生命科学仪器综合讨论
hi1688
第1楼2007/01/12
严格按操作说明，尤其要注意所有器具要干净，不能有污染。
rat
第2楼2007/01/17
我的体会是除了引物设计和退火温度是PCR的关键外，RT-PCR另一个要注意的是核酸样本的制备，即RNA，要注意不能污染DNA，如污染DNA会影响可比性或出现假阳性或者是多条带（引物设计不在一个外显子内的时候）。设置无RT的对照可以帮助判定是否RNA样本是否污染了DNA。
agneswu
第3楼2007/02/01
1, RNA质量的好坏，主要是避免RNA酶降解RNA咯，玻璃器皿和研钵用180度干热灭菌，塑料器皿用DEPC水处理，RNA质量用OD260/280以及RNA电泳特征带指示，还有最好避免DNA污染（可用DNA酶消化）。2，反转录尽量用等量的RNA,那样后面调内参容易3，内参（一般管家基因都可以，循环数不要太高，太高到了平台期就不准了）4，RT-PCR一般需要提供两个循环数的条带，比如24,285，严格设置各类对照组6，有条件做northern或者荧光定量吧
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