2007年9月，广东三水区农业局协同市农产品质量检测中心对三水区养殖户和水产孵化场专项检查发现，三水个别水产养殖户仍存在使用国家明令禁止使用渔药“孔雀石绿”，检查人员对这三宗违法使用“孔雀石绿”事件进行了查处。
2007年4月，山东省日照市一养殖企业正式起诉台湾统一企业股份有限公司及其在山东青岛的独资企业青岛统一饲料农牧有限公司生产的饲料产品“孔雀石绿”超标，并要求赔偿750万元人民币。
该水产养殖场称：一直购买使用青岛统一饲料农牧有限公司生产的“统一”牌多宝鱼饲料。养殖场委托权威部门对使用的“统一”牌多宝鱼饲料进行了检验，结论是该饲料含有大量“孔雀石绿”。正是由于使用了该饲料，才导致所养殖的多宝鱼含有“孔雀石绿”这一违禁成分，并遭受经济损失近千万元。

5孔雀石绿检测方法及标准
孔雀石绿在水生动物体内迅速代谢成无色孔雀石绿，而无色孔雀石绿的毒性甚至超过孔雀石绿，所以通常将孔雀石绿和无色孔雀石绿的总量作为动物源性食品中孔雀石绿残留的限量指标。孔雀石绿的检测方法以理化检测法和免疫学检测法为主。其中理化检测法包括：薄层层析法、分光光度法、高压液相色谱法、液相色谱质谱联用法、气相色谱质谱联用法等。我国制订了多个有关孔雀石绿检测的国家标准、行业标准和地方标准。
GB/T 19857-2005 《水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》
GB 20361-2006《水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定高效液相色谱荧光检测法》
NY/T 1756-2012 《饲料中孔雀石绿的测定》
SC/T 3021-2004 《水产品中孔雀石绿残留量的测定液相色谱法》
SN/T 1479-2004 《进出口水产品中孔雀石绿残留量检验方法》
SN/T 1768-2006 《水产品中孔雀石绿和结品紫及其代谢产物的快速测定方法》
DB33/T 598-2006 《水产品中孔雀石绿及其代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》

6孔雀石绿检测标准对标准品的描述
在这些标准中，孔雀石绿标准品是个不可或缺的物质，但不同标准对其描述差异较大：

标准代号	名称	纯度	其它描述
GB/T19857-2005	孔雀石绿（MG）	＞98%
GB20361-2006	孔雀石绿（MG）	＞98%	分子式2C2H2O4
NY/T 1756-2012	孔雀石绿草酸盐	≥95%
SC/T3021-2004	孔雀石绿	≥90%	C23H25ClN2，结构式为氯化物
SN/T1479-2004	孔雀石绿	＞98%
SN/T1768-2006	孔雀石绿	＞98%
DB33/T598-2006	孔雀石绿草酸盐	≥98%

7孔雀石绿三胞胎
从上述标准对孔雀石绿的描述可以看出，不同标准所采用的孔雀石绿并不是一种物质，那么，孔雀石绿究竟有哪几种形式，检测时究竟应该采用纯品还是何种化合物？为此，通过一些网站对孔雀石绿进行了一番探究，结果出乎意料！
通过chemicalbook查询关键词“孔雀石绿”得到的查询结果：

CAS	MF	MW	标准品名称
2437-29-8	C52H54N4O12	927	孔雀石绿
569-64-2	C23H25ClN2	364.91	孔雀石绿
510-13-4	C23H26N2O	346.47	孔雀石绿
123333-61-9	C23H27ClN2O	382.93	孔雀石绿盐酸盐

同一个“孔雀石绿”名称竟然有三种物质，分子式、分子量和CAS均不同，可以理解为这是三种不同物质，那么究竟哪种才是孔雀石绿的真正面目呢？

8孔雀石绿不同化合物的真正身份
继续查阅资料……（中间省略N字），通过数小时的努力，终于摸清上述几种化合物的真正身份，确定如下：

CAS	MF	MW	分解后的MF	实际名称
2437-29-8	C26H27N2O6	463.5	C23H25N2•C2HO4• 0.5C2H2O4	孔雀石绿草酸盐
569-64-2	C23H25ClN2	364.91	C23H25N2•Cl^-	孔雀石绿氯化物
510-13-4	C23H26N2O	346.47	C23H25N2•OH^-	孔雀石绿
123333-61-9	C23H27ClN2O	382.93	C23H24N2•OH^-•HCl	孔雀石绿盐酸盐

回过头来看最初的介绍，其实表达也不是非常准确，分子式C23H25CIN2实际应该是孔雀石绿氯化物！

9检测中如何正确选用标准品
尽管检测标准中对孔雀石绿的描述各有不同，实际检测过程中也不可能同时购买好几种不同化合物形式的标准品，但我们可以采用“以不变应万变”的方式，通过折算来计算含量。
目前比较容易采购到的孔雀石绿标准品是CAS号为2437-29-8的孔雀石绿草酸盐，按照SC/T3021-2004进行检测时，要求称取孔雀石绿氯化物0.1000g，如果用孔雀石绿替代时折算公式如下：
0.1000g×463.5/364.91＝0.1270g
也就是说，0.1270g孔雀石绿草酸盐，相当于0.1000g孔雀石绿氯化物。

10后记
首先，想说一句：孔雀石绿，想要看清你的真面目，真不容易！
第二，希望标准制订者能设身处地替广大检验人员想想，在标准中明确所采用的标准品的规格，最好能明确分子式、结构式、分子量和CAS号等信息；
第三，希望国家标准化委员会及各部委，能对同一物质的不同标准进行整理和衔接，尽量做到标准品的统一。